試(shì)驗原理：
TRH試(shì)劑(jì)盒(hé)是固相夾(jiā)心(xīn)法酶(méi)聯免疫吸附(fù)實(shí)驗（ELISA）.已知(zhī)TRH濃(nóng)度的(dí)標(biāo)準品，未知濃度的樣品加入微(wēi)孔酶(méi)標(biāo)板(bǎn)內進(jìn)行檢(jiǎn)測。先(xiān)將TRH和生物素標記的抗(kàng)體同時溫育(yù)。洗滌(dí)後(hòu)，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育(yù)和(hé)洗(xǐ)滌(dí)，去除未結(jié)合(hé)的酶(méi)結合(hé)物(wù)，然(rán)後加(jiā)入(rù)底物(wù)A，B，和(hé)酶(méi)結(jié)合物同(tóng)時作用。產(chǎn)生顏色(sè)。顏色的(dí)深淺(qiǎn)和(hé)樣(yàng)品(pǐn)中TRH的(dí)濃度呈比例關係(xì)。
試劑盒(hé)內容及其(qí)配製
試(shì)劑盒成份（2-8℃保存(cún)） 96孔配置 48孔配置(zhì) 配製(zhì)
96/48人(rén)份(fèn)酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊(kuài)板（48T） 即用(yòng)型
塑料(liào)膜板蓋 1塊 半塊 即(jí)用(yòng)型
標(biāo)準品：24ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按說(shuō)明(míng)書(shū)進行稀稀
空白對照 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用(yòng)型
標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋緩衝液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即(jí)用型
生物(wù)素標記(jì)的抗TRH抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
親(qīn)和鏈酶素-HRP 1瓶(píng)（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即(jí)用型(xíng)
洗(xǐ)滌(dí)緩衝液 1瓶(píng)（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按說(shuō)明(míng)書進行(háng)稀(xī)釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
底物B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
終止液(yè) 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
自備材(cái)料
1． 蒸(zhēng)餾水。
2． 加樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩器(qì)及(jí)磁力攪(jiǎo)拌器等。
安全(quán)性
1． 避免(miǎn)直(zhí)接(jiē)接觸終(zhōng)止液(yè)和(hé)底(dǐ)物A，B。一(yī)旦(dàn)接觸到這些液(yè)體，請盡(jìn)快用水(shuǐ)衝洗(xǐ)。
2． 實驗(yàn)中不要(yào)吃(chī)喝，抽(chōu)煙或(huò)使用(yòng)化(huà)妝品(pǐn)。
3． 不要(yào)用嘴吸(xī)取(qǔ)試劑盒裏的任(rèn)何(hé)成份(fèn)。
操(cāo)作注意(yì)事項
1． 試劑應(yīng)按(àn)標簽(qiān)說(shuō)明書儲存(cún)，使用前恢(huī)復到室溫。稀(xī)稀過後的(dí)標準品應(yīng)丟(diū)棄，不可保(bǎo)存(cún)。
2． 實(shí)驗中不用的(dí)板條應(yīng)立(lì)即(jí)放(fàng)回包裝(zhuāng)袋中(zhōng)，密(mì)封(fēng)保(bǎo)存(cún)，以(yǐ)免(miǎn)變質(zhì)。
3． 不(bù)用(yòng)的(dí)其它(tā)試(shì)劑(jì)應包裝(zhuāng)好或蓋好。不同批號(hào)的試劑(jì)不要混(hùn)用。保(bǎo)質(zhì)前(qián)使(shǐ)用。
4． 使(shǐ)用一(yī)次性的吸頭以(yǐ)免交(jiāo)叉(chā)汙(wū)染，吸(xī)取(qǔ)終止液和(hé)底(dǐ)物A，B液時(shí)，避免使(shǐ)用(yòng)帶(dài)金屬(shǔ)部(bù)分的加樣器。
5． 使用幹淨的(dí)塑(sù)料(liào)容器配置(zhì)洗滌液(yè)。使用(yòng)前充(chōng)分(fēn)混匀(yún)試劑盒裏的(dí)各(gè)種成份及(jí)樣(yàng)品(pǐn)。
6． 洗滌(dí)酶(méi)標(biāo)板(bǎn)時(shí)應(yīng)充分(fēn)拍(pāi)幹(gān)，不要將吸水紙(zhǐ)直(zhí)接(jiē)放(fàng)入酶(méi)標(biāo)反(fǎn)應(yīng)孔中吸水(shuǐ)。
7． 底物A應(yīng)揮發，避(bì)免(miǎn)長時(shí)間打(dǎ)開(kāi)蓋(gài)子(zǐ)。底物B對光敏感，避免(miǎn)長(cháng)時(shí)間暴露於(yú)光下。避免用(yòng)手(shǒu)接觸，有(yǒu)毒。實驗完成後應(yīng)立即讀取OD值(zhí)。
8． 加(jiā)入試劑的(dí)順序應(yīng)一(yī)致，以(yǐ)保證所有(yǒu)反(fǎn)應(yīng)板孔溫(wēn)育的(dí)時間(jiān)一樣。
9． 按(àn)照說明書中標明的(dí)時間(jiān)，加(jiā)液的量(liáng)及順(shùn)序進行溫育操(cāo)作(zuò)。
樣品收集，處理及(jí)保(bǎo)存(cún)方法
1， 血清-----操(cāo)作過程(chéng)中避(bì)免任何細(xì)胞(bāo)刺激。使(shǐ)用(yòng)不(bù)含(hán)熱(rè)原和(hé)內毒(dú)素(sù)的試管。收(shōu)集(jí)血(xiě)液(yè)後，1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘將血(xiě)清(qīng)和紅細胞迅速小(xiǎo)心地分離。
2， 血(xiě)漿-----EDTA，檸(níng)檬酸(suān)鹽(yán)，肝素血漿(jiāng)可用於檢測(cè)。1000×g離(lí)心(xīn)30分鐘(zhōng)去除顆(kē)粒(lì)。
3， 細胞(bāo)上清(qīng)液(yè)---1000×g離心10分鐘去(qù)除顆粒(lì)和聚(jù)合(hé)物(wù)。
4， 保存------如(rú)果樣品不立(lì)即使(shǐ)用，應將其分成小(xiǎo)部分-70 ℃保存(cún)，避免(miǎn)反(fǎn)復(fù)冷(lěng)凍。盡可能的不(bù)要使用(yòng)溶(róng)血(xiě)或(huò)高(gāo)血(xiě)脂(zhī)血(xiě)。如果(guǒ)血清(qīng)中(zhōng)大(dà)量(liáng)顆(kē)粒(lì)，檢(jiǎn)測前先離(lí)心或過(guò)濾。不(bù)要在37℃或更高的(dí)溫度加熱(rè)解凍(dòng)。應(yīng)在(zài)室(shì)溫下解(jiě)凍(dòng)並(bìng)確(què)保樣品均(jūn)匀(yún)地(dì)充分(fēn)解凍(dòng)。
試劑的準(zhǔn)備(bèi)
1． 標(biāo)準品：標準品(pǐn)的(dí)係列稀釋應(yīng)在實(shí)驗時(shí)準(zhǔn)備，不(bù)能儲存(cún)。稀(xī)釋前(qián)將(jiāng)標準品振蕩(dàng)混匀(yún)。稀(xī)釋(shì)比例(lì)按下(xià)表中(zhōng)進(jìn)行(háng)：
24 ng/ml （6號標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃(nóng)度不(bù)用稀釋直接(jiē)加入50ul。
12 ng/ml （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的(dí)原(yuán)倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準品稀(xī)釋液
6.0 ng/ml （4號標準品(pǐn)） 100ul的5號標準(zhǔn)品加入(rù)100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液
3.0 ng/ml （3號標(biāo)準品） 100ul的(dí)4號標(biāo)準品加(jiā)入(rù)100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5 ng/ml （2號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的3號(hào)標準品(pǐn)加(jiā)入100ul的(dí)標(biāo)準品稀釋液(yè)
0.75 ng/ml （1號標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)2號(hào)標準品加入(rù)100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀釋液(yè)
0 ng/ml （空(kōng)白(bái)對照） 原始濃度(dù)不(bù)用稀(xī)釋直接(jiē)加入50ul。
2． 洗滌緩衝液(yè)（50×）的(dí)稀(xī)釋：蒸餾水50倍(bèi)稀釋。
操(cāo)作步驟(zhòu)
1． 使(shǐ)用(yòng)前，將(jiāng)所有試劑充分混(hùn)匀(yún)。不要使(shǐ)液(yè)體(tǐ)產(chǎn)生大(dà)量(liáng)的泡(pào)沫，以免(miǎn)加樣時加(jiā)入(rù)大量(liáng)的氣泡(pào)，產生(shēng)加(jiā)樣上的(dí)誤差。
2． 根(gēn)據待(dài)測(cè)樣(yàng)品數量加上標準(zhǔn)品的數量決(jué)定所需的板條數。每個(gè)標(biāo)準品(pǐn)和(hé)空(kōng)白孔(kǒng)建議做(zuò)復孔(kǒng)。每(měi)個(gè)樣品根據(jù)自己(jǐ)的數(shù)量(liáng)來定(dìng)，能使用(yòng)復(fù)孔的(dí)盡量做復(fù)孔(kǒng)。
3． 加入(rù)稀釋好(hǎo)後的(dí)標(biāo)準品50ul於反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)，加入待測樣品(pǐn)50ul於反應(yīng)孔內。立(lì)即(jí)加入50ul的(dí)生物素標記的抗體。蓋(gài)上(shàng)膜(mó)板，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混(hùn)匀，37℃溫育(yù)1小(xiǎo)時。
4． 甩(shuǎi)去孔內(nèi)液體(tǐ)，每孔加滿(mǎn)洗(xǐ)滌液(yè)，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重(zhòng)復(fù)此操作3次(cì)。如(rú)果用洗(xǐ)板機(jī)洗(xǐ)滌(dí)，洗(xǐ)滌次數增加(jiā)一次。
5． 每孔(kǒng)加(jiā)入80ul的(dí)親和鏈酶(méi)素-HRP，輕輕振蕩(dàng)混匀，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌(dí)液(yè)，振(zhèn)蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩(shuǎi)去洗滌(dí)液，用吸水(shuǐ)紙拍幹。重復此操(cāo)作3次。如果用洗板(bǎn)機洗(xǐ)滌，洗滌次(cì)數增(zēng)加一(yī)次(cì)。
7． 每孔(kǒng)加(jiā)入底(dǐ)物A，B各(gè)50ul，輕輕振(zhèn)蕩混匀，37℃溫育(yù)10分鐘。避免光(guāng)照。
8． 取(qǔ)出(chū)酶標板，迅速(sù)加(jiā)入50ul終止(zhǐ)液(yè)，加入終止(zhǐ)液(yè)後應立即測定結果(guǒ)。
9． 在450nm波長(cháng)處(chǔ)測定(dìng)各(gè)孔的(dí)OD值(zhí)。
建議使(shǐ)用(yòng)的實(shí)驗(yàn)方案
 標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)濃度（ng/ml） 
A 24 24 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品
B 12 12 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
C 6.0 6.0 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn)
D 3.0 3.0 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品
E 1.5 1.5 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品
F 0.75 0.75 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品
G 0 0 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn)
H 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn)

局限
6號(hào)標(biāo)準品以上的結果(guǒ)為非綫(xiàn)性的(dí)，根據此標準(zhǔn)曲綫(xiàn)無(wú)法(fǎ)得(dé)到(dào)的結(jié)果(guǒ)。
試(shì)劑盒(hé)性能(néng)
1. 靈(líng)敏度(dù)：zui小的(dí)檢(jiǎn)測濃度小(xiǎo)於1號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)。稀(xī)釋度(dù)的綫(xiàn)性(xìng)。樣(yàng)品(pǐn)綫(xiàn)性(xìng)回(huí)歸(guī)與預期濃度(dù)相(xiāng)關係(xì)數R值為0.990。
2. 特異性(xìng)：不與其它(tā)細(xì)胞因子反應。
3. 重(zhòng)復(fù)性：板內，板(bǎn)間(jiān)變異(yì)係(xì)數(shù)均小(xiǎo)於(yú)10%。
結 果(guǒ) 判 斷 與 分 析(xī)
1，儀器值：於(yú)波長450nm的(dí)酶標儀(yí)上讀取(qǔ)各(gè)孔(kǒng)的(dí)OD值(zhí)
2，以(yǐ)吸光度OD值為縱坐(zuò)標（Y），相應的TRH標準(zhǔn)品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲綫(xiàn)，樣品的TRH含(hán)量可(kě)根據其OD值(zhí)由(yóu)標(biāo)準曲(qū)綫(xiàn)換(huàn)算(suàn)出相應的(dí)濃度(dù)。
3，檢(jiǎn)測(cè)值範(fàn)圍(wéi)：0-24ng/ml
4，敏感度(dù)： 0.1 ng/ml