技術文獻
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圓弧青黴PCR檢測試劑盒RNA質量檢測:
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然後取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)後,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。具體計算如下:
RNA溶於40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495的TE中,測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
取5ul用來測量以後,剩餘樣品RNA為35 l,剩餘RNA總量為:
35 l × 0.84 gl = 29.4 g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值範圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①製膠
1g瓊脂糖溶於72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩衝液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
10×MOPS電泳緩衝液
濃度 成分
0.4M MOPS,pH 7.0
0.1M 乙酸鈉
0.01M EDTA
灌製凝膠板,預留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝後取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內,加足量的1×MOPS電泳緩衝液至覆蓋膠麵幾個毫米。
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