金(jīn)槍魚源性成(chéng)分PCR試(shì)劑(jì)盒(hé)實(shí)驗步驟(zhòu)
：
①產(chǎn)品僅(jǐn)用於(yú)科研取凍存(cún)已(yǐ)裂解的(dí)細(xì)胞(bāo)，室(shì)溫(wēn)放置(zhì)5分(fēn)鐘(zhōng)使(shǐ)其完(wán)全溶解(jiě)。
②兩(liǎng)相分離 每1ml的TRIZOL試劑(jì)裂(liè)解的樣(yàng)品中(zhōng)加入(rù)0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋(gài)。手動劇烈振(zhèn)蕩管(guǎn)體(tǐ)15秒(miǎo)後，15到(dào)30℃孵(fū)育2到3分(fēn)鐘。4℃下(xià)12000rpm離(lí)心15分(fēn)鐘。離心(xīn)後混合液體將分為下(xià)層的紅色酚lvfang相(xiāng)，中間層以及(jí)無色水(shuǐ)相上層。RNA全(quán)部被(bèi)分(fēn)配於(yú)水(shuǐ)相(xiāng)中。水相上(shàng)層的體積大(dà)約(yuē)是匀漿(jiāng)時加入的TRIZOL試(shì)劑(jì)的60%。
③RNA沉(chén)澱 將(jiāng)水(shuǐ)相上(shàng)層轉移(yí)到(dào)一(yī)幹淨無RNA酶的離心(xīn)管中。加等(děng)體(tǐ)積(jī)異(yì)丙醇混合以(yǐ)沉(chén)澱其中的RNA，混(hùn)匀(yún)後(hòu)15到(dào)30℃孵(fū)育10分鐘(zhōng)後(hòu)，於(yú)4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前(qián)不(bù)可(kě)見的RNA沉澱(diàn)將(jiāng)在管(guǎn)底部(bù)和(hé)側壁(bì)上(shàng)形(xíng)成(chéng)膠(jiāo)狀沉澱塊(kuài)。
④RNA清(qīng)洗(xǐ) 移去(qù)上(shàng)清(qīng)液，每(měi)1mlTRIZOL試劑裂(liè)解的樣(yàng)品中加(jiā)入至少1ml的75%乙(yǐ)醇(75%乙醇用DEPCH2O配製)，清洗RNA沉澱。混匀後，4℃下7000rpm離(lí)心5分(fēn)鐘。
⑤RNA幹(gān)燥 小(xiǎo)心(xīn)吸去大(dà)部分(fēn)乙(yǐ)醇(chún)溶(róng)液，使(shǐ)RNA沉澱(diàn)在室溫空氣(qì)中幹燥5-10分鐘(zhōng)。
⑥溶解(jiě)RNA沉澱 溶解RNA時(shí)，先(xiān)加入無RNA酶的水40μl用槍反(fǎn)復吹打幾次(cì)，使其完全(quán)溶(róng)解(jiě)，獲得的RNA溶(róng)液保存(cún)於-80℃待用(yòng)。 1)紫外吸(xī)收(shōu)法測定先用稀(xī)釋(shì)用的TE溶(róng)液將分光光度計(jì)調(tiáo)零。然(rán)後取(qǔ)少量RNA溶液(yè)用(yòng)TE稀(xī)釋(1:100)後(hòu)，讀取(qǔ)其在分光(guāng)光(guāng)度(dù)計260nm和280nm處的(dí)吸收(shōu)值(zhí)，測定(dìng)RNA溶液 濃(nóng)度(dù)和純(chún)度(dù)。