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技術文獻

小鼠骨髓瘤細胞;P3/NSI/1-Ag4-1細胞株培養的無菌技術要點有哪些?

文字:[大][中][小] 2021-6-23    瀏覽次數:816    
小鼠骨髓瘤細胞;P3/NSI/1-Ag4-1細胞株培養的具體無菌技術要點:

1. 實驗開始前,無菌室和無菌操作台需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌,用70%ethanol擦拭無菌操作台麵,並且打開無菌操作台風扇運行10分鐘之後,才可以進行實驗操作。每次操作隻能處理一株細胞株,即使培養基完全相同也不可共用培養基,以避免細胞間汙染或失誤混淆。實驗完成後,請將實驗物品拿出工作台,用70%ethanol再次擦拭無菌操作台麵。操作間隔應該讓無菌操作台運轉10分鐘到15分鐘後,才能進行下一個細胞株的操作。

2. 小心取用無菌實驗物品,避免細菌汙染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處,也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開後,請用手夾住瓶蓋並輕握瓶身,傾斜大約45°角取用,盡量不要將瓶蓋口朝上放置於桌麵。

3. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞,必要物品(試管架,吸管,吸取器或吸管盒等)可以暫時放置,其它實驗用品使用完畢後應移出,有利於空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭後方可帶入無菌操作台內。實驗操作過程應在台麵的中央無菌區域內完成,請勿在邊緣非無菌區域進行操作。

4. 水槽內可添加消毒劑(Zephrin 1:750),需定期更換水槽中的水。
5. 定期檢測下列項目:
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養箱的CO2濃度,溫度,和水盤是否有汙染(水盤的水需用無菌水,每周定時更換)。
5.3. 無菌操作台內的airflow壓力,定期更換紫外綫燈管和HEPA過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000小時/HEPA)。

6. 工作人員應當首先注意自身安全,必須穿戴齊實驗衣和實驗手套後才能進行實驗。對於病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作,並選擇適當等級的無菌操作台進行(至少是Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol的產生,小心有毒性藥品,例如DMSO和TPA等,並避免針頭的傷害等等。

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