產(chǎn)品(pǐn)中(zhōng)心
PCR檢測(cè)試(shì)劑盒
商品(pǐn)屬性
| 產品名(míng)稱(chēng) | 英(yīng)文(wén)名稱(chēng) | 貨號 |
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大腸杆菌通用PCR檢測試劑盒 |
Escherichia coliPCR |
YS-P014178 |
分(fēn)類：PCR檢測試(shì)劑盒
儲(chǔ)存(cún)條件(jiàn)：-20℃避(bì)光(guāng)保存，避(bì)免反復(fù)凍融。
運輸：低(dī)溫，避(bì)光(guāng)。
有效期：一(yī)年
貨期：現(xiàn)貨(huò)PCR試劑盒(hé)的有效期一(yī)般(bān)為1年，這是(shì)指(zhǐ)在(zài)適當(dāng)的儲存溫度(dù)下。核(hé)酸擴(kuò)增部分(fēn)的(dí)試(shì)劑(jì)一般要(yào)貯存(cún)於-20℃下，產物(wù)檢(jiǎn)測部(bù)分(fēn)試劑則(zé)貯存於2-8℃。盡量避免反復凍融。
【結果(guǒ)分析條(tiáo)件(jiàn)設定】
u 閾值(zhí)(Threshold)設定：將(jiāng)閾值(zhí)綫設(shè)定在剛好超過(guò)正常(cháng)陰性質(zhì)控(kòng)品(pǐn)擴增曲(qū)綫的(dí)最(zuì)高(gāo)點(diǎn)。
【質控標(biāo)準(zhǔn)】
2. 陽性質控品(pǐn)的檢(jiǎn)測(cè)結果(guǒ)應(yīng)為(wéi)陽性(xìng)，有(yǒu)明顯(xiǎn)的(dí)指數擴增(zēng)期(qī)，Ct值應小(xiǎo)於等(děng)於35；
3. 以上要(yào)求需在一次實驗(yàn)中(zhōng)同時(shí)滿足，否(fǒu)則(zé)該(gāi)次實驗視為無效(xiào)。
【結果判(pàn)斷(duàn)】
2.可(kě)疑：有明顯的指數(shù)擴增期，且(qiě)38≤Ct<40，此時(shí)樣(yàng)本為可疑(yí)樣本；對於(yú)可(kě)疑樣本(běn)建(jiàn)議復核(hé)一次，若(ruò)復核結果Ct<40且(qiě)有(yǒu)指(zhǐ)數擴增期(qī)，則(zé)判(pàn)定為(wéi)陽性(xìng)，否則(zé)判(pàn)定為陰性；
3. 陰性：無指數擴(kuò)增期(qī)，Ct=40或(huò)無Ct值(zhí)均(jūn)判(pàn)定(dìng)為陰(yīn)性(xìng)樣本。
【對(duì)檢驗結(jié)果的(dí)解釋(shì)】
1. 實驗(yàn)室環境(jìng)汙染(rǎn)，試(shì)劑汙(wū)染，樣(yàng)品(pǐn)交(jiāo)叉(chā)汙染會出(chū)現(xiàn)假(jiǎ)陽(yáng)性(xìng)結(jié)果(guǒ)；
2. 試劑(jì)運輸，保存不(bù)當或(huò)試劑(jì)配(pèi)製不(bù)準(zhǔn)確(què)引(yǐn)起的試(shì)劑檢(jiǎn)測效能下降，可(kě)能(néng)會(huì)導(dǎo)致(zhì)出現假陰性結(jié)果(guǒ)。
PCR反應的特異(yì)性(xìng)：
②鹼(jiǎn)基配(pèi)對原(yuán)則；
③Taq DNA聚(jù)合酶(méi)合成反應的(dí)忠實性；
④靶基因的特(tè)異性與(yǔ)保(bǎo)守性。
大腸(cháng)杆菌通用PCR檢測試劑(jì)盒其(qí)中引物與模板(bǎn)的正(zhèng)確(què)結合(hé)是(shì)關鍵。引物(wù)與模板(bǎn)的結合(hé)及(jí)引物(wù)鏈的(dí)延伸(shēn)是遵循(xún)鹼基(jī)配對原(yuán)則的。聚(jù)合酶合(hé)成(chéng)反(fǎn)應(yīng)的(dí)忠(zhōng)實(shí)性(xìng)及Taq DNA聚合酶(méi)耐高(gāo)溫性(xìng)，使(shǐ)反應(yīng)中(zhōng)模板與(yǔ)引(yǐn)物(wù)的結(jié)合(復性)可(kě)以(yǐ)在(zài)較高的溫(wēn)度下進行，結合(hé)的特異(yì)性(xìng)大(dà)大增加(jiā)，被擴(kuò)增的(dí)靶基因(yīn)片段也就能保(bǎo)持(chí)很高的正確度。再(zài)通(tōng)過選擇(zé)特異性和(hé)保守性高(gāo)的(dí)靶基(jī)因(yīn)區，其(qí)特異性程度(dù)就(jiù)更高(gāo)。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生(shēng)成(chéng)量是以(yǐ)指數方式(shì)增加的，能(néng)將(jiāng)皮克(pg=10-12g)量級的(dí)起(qǐ)始待測模板(bǎn)擴(kuò)增到微(wēi)克(ug=10-6g)水平(píng)。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出(chū)一(yī)個靶(bǎ)細(xì)胞(bāo)；在(zài)病(bìng)毒的檢測中，PCR的靈敏(mǐn)度可達3個(gè)RFU(空斑(bān)形(xíng)成單位)；在(zài)細菌學(xué)中zui小(xiǎo)檢(jiǎn)出(chū)率(shuài)為3個(gè)細菌。
(3) 簡(jiǎn)便(biàn)，快(kuài)速
PCR反應(yīng)用(yòng)耐高溫的(dí)Taq DNA聚(jù)合酶，一(yī)次(cì)性地(dì)將反(fǎn)應液加好(hǎo)後，即在DNA擴(kuò)增(zēng)液和(hé)水浴(yù)鍋(guō)上進行變性(xìng)-退火(huǒ)-延(yán)伸反應，一般在2～4 小(xiǎo)時(shí)完成擴(kuò)增(zēng)反應(yīng)。擴增產物一般(bān)用電(diàn)泳(yǒng)分(fēn)析，不(bù)一定要(yào)用同位素，無放(fàng)射性汙(wū)染(rǎn)，易(yì)推廣(guǎng)。
(4) 對(duì)標本(běn)的純(chún)度要求低(dī)
不需要分離病毒或細(xì)菌(jūn)及培養細(xì)胞，DNA 粗製(zhì)品及總RNA均可作(zuò)為擴(kuò)增模板。可直接(jiē)用臨(lín)床標本如血液，體腔液，洗(xǐ)嗽液，毛發，細胞，活(huó)PCR技術概論。
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