小鼠(shǔ)細菌脂多(duō)糖 (LPS)酶聯免(miǎn)疫分(fēn)析

貨號：EY-15H162
規(guī)格(gé)：96T
檢測範(fàn)圍：10ng/L -320ng/L

使用目的：

本(běn)試劑(jì)盒(hé)用於測定小(xiǎo)鼠(shǔ)血(xiě)清，血(xiě)漿(jiāng)及(jí)相(xiāng)關液體樣本(běn)中細菌脂(zhī)多(duō)糖(táng) (LPS)含量。

實驗原(yuán)理(lǐ)

本試劑(jì)盒應(yīng)用雙(shuāng)抗體(tǐ)夾心法測定標本(běn)中(zhōng)小(xiǎo)鼠細菌脂(zhī)多(duō)糖(táng) (LPS)水(shuǐ)平。用(yòng)純化(huà)的(dí)小(xiǎo)鼠細菌(jūn)

脂多(duō)糖(táng) (LPS)抗體(tǐ)包(bāo)被微孔(kǒng)板(bǎn)
，製(zhì)成(chéng)固相抗體(tǐ)
，往包(bāo)被單抗的(dí)微(wēi)孔中依(yī)次(cì)加入(rù)細(xì)菌脂(zhī)多糖

(LPS)
，再與 HRP 標記(jì)的細菌(jūn)脂(zhī)多(duō)糖(táng) (LPS)抗體結合
，形成抗體(tǐ)-抗(kàng)原(yuán)-酶標抗(kàng)體(tǐ)復合物
，經

過徹(chè)底洗(xǐ)滌後加底(dǐ)物 TMB 顯(xiǎn)色(sè)。TMB 在 HRP 酶的催(cuī)化下轉化成藍色
，並在(zài)酸的作用(yòng)下(xià)轉(zhuǎn)

化(huà)成最終的黃(huáng)色(sè)。顏色的(dí)深淺和(hé)樣品中的細(xì)菌脂(zhī)多糖(táng) (LPS)呈正相(xiāng)關(guān)。用酶標儀(yí)在(zài) 450nm

波長(cháng)下(xià)測定吸光(guāng)度（OD 值(zhí)）
，通過(guò)標(biāo)準曲綫(xiàn)計(jì)算樣品中(zhōng)小鼠細(xì)菌脂多(duō)糖 (LPS)濃(nóng)度。

試劑盒(hé)組成(chéng)

1 30 倍濃(nóng)縮洗(xǐ)滌液 20ml×1 瓶(píng) 7 終(zhōng)止液(yè) 6ml×1 瓶(píng)

2 酶標(biāo)試(shì)劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準品(pǐn)（640ng/L） 0.5ml×1 瓶(píng)

3 酶標包(bāo)被(bèi)板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋(shì)液(yè) 1.5ml×1 瓶(píng)

4 樣(yàng)品稀釋(shì)液 6ml×1 瓶 10 說明(míng)書 1 份

5 顯色(sè)劑 A 液(yè) 6ml×1 瓶(píng) 11 封板膜 2 張

6 顯(xiǎn)色劑 B 液(yè) 6ml×1/瓶 12 密封(fēng)袋 1 個(gè)

標本(běn)要求

1．標(biāo)本(běn)采集後盡早進(jìn)行(háng)提取
，提取按相(xiāng)關(guān)文(wén)獻(xiàn)進行(háng)
，提取後應盡(jìn)快(kuài)進行(háng)實驗(yàn)。若不能(néng)

馬上進行試(shì)驗(yàn)
，可將(jiāng)標本放於-20℃保存
，但(dàn)應避免反復凍融

2．不(bù)能檢(jiǎn)測(cè)含 NaN3 的樣品(pǐn)
，因(yīn) NaN3 抑(yì)製辣(là)根過氧化(huà)物(wù)酶(méi)的(dí)（HRP）活性(xìng)。

操(cāo)作(zuò)步(bù)驟(zhòu)

1. 標準品(pǐn)的稀釋(shì)：本試劑(jì)盒提供(gōng)原(yuán)倍標(biāo)準品(pǐn)一(yī)支(zhī)
，用戶(hù)可(kě)按照下列圖表(biǎo)在小試管(guǎn)中進行(háng)稀(xī)

釋。

320ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品(pǐn)加(jiā)入 150μl 標準品稀(xī)釋液

160ng/L 4 號(hào)標準品 150μl 的(dí) 5 號標準(zhǔn)品加入 150μl 標準(zhǔn)品稀(xī)釋液(yè)

80ng/L 3 號標準品 150μl 的(dí) 4 號標準(zhǔn)品加(jiā)入(rù) 150μl 標(biāo)準品稀釋液

40ng/L 2 號標準品(pǐn) 150μl 的(dí) 3 號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋液

20ng/L 1 號標準(zhǔn)品 150μl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液

2. 加樣：分別(bié)設空(kōng)白孔（空(kōng)白對(duì)照孔不(bù)加(jiā)樣品及酶(méi)標試(shì)劑
，其(qí)餘(yú)各步(bù)操作相同），標準孔(kǒng)，

待(dài)測樣品孔。在(zài)酶標包被板上標(biāo)準品準確加樣(yàng) 50μl
，待測樣(yàng)品(pǐn)孔中先加(jiā)樣品稀釋液 40μl
，

然後再加(jiā)待(dài)測(cè)樣(yàng)品 10μl（樣品(pǐn)最終(zhōng)稀(xī)釋(shì)度為(wéi) 5 倍(bèi)）。加樣(yàng)將(jiāng)樣品加於(yú)酶標(biāo)板孔底(dǐ)部
，盡(jìn)

量不(bù)觸及(jí)孔壁(bì)
，輕(qīng)輕(qīng)晃(huǎng)動(dòng)混匀(yún)。

3. 溫育：用(yòng)封板膜封(fēng)板(bǎn)後(hòu)置(zhì) 37℃溫育(yù) 30 分(fēn)鐘。

4. 配液：將(jiāng) 30 倍濃縮洗滌(dí)液用(yòng)蒸餾水 30 倍稀釋後備(bèi)用(yòng)

5. 洗滌(dí)：小心(xīn)揭(jiē)掉(diào)封(fēng)板膜(mó)
，棄(qì)去(qù)液體
，甩(shuǎi)幹
，每孔(kǒng)加(jiā)滿洗滌液
，靜(jìng)置 30 秒後棄去(qù)
，如此

重復 5 次
，拍(pāi)幹(gān)。

6. 加酶(méi)：每孔加入酶標試劑 50μl
，空白(bái)孔除外。

7. 溫育(yù)：操作同(tóng) 3。

8. 洗滌(dí)：操作同(tóng) 5。

9. 顯(xiǎn)色：每孔先加(jiā)入顯(xiǎn)色(sè)劑 A50μl
，再加(jiā)入(rù)顯色劑 B50μl
，輕輕(qīng)震(zhèn)蕩混匀(yún)
，37℃避光顯色(sè)

10 分鐘(zhōng).

10. 終止(zhǐ)：每孔(kǒng)加終止(zhǐ)液 50μl
，終(zhōng)止反應（此時(shí)藍(lán)色(sè)立轉(zhuǎn)黃(huáng)色）。

11. 測(cè)定：以空(kōng)白孔調零
，450nm 波長依(yī)序(xù)測(cè)量(liáng)各孔的(dí)吸(xī)光(guāng)度(dù)（OD 值）。 測(cè)定應在加終止

液後 15 分(fēn)鐘(zhōng)以(yǐ)內(nèi)進行(háng)。

操(cāo)作程(chéng)序(xù)總結：

計(jì)算

以(yǐ)標(biāo)準物的(dí)濃度為(wéi)橫(héng)坐標
，OD 值為(wéi)縱坐標(biāo)
，在(zài)坐(zuò)標紙上繪出(chū)標準曲(qū)綫(xiàn)
，根據(jù)樣品的(dí)

OD 值(zhí)由(yóu)標準曲(qū)綫查出相應的(dí)濃度；再乘以(yǐ)稀釋(shì)倍(bèi)數(shù)；或用(yòng)標(biāo)準(zhǔn)物(wù)的濃(nóng)度(dù)與 OD 值計(jì)算出標

準(zhǔn)曲綫的直綫回歸方(fāng)程(chéng)式(shì)
，將樣(yàng)品(pǐn)的 OD 值代入方程式
，計算出樣(yàng)品(pǐn)濃(nóng)度(dù)
，再乘以稀釋倍數
，

即(jí)為樣(yàng)品的實際濃度。

注意(yì)事項

1．試(shì)劑(jì)盒(hé)從(cóng)冷藏環境(jìng)中(zhōng)取(qǔ)出(chū)應(yīng)在室溫(wēn)平衡 15-30 分(fēn)鐘(zhōng)後方可(kě)使用
，酶標包被(bèi)板(bǎn)開(kāi)封(fēng)後如未

用完
，板(bǎn)條(tiáo)應(yīng)裝(zhuāng)入密(mì)封袋中保存。

2．濃洗(xǐ)滌液(yè)可(kě)能(néng)會(huì)有結(jié)晶(jīng)析出(chū)
，稀(xī)釋(shì)時可在(zài)水浴中加(jiā)溫助溶(róng)
，洗滌時不影(yǐng)響結果(guǒ)。

3．各步(bù)加樣(yàng)均(jūn)應使(shǐ)用(yòng)加樣器
，並經(jīng)常校對其(qí)準(zhǔn)確(què)性
，以(yǐ)避免試驗(yàn)誤(wù)差。一次加樣(yàng)時(shí)間最好(hǎo)

控製在 5 分(fēn)鐘內
，如(rú)標本數量(liáng)多
，推薦(jiàn)使用(yòng)排(pái)槍(qiāng)加樣(yàng)。

4． 請(qǐng)每(měi)次(cì)測(cè)定的(dí)同時做標準(zhǔn)曲綫
，最(zuì)好做復(fù)孔(kǒng)。如(rú)標(biāo)本中(zhōng)待(dài)測物(wù)質(zhì)含量過高(gāo)（樣本(běn) OD 值(zhí)

大(dà)於標準品孔第(dì)一(yī)孔(kǒng)的 OD 值）
，請(qǐng)先(xiān)用(yòng)樣品稀釋液(yè)稀(xī)釋一(yī)定倍(bèi)數(shù)（n 倍(bèi)）後再測定(dìng)
，計

算(suàn)時請最(zuì)後乘(chéng)以(yǐ)總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封(fēng)板(bǎn)膜隻(zhī)限一次性(xìng)使(shǐ)用
，以避免交叉汙(wū)染。

6．底物請避(bì)光保(bǎo)存(cún)。

7．嚴格(gé)按(àn)照說(shuō)明書的操(cāo)作進行(háng)
，試驗結果(guǒ)判(pàn)定(dìng)必(bì)須(xū)以酶標儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8．所有樣品(pǐn)
，洗滌液(yè)和各種廢棄物都應按傳染(rǎn)物(wù)處(chǔ)理(lǐ)。

9．本(běn)試劑(jì)不同(tóng)批號(hào)組分不得(dé)混(hùn)用。

保存(cún)條(tiáo)件及(jí)有(yǒu)效(xiào)期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個(gè)月