產(chǎn)品(pǐn)中(zhōng)心(xīn)
大鼠(shǔ)ELISA試(shì)劑盒
貨(huò)號：YS-S588
規格：48T／96T
檢(jiǎn)測(cè)原理(lǐ)
試劑盒采(cǎi)用雙抗體一步(bù)夾(jiā)心法(fǎ)酶聯(lián)免疫吸(xī)附試(shì)驗(yàn)（ELISA）。往(wǎng)
預(yù)先包(bāo)被(bèi)活性氧簇(cù)（ROS）抗體(tǐ)的(dí)包(bāo)被微(wēi)孔中(zhōng)，依次加(jiā)入標(biāo)本(běn)，標準(zhǔn)
品(pǐn)，HRP標記的檢測(cè)抗體(tǐ)，經(jīng)過溫(wēn)育並(bìng)徹(chè)底洗滌。用底(dǐ)物(wù)TMB顯色(sè)，
TMB在過氧(yǎng)化物酶的(dí)催(cuī)化下轉化成藍色(sè)，並在(zài)酸的作(zuò)用下(xià)轉(zhuǎn)化成(chéng)最(zuì)終
的黃色。顏色的(dí)深(shēn)淺和(hé)樣品中的(dí)活(huó)性氧簇（ROS）呈(chéng)正(zhèng)相(xiāng)關(guān)。用酶標(biāo)
儀在450nm 波(bō)長(cháng)下測定(dìng)吸(xī)光(guāng)度（OD 值(zhí)），計算(suàn)樣品(pǐn)含量。
樣品收(shōu)集，處理及(jí)保存方(fāng)法
1. 血(xiě)清(qīng)：使(shǐ)用不(bù)含熱(rè)原(yuán)和內(nèi)毒(dú)素的試(shì)管，操(cāo)作過(guò)程中避(bì)免任(rèn)何細
胞(bāo)刺(cì)激，收集(jí)血液後(hòu)，3000 轉離心 10 分鐘(zhōng)將血清和(hé)紅細(xì)胞(bāo)迅(xùn)速小心(xīn)
地分(fēn)離(lí)。
2. 血(xiě)漿：EDTA，檸檬酸(suān)鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離(lí)心 30 分(fēn)鐘取上清(qīng)。
3. 細胞(bāo)上清(qīng)液(yè)：3000 轉(zhuǎn)離(lí)心(xīn) 10 分(fēn)鐘去(qù)除(chú)顆粒(lì)和(hé)聚(jù)合(hé)物。
4. 組織匀(yún)漿(jiāng)：將(jiāng)組織加入適(shì)量(liáng)生理(lǐ)鹽水搗(dǎo)碎(suì)。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分(fēn)鐘
取(qǔ)上清(qīng)。
5. 保存：如果(guǒ)樣本收集(jí)後(hòu)不及時(shí)檢測(cè)，請按一次(cì)用量(liáng)分(fēn)裝(zhuāng)，凍(dòng)存
於-20℃，避免反復(fù)凍(dòng)融(róng)，在(zài)室溫下解凍並(bìng)確(què)保樣品(pǐn)均匀地充分(fēn)解凍(dòng)。
自(zì)備(bèi)物(wù)品
1. 酶(méi)標儀(yí)（450nm）
2. 高(gāo)精度加(jiā)樣(yàng)器及槍頭：0.5-10uL，2-20uL，20-200uL，200-1000uL
3. 37℃恒溫(wēn)箱(xiāng)
操作注意(yì)事項(xiàng)
1. 試(shì)劑盒保存在 2-8℃，使(shǐ)用前室(shì)溫平衡(héng) 20 分鐘。從(cóng)冰箱取出(chū)的
濃(nóng)縮洗滌(dí)液會(huì)有結晶，這屬於(yú)正常(cháng)現象(xiàng)，水浴(yù)加(jiā)熱使(shǐ)結晶完全(quán)溶(róng)解
後(hòu)再使用(yòng)。
2. 實(shí)驗中不(bù)用的(dí)板條應(yīng)立即(jí)放回(huí)自封袋中，密(mì)封(fēng)（低溫幹燥）保(bǎo)
存。
3. 濃度為(wéi) 0 的 S0 號標(biāo)準品即(jí)可視(shì)為(wéi)陰(yīn)性(xìng)對(duì)照(zhào)或(huò)者(zhě)空白；按照說明(míng)
書(shū)操(cāo)作時樣本已經稀(xī)釋(shì) 5 倍，最終(zhōng)結(jié)果(guǒ)乘以 5 才是樣本實際濃(nóng)度。
4. 嚴(yán)格(gé)按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間，加(jiā)液量及(jí)順序(xù)進行(háng)溫(wēn)育(yù)操作。
5. 所有液(yè)體組(zǔ)分使用(yòng)前(qián)充分(fēn)搖匀。
試劑的準備
20×洗滌(dí)緩(huǎn)衝液的稀釋(shì)：蒸餾水(shuǐ)按 1：20 稀釋，即(jí) 1 份(fèn)的(dí) 20×洗滌(dí)
緩衝液(yè)加(jiā) 19 份(fèn)的蒸餾水(shuǐ)。
洗(xǐ)板(bǎn)方法
1. 手(shǒu)工洗(xǐ)板：甩(shuǎi)盡孔(kǒng)內液(yè)體，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌(dí)液，靜置(zhì) 1min 後甩盡
孔內(nèi)液體，在吸水紙(zhǐ)上(shàng)拍幹，如此洗板 5 次。
2. 自動洗(xǐ)板機：每孔注(zhù)入(rù)洗液(yè) 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操(cāo)作(zuò)步驟(zhòu)
1. 從室(shì)溫平(píng)衡 20min 後的鋁箔袋中(zhōng)取(qǔ)出(chū)所(suǒ)需(xū)板條，剩餘板條用自
封袋密(mì)封放(fàng)回 4℃。
2. 設置標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)孔和(hé)樣(yàng)本孔(kǒng)，標準品孔(kǒng)各(gè)加不同濃度的標(biāo)準品 50μ
L；
3. 樣本孔(kǒng)先(xiān)加待(dài)測(cè)樣本(běn) 10μL，再加(jiā)樣本稀釋液 40μL；空(kōng)白孔(kǒng)不(bù)
加(jiā)。
4. 除(chú)空白(bái)孔(kǒng)外，標準品孔和樣(yàng)本(běn)孔(kǒng)中每(měi)孔加入辣根(gēn)過(guò)氧(yǎng)化物(wù)酶(méi)
（HRP）標記(jì)的(dí)檢(jiǎn)測抗(kàng)體 100μL，用(yòng)封(fēng)板(bǎn)膜(mó)封住(zhù)反(fǎn)應孔，37℃水浴鍋
或恒溫箱(xiāng)溫育(yù) 60min。
5. 棄去(qù)液體(tǐ)，吸水紙上拍幹，每(měi)孔(kǒng)加滿洗滌(dí)液(yè)，靜(jìng)置 1min，甩去(qù)
洗(xǐ)滌液(yè)，吸水紙上拍幹(gān)，如此重(zhòng)復(fù)洗板 5 次（也(yě)可用洗板機洗(xǐ)板）。
6. 每(měi)孔加入底物(wù) A，B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔(kǒng)加(jiā)入終止(zhǐ)液 50μL，15min 內，在 450nm 波(bō)長處測(cè)定各孔的(dí)
OD 值。
大鼠(shǔ)（Rat）活性(xìng)氧簇（ROS）ELISA 檢(jiǎn)測試(shì)劑盒(hé)結(jié)果(guǒ)判(pàn)斷
繪製標(biāo)準(zhǔn)曲綫(xiàn)：在 Excel 工作(zuò)表中，以標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)濃度作橫坐(zuò)標，對應
OD 值作縱(zòng)坐標，繪製出(chū)標準品(pǐn)綫性(xìng)回(huí)歸曲綫，按(àn)曲綫方程(chéng)計算各(gè)樣(yàng)
本濃(nóng)度(dù)值(zhí)。
