人(rén)新(xīn)布(bù)尼亞(yà)病(bìng)毒（NBV）Elisa試(shì)劑(jì)盒(hé)標本要(yào)求(qiú)
1．標本采集後盡(jìn)早進行提取，提取按相關文獻進行，提取(qǔ)後(hòu)應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗。若(ruò)不能
馬上(shàng)進行試(shì)驗，可將標本(běn)放(fàng)於-20℃保存，但應避(bì)免(miǎn)反復(fù)凍融(róng)
2．不能檢測含(hán)NaN3 的樣(yàng)品，因(yīn)NaN3 抑製辣(là)根(gēn)過(guò)氧化(huà)物酶的（HRP）活(huó)性(xìng)。
操作(zuò)步驟
1. 編(biān)號：將樣(yàng)品對應微(wēi)孔按序(xù)編號(hào)，每(měi)板(bǎn)應設陰性(xìng)對照2 孔，陽性(xìng)對照2 孔，空(kōng)白對照1
孔(kǒng)（空白對(duì)照(zhào)孔(kǒng)不(bù)加(jiā)樣品及(jí)酶(méi)標試劑，其(qí)餘(yú)各步操作(zuò)相同）
2. 加樣：分別(bié)在陰，陽(yáng)性(xìng)對(duì)照孔(kǒng)中(zhōng)加入(rù)陰性(xìng)對照(zhào)，陽性對照50μl。然後在待測(cè)樣(yàng)品孔先(xiān)
加(jiā)樣(yàng)品稀(xī)釋(shì)液(yè)40μl，然後(hòu)再加待測(cè)樣品10μl。加樣(yàng)將樣品(pǐn)加(jiā)於(yú)酶標(biāo)板孔(kǒng)底(dǐ)部，盡(jìn)量不
觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混匀(yún)，
3. 溫(wēn)育：用(yòng)封板膜封(fēng)板後置(zhì)37℃溫(wēn)育(yù)30 分鐘。
4. 配(pèi)液：將30 倍(bèi)濃縮(suō)洗滌液(yè)用(yòng)蒸餾水(shuǐ)30 倍稀釋後(hòu)備用
5. 洗(xǐ)滌：小心揭掉封(fēng)板(bǎn)膜(mó)，棄(qì)去(qù)液(yè)體，甩幹(gān)，每(měi)孔加(jiā)滿洗(xǐ)滌液(yè)，靜置(zhì)30 秒(miǎo)後棄去(qù)，如此(cǐ)
重復5 次(cì)，拍(pāi)幹(gān)。
6. 加(jiā)酶：每孔(kǒng)加(jiā)入(rù)酶(méi)標試(shì)劑(jì)50μl，空白(bái)孔(kǒng)除(chú)外。
7. 溫育(yù)：操作(zuò)同3。
8. 洗滌：操(cāo)作同(tóng)5。
9. 人新布(bù)尼亞(yà)病(bìng)毒（NBV）Elisa試劑(jì)盒顯(xiǎn)色(sè)：每孔先加入顯色劑(jì)A50μl，再(zài)加入顯色劑(jì)B50μl，輕輕震(zhèn)蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃避光顯色
15 分(fēn)鐘.
10. 終(zhōng)止(zhǐ)：每孔(kǒng)加終止液(yè)50μl，終止反應（此時(shí)藍(lán)色立(lì)轉(zhuǎn)黃(huáng)色(sè)）。
11. 測(cè)定：以(yǐ)空(kōng)白空調零，450nm 波長依序測(cè)量(liáng)各(gè)孔的(dí)吸光度（OD 值）。測(cè)定(dìng)應在加(jiā)終(zhōng)止
液(yè)後(hòu)15 分鐘(zhōng)以內進行。