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大鼠骨(gǔ)成型(xíng)蛋(dàn)白2(BMP-2)ELISA試劑(jì)盒對(duì)外源性幹(gān)擾因(yīn)素進行(háng)簡(jiǎn)要說明(míng)
大(dà)鼠骨成型(xíng)蛋白2(BMP-2)ELISA試(shì)劑(jì)盒(hé)對(duì)外源性幹(gān)擾因(yīn)素進行(háng)簡(jiǎn)要說明(míng):
(1)標本(běn)溶(róng)血 要(yào)注(zhù)意避免出(chū)現嚴(yán)重(zhòng)溶(róng)血。血(xiě)紅(hóng)蛋白中含有(yǒu)血紅素基(jī)團,其具有(yǒu)類(lèi)過(guò)氧化(huà)物(wù)的(dí)活性,因(yīn)此,在(zài)以(yǐ)辣根(gēn)過氧化(huà)物酶(méi)(horseradish peroxidase,HRP)為(wéi)標記(jì)酶(méi)的ELISA測(cè)定(dìng)中,如果血清標(biāo)本中(zhōng)血(xiě)紅蛋白(bái)濃度較高(gāo),則(zé)其(qí)就很(hěn)容易在溫育(yù)過程(chéng)中吸附(fù)於(yú)固相,從(cóng)而與(yǔ)後麵(miàn)加(jiā)入(rù)的底(dǐ)物反應顯(xiǎn)色。
(2)標本被細(xì)菌汙染 標本的采集(jí)及(jí)血清(qīng)分離要(yào)注意(yì)盡量(liáng)避免細菌汙染(rǎn)。細(xì)菌(jūn)菌體中除可(kě)能含有內(nèi)源(yuán)酶對測定產(chǎn)生非特(tè)異性(xìng)幹擾(rǎo)外,還可(kě)能對抗原抗體(tǐ)等蛋白產生分解作用(yòng)。另外標本(běn)在保(bǎo)存(cún)中(zhōng)出(chū)現渾(hún)濁或絮狀物(wù)時,應(yīng)離(lí)心沉(chén)澱後(hòu)取上(shàng)清(qīng)檢(jiǎn)測(cè)。
(3)標本(běn)貯存(cún)時(shí)間過長(cháng) 標(biāo)本在低(dī)溫下(xià)保存(cún)時(shí)間(jiān)過長(cháng),IgG可(kě)聚合成多聚體,在間(jiān)接法(fǎ)ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底(dǐ)加(jiā)深(shēn),甚至(zhì)出現假陽性結果(guǒ)。通(tōng)常情(qíng)況(kuàng)下血清(qīng)標(biāo)本(běn)可在(zài)2~8℃下(xià)保存(cún)l周(zhōu),冷凍保(bǎo)存時(shí)間會更長,但對於(yú)抗體或(huò)抗(kàng)原含量低(dī)的標(biāo)本而言,則可能會(huì)因抗(kàng)體(tǐ)掉(diào)價,抗原分(fēn)解(jiě)而(ér)出現(xiàn)假陰(yīn)性結果(guǒ)。
(4)ELISA試劑(jì)盒標本凝固(gù)不(bù)全 血液(yè)通常(cháng)在(zài)采集(jí)後(hòu)半(bàn)小時後(hòu)開始凝(níng)固,18~24h完(wán)全(quán)凝固(gù)。如果在血液(yè)未凝固時即離(lí)心(xīn)分離血(xiě)清(qīng),則可(kě)因纖(xiān)維(wéi)蛋(dàn)白(bái)原非(fēi)特異(yì)吸附於微孔而造(zào)成假(jiǎ)陽性(xìng)結(jié)果(guǒ)。為(wéi)了(liǎo)縮(suō)短標(biāo)本(běn)處理時間,可以(yǐ)在(zài)離心前將血液(yè)標本置(zhì)於溫箱(xiāng)中溫育(yù)或者(zhě)采用帶分離膠的采血管或於采(cǎi)血管中加入(rù)適當(dāng)的(dí)促凝(níng)劑(jì)以(yǐ)加(jiā)速(sù)血(xiě)清的(dí)分離。
(5)冷(lěng)凍(dòng)保存標(biāo)本避(bì)免反復凍融 標本的反復凍融(róng)會因(yīn)其(qí)所產生(shēng)的機(jī)械剪切力(lì)對標(biāo)本中的蛋白等分子(zǐ)產生(shēng)破(pò)壞作用,使(shǐ)抗(kàng)體(tǐ)效(xiào)價(jià)跌落(là)從(cóng)而引起(qǐ)假(jiǎ)陰性結(jié)果,ELISA試(shì)劑(jì)盒(hé)所(suǒ)以測抗體的血清標本(běn)如(rú)需保存(cún)作(zuò)多(duō)次檢(jiǎn)測(cè),宜(yí)少量分(fēn)裝凍(dòng)存(cún)。此(cǐ)外,標(biāo)本在(zài)凍存(cún)時會因(yīn)蛋(dàn)白質(zhì)局部濃縮,分布(bù)不均(jūn),因此重新(xīn)融解的標(biāo)本(běn)必(bì)須(xū)混匀(yún),但(dàn)不(bù)要進行劇(jù)烈振蕩(dàng),反復顛(diān)倒即(jí)可(kě)。
(1)標本(běn)溶(róng)血 要(yào)注(zhù)意避免出(chū)現嚴(yán)重(zhòng)溶(róng)血。血(xiě)紅(hóng)蛋白中含有(yǒu)血紅素基(jī)團,其具有(yǒu)類(lèi)過(guò)氧化(huà)物(wù)的(dí)活性,因(yīn)此,在(zài)以(yǐ)辣根(gēn)過氧化(huà)物酶(méi)(horseradish peroxidase,HRP)為(wéi)標記(jì)酶(méi)的ELISA測(cè)定(dìng)中,如果血清標(biāo)本中(zhōng)血(xiě)紅蛋白(bái)濃度較高(gāo),則(zé)其(qí)就很(hěn)容易在溫育(yù)過程(chéng)中吸附(fù)於(yú)固相,從(cóng)而與(yǔ)後麵(miàn)加(jiā)入(rù)的底(dǐ)物反應顯(xiǎn)色。
(2)標本被細(xì)菌汙染 標本的采集(jí)及(jí)血清(qīng)分離要(yào)注意(yì)盡量(liáng)避免細菌汙染(rǎn)。細(xì)菌(jūn)菌體中除可(kě)能含有內(nèi)源(yuán)酶對測定產(chǎn)生非特(tè)異性(xìng)幹擾(rǎo)外,還可(kě)能對抗原抗體(tǐ)等蛋白產生分解作用(yòng)。另外標本(běn)在保(bǎo)存(cún)中(zhōng)出(chū)現渾(hún)濁或絮狀物(wù)時,應(yīng)離(lí)心沉(chén)澱後(hòu)取上(shàng)清(qīng)檢(jiǎn)測(cè)。
(3)標本(běn)貯存(cún)時(shí)間過長(cháng) 標(biāo)本在低(dī)溫下(xià)保存(cún)時(shí)間(jiān)過長(cháng),IgG可(kě)聚合成多聚體,在間(jiān)接法(fǎ)ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底(dǐ)加(jiā)深(shēn),甚至(zhì)出現假陽性結果(guǒ)。通(tōng)常情(qíng)況(kuàng)下血清(qīng)標(biāo)本(běn)可在(zài)2~8℃下(xià)保存(cún)l周(zhōu),冷凍保(bǎo)存時(shí)間會更長,但對於(yú)抗體或(huò)抗(kàng)原含量低(dī)的標(biāo)本而言,則可能會(huì)因抗(kàng)體(tǐ)掉(diào)價,抗原分(fēn)解(jiě)而(ér)出現(xiàn)假陰(yīn)性結果(guǒ)。
(4)ELISA試劑(jì)盒標本凝固(gù)不(bù)全 血液(yè)通常(cháng)在(zài)采集(jí)後(hòu)半(bàn)小時後(hòu)開始凝(níng)固,18~24h完(wán)全(quán)凝固(gù)。如果在血液(yè)未凝固時即離(lí)心(xīn)分離血(xiě)清(qīng),則可(kě)因纖(xiān)維(wéi)蛋(dàn)白(bái)原非(fēi)特異(yì)吸附於微孔而造(zào)成假(jiǎ)陽性(xìng)結(jié)果(guǒ)。為(wéi)了(liǎo)縮(suō)短標(biāo)本(běn)處理時間,可以(yǐ)在(zài)離心前將血液(yè)標本置(zhì)於溫箱(xiāng)中溫育(yù)或者(zhě)采用帶分離膠的采血管或於采(cǎi)血管中加入(rù)適當(dāng)的(dí)促凝(níng)劑(jì)以(yǐ)加(jiā)速(sù)血(xiě)清的(dí)分離。
(5)冷(lěng)凍(dòng)保存標(biāo)本避(bì)免反復凍融 標本的反復凍融(róng)會因(yīn)其(qí)所產生(shēng)的機(jī)械剪切力(lì)對標(biāo)本中的蛋白等分子(zǐ)產生(shēng)破(pò)壞作用,使(shǐ)抗(kàng)體(tǐ)效(xiào)價(jià)跌落(là)從(cóng)而引起(qǐ)假(jiǎ)陰性結(jié)果,ELISA試(shì)劑(jì)盒(hé)所(suǒ)以測抗體的血清標本(běn)如(rú)需保存(cún)作(zuò)多(duō)次檢(jiǎn)測(cè),宜(yí)少量分(fēn)裝凍(dòng)存(cún)。此(cǐ)外,標(biāo)本在(zài)凍存(cún)時會因(yīn)蛋(dàn)白質(zhì)局部濃縮,分布(bù)不均(jūn),因此重新(xīn)融解的標(biāo)本(běn)必(bì)須(xū)混匀(yún),但(dàn)不(bù)要進行劇(jù)烈振蕩(dàng),反復顛(diān)倒即(jí)可(kě)。
