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組(zǔ)織中(zhōng)總(zǒng)磷酸(suān)鹽(yán)測(cè)試盒實(shí)驗操作(zuò)步(bù)驟
組(zǔ)織中總磷酸(suān)鹽測試盒(hé)實驗操作步(bù)驟:
1. 標(biāo)準品(pǐn)的稀釋與加樣:在酶標包被(bèi)板上(shàng)設標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在(zài)*,第二孔中分別(bié)加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然後(hòu)在*,第(dì)二孔中加(jiā)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液(yè)50μl,混匀;然後從(cóng)*孔(kǒng),第(dì)二孔(kǒng)中各取(qǔ)100μl分別加到(dào)第三孔和第(dì)四(sì)孔,再(zài)在第三(sān),第四孔(kǒng)分別加(jiā)標(biāo)準品稀釋液50μl,混匀;然(rán)後(hòu)在第三孔和(hé)第四孔中(zhōng)先各取50μl棄掉,再(zài)各(gè)取(qǔ)50μl分別加到第(dì)五(wǔ),第六(liù)孔(kǒng)中(zhōng),再在(zài)第(dì)五,第六(liù)孔(kǒng)中分(fēn)別加標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)50ul,混匀(yún);混匀(yún)後從(cóng)第(dì)五,第六孔中(zhōng)各取(qǔ)50μl分別(bié)加(jiā)到第七(qī),第(dì)八孔(kǒng)中(zhōng),再(zài)在第(dì)七(qī),第(dì)八(bā)孔中分別(bié)加標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)50μl,混(hùn)匀(yún)後從(cóng)第(dì)七,第八孔中分(fēn)別取50μl加(jiā)到第九,第(dì)十(shí)孔中,再在(zài)第九(jiǔ)第十(shí)孔(kǒng)分(fēn)別加標準品稀(xī)釋液50μl,混匀後(hòu)從第(dì)九(jiǔ)第(dì)十孔中各取(qǔ)50μl棄掉(diào)。
2. 加(jiā)樣:分別設(shè)空(kōng)白孔(kǒng)(空(kōng)白對(duì)照孔不(bù)加樣品及(jí)酶標試劑,其(qí)餘(yú)各(gè)步(bù)操(cāo)作相同),待測(cè)樣(yàng)品(pǐn)孔(kǒng)。在酶(méi)標(biāo)包(bāo)被(bèi)板(bǎn)上(shàng)待(dài)測樣品(pǐn)孔中先加樣品稀(xī)釋(shì)液(yè)40μl,然(rán)後(hòu)再加待(dài)測樣品10μl(樣品(pǐn)zui終稀(xī)釋度(dù)為5倍(bèi))。加(jiā)樣將樣品(pǐn)加於酶(méi)標(biāo)板孔底(dǐ)部(bù),盡量(liáng)不(bù)觸及孔壁,輕輕(qīng)晃動混匀(yún)。
3. 溫育:用封板(bǎn)膜封(fēng)板後(hòu)置(zhì)37℃溫(wēn)育30分鐘(zhōng)。
4. 配液:將30(48T的20倍(bèi))倍(bèi)濃縮洗滌液用(yòng)蒸(zhēng)餾(liù)水30(48T的(dí)20倍(bèi))倍稀釋後備用(yòng)。
5. 洗滌:小心揭掉封(fēng)板膜,棄去液(yè)體(tǐ),甩(shuǎi)幹,每(měi)孔加滿(mǎn)洗滌(dí)液(yè),靜置(zhì)30秒後(hòu)棄(qì)去(qù),如此重復(fù)5次(cì),拍(pāi)幹。 6. 加酶:每(měi)孔(kǒng)加(jiā)入(rù)酶(méi)標試劑(jì)50μl,空(kōng)白孔(kǒng)除外(wài)。
7. 溫育(yù):操(cāo)作(zuò)同3。
8. 洗滌(dí):操作(zuò)同(tóng)5。
9. 顯色(sè):每(měi)孔(kǒng)先加入顯色劑A50μl,再(zài)加入顯(xiǎn)色劑(jì)B50μl,輕輕震蕩(dàng)混匀(yún),37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止(zhǐ):每(měi)孔加終止(zhǐ)液(yè)50μl,終止反(fǎn)應(此時藍色立(lì)轉黃(huáng)色(sè))。
1. 標(biāo)準品(pǐn)的稀釋與加樣:在酶標包被(bèi)板上(shàng)設標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在(zài)*,第二孔中分別(bié)加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然後(hòu)在*,第(dì)二孔中加(jiā)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液(yè)50μl,混匀;然後從(cóng)*孔(kǒng),第(dì)二孔(kǒng)中各取(qǔ)100μl分別加到(dào)第三孔和第(dì)四(sì)孔,再(zài)在第三(sān),第四孔(kǒng)分別加(jiā)標(biāo)準品稀釋液50μl,混匀;然(rán)後(hòu)在第三孔和(hé)第四孔中(zhōng)先各取50μl棄掉,再(zài)各(gè)取(qǔ)50μl分別加到第(dì)五(wǔ),第六(liù)孔(kǒng)中(zhōng),再在(zài)第(dì)五,第六(liù)孔(kǒng)中分(fēn)別加標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)50ul,混匀(yún);混匀(yún)後從(cóng)第(dì)五,第六孔中(zhōng)各取(qǔ)50μl分別(bié)加(jiā)到第七(qī),第(dì)八孔(kǒng)中(zhōng),再(zài)在第(dì)七(qī),第(dì)八(bā)孔中分別(bié)加標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)50μl,混(hùn)匀(yún)後從(cóng)第(dì)七,第八孔中分(fēn)別取50μl加(jiā)到第九,第(dì)十(shí)孔中,再在(zài)第九(jiǔ)第十(shí)孔(kǒng)分(fēn)別加標準品稀(xī)釋液50μl,混匀後(hòu)從第(dì)九(jiǔ)第(dì)十孔中各取(qǔ)50μl棄掉(diào)。
2. 加(jiā)樣:分別設(shè)空(kōng)白孔(kǒng)(空(kōng)白對(duì)照孔不(bù)加樣品及(jí)酶標試劑,其(qí)餘(yú)各(gè)步(bù)操(cāo)作相同),待測(cè)樣(yàng)品(pǐn)孔(kǒng)。在酶(méi)標(biāo)包(bāo)被(bèi)板(bǎn)上(shàng)待(dài)測樣品(pǐn)孔中先加樣品稀(xī)釋(shì)液(yè)40μl,然(rán)後(hòu)再加待(dài)測樣品10μl(樣品(pǐn)zui終稀(xī)釋度(dù)為5倍(bèi))。加(jiā)樣將樣品(pǐn)加於酶(méi)標(biāo)板孔底(dǐ)部(bù),盡量(liáng)不(bù)觸及孔壁,輕輕(qīng)晃動混匀(yún)。
3. 溫育:用封板(bǎn)膜封(fēng)板後(hòu)置(zhì)37℃溫(wēn)育30分鐘(zhōng)。
4. 配液:將30(48T的20倍(bèi))倍(bèi)濃縮洗滌液用(yòng)蒸(zhēng)餾(liù)水30(48T的(dí)20倍(bèi))倍稀釋後備用(yòng)。
5. 洗滌:小心揭掉封(fēng)板膜,棄去液(yè)體(tǐ),甩(shuǎi)幹,每(měi)孔加滿(mǎn)洗滌(dí)液(yè),靜置(zhì)30秒後(hòu)棄(qì)去(qù),如此重復(fù)5次(cì),拍(pāi)幹。 6. 加酶:每(měi)孔(kǒng)加(jiā)入(rù)酶(méi)標試劑(jì)50μl,空(kōng)白孔(kǒng)除外(wài)。
7. 溫育(yù):操(cāo)作(zuò)同3。
8. 洗滌(dí):操作(zuò)同(tóng)5。
9. 顯色(sè):每(měi)孔(kǒng)先加入顯色劑A50μl,再(zài)加入顯(xiǎn)色劑(jì)B50μl,輕輕震蕩(dàng)混匀(yún),37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止(zhǐ):每(měi)孔加終止(zhǐ)液(yè)50μl,終止反(fǎn)應(此時藍色立(lì)轉黃(huáng)色(sè))。
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