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PCR檢測(cè)試(shì)劑(jì)盒(hé)
商品屬(shǔ)性
| 產品名稱 | 規格(gé) | 貨號 |
|
沙(shā)門氏菌(jūn)和痢疾杆菌PCR聯(lián)合測定試(shì)劑盒 |
50T |
YS-P015241 |
儲存條件(jiàn)：-20℃避光(guāng)保存，避(bì)免反(fǎn)復凍(dòng)融。
運(yùn)輸：低(dī)溫(wēn)，避(bì)光。
有效期(qī)：一年
貨(huò)期：現貨PCR試劑盒(hé)的(dí)有效(xiào)期一(yī)般為1年(nián)，這是指在適(shì)當的儲(chǔ)存(cún)溫度(dù)下。核(hé)酸擴(kuò)增(zēng)部(bù)分的(dí)試劑一般(bān)要貯存於-20℃下(xià)，產物(wù)檢(jiǎn)測部分試劑則貯存於2-8℃。盡(jìn)量避免反復(fù)凍(dòng)融。
【結果分(fēn)析條件設定】
u 閾(yù)值(Threshold)設(shè)定(dìng)：將(jiāng)閾值綫(xiàn)設(shè)定(dìng)在(zài)剛(gāng)好超(chāo)過正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲(qū)綫(xiàn)的(dí)最高(gāo)點(diǎn)。
【質(zhì)控(kòng)標(biāo)準】
2. 陽(yáng)性(xìng)質控品的檢(jiǎn)測結(jié)果應為陽性，有明顯(xiǎn)的指(zhǐ)數(shù)擴(kuò)增(zēng)期，Ct值(zhí)應小於等於35；
3. 以(yǐ)上要求需在(zài)一次實驗中(zhōng)同時滿(mǎn)足(zú)，否則(zé)該次(cì)實驗視為(wéi)無效。
【結果(guǒ)判(pàn)斷(duàn)】
2.可(kě)疑：有(yǒu)明(míng)顯(xiǎn)的(dí)指數(shù)擴(kuò)增(zēng)期，且38≤Ct<40，此時(shí)樣(yàng)本(běn)為(wéi)可疑樣(yàng)本(běn)；對於(yú)可疑(yí)樣本(běn)建(jiàn)議(yì)復核一次，若復核結果Ct<40且(qiě)有指(zhǐ)數擴(kuò)增(zēng)期(qī)，則判定為陽性，否(fǒu)則判(pàn)定為陰(yīn)性；
3. 陰性(xìng)：無指數擴(kuò)增期，Ct=40或(huò)無Ct值均(jūn)判(pàn)定為陰(yīn)性樣(yàng)本(běn)。
【對檢(jiǎn)驗結(jié)果(guǒ)的解釋】
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境(jìng)汙(wū)染，試劑汙(wū)染(rǎn)，樣品交叉(chā)汙(wū)染(rǎn)會出現假(jiǎ)陽性結果；
2. 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試(shì)劑配(pèi)製(zhì)不準確引起的試(shì)劑(jì)檢測效能下(xià)降，可(kě)能(néng)會(huì)導致出現假陰性結果(guǒ)。
PCR反(fǎn)應的特異性(xìng)：
②鹼(jiǎn)基配對原(yuán)則；
③Taq DNA聚合(hé)酶合成反(fǎn)應的忠(zhōng)實性；
④靶基因的(dí)特異性與保(bǎo)守性(xìng)。
沙(shā)門氏菌和痢(lì)疾(jí)杆菌PCR聯合測定(dìng)試(shì)劑(jì)盒(hé)其(qí)中(zhōng)引物與(yǔ)模(mó)板(bǎn)的正確結合(hé)是關(guān)鍵。引物(wù)與模(mó)板的結(jié)合及引物(wù)鏈的(dí)延(yán)伸(shēn)是遵循鹼(jiǎn)基配對原(yuán)則的。聚(jù)合酶合成(chéng)反(fǎn)應(yīng)的(dí)忠實(shí)性(xìng)及Taq DNA聚(jù)合酶耐(nài)高溫(wēn)性，使反(fǎn)應中(zhōng)模板(bǎn)與引物的結(jié)合(復(fù)性)可(kě)以(yǐ)在較高的(dí)溫(wēn)度下(xià)進(jìn)行，結(jié)合(hé)的特異性大大(dà)增加，被(bèi)擴增的靶基(jī)因(yīn)片段(duàn)也就能(néng)保持很高的(dí)正(zhèng)確(què)度。再(zài)通過選擇特(tè)異性(xìng)和保守性高(gāo)的靶基因區(qū)，其特(tè)異(yì)性程(chéng)度(dù)就更高(gāo)。
(2) 靈(líng)敏(mǐn)度高(gāo)
PCR產(chǎn)物的生成量是(shì)以(yǐ)指數(shù)方(fāng)式(shì)增(zēng)加(jiā)的(dí)，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測(cè)模板擴(kuò)增(zēng)到微克(kè)(ug=10-6g)水平(píng)。能(néng)從(cóng)100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞(bāo)中檢出(chū)一個靶(bǎ)細(xì)胞(bāo)；在病毒(dú)的檢測中(zhōng)，PCR的靈敏度可(kě)達3個RFU(空斑形成單(dān)位(wèi))；在細(xì)菌(jūn)學中(zhōng)zui小檢出率為(wéi)3個(gè)細菌。
(3) 簡便(biàn)，快速
PCR反(fǎn)應(yīng)用耐(nài)高(gāo)溫(wēn)的Taq DNA聚合(hé)酶，一次(cì)性地將反應(yīng)液加(jiā)好(hǎo)後，即(jí)在DNA擴增液和水浴鍋上進行(háng)變(biàn)性-退(tuì)火-延伸(shēn)反應，一般在2～4 小時完成(chéng)擴增反應。擴(kuò)增產物一(yī)般(bān)用(yòng)電泳分析，不一(yī)定要用(yòng)同位素(sù)，無放(fàng)射性汙(wū)染(rǎn)，易推(tuī)廣。
(4) 對(duì)標本(běn)的純(chún)度要求低
不需(xū)要分離(lí)病(bìng)毒或細菌(jūn)及培(péi)養細(xì)胞，DNA 粗製(zhì)品及(jí)總RNA均可(kě)作(zuò)為擴增模板。可直接用臨(lín)床標本(běn)如(rú)血液，體腔(qiāng)液(yè)，洗(xǐ)嗽液，毛(máo)發，細(xì)胞，活PCR技術(shù)概論。
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