技(jì)術文獻(xiàn)
技術(shù)文(wén)獻(xiàn)
免疫(yì)組(zǔ)化(huà)技(jì)術是一種綜合(hé)定(dìng)性(xìng),定位和定量;形態(tài),機(jī)能和代(dài)謝密(mì)切結合(hé)為一(yī)體的(dí)研(yán)究和(hé)檢測技(jì)術(shù)。在原(yuán)位檢測出病原的(dí)同時,還能觀(guān)察(chá)到(dào)組(zǔ)織(zhī)病變與該(gāi)病原(yuán)的(dí)關係(xì),確認受(shòu)染細胞類型,從(cóng)而有(yǒu)助於了(liǎo)解(jiě)疾病(bìng)的發病(bìng)機(jī)理和病理過程。
免疫(yì)酶組化技(jì)術(shù)是通(tōng)過(guò)共(gòng)價鍵將(jiāng)酶(méi)連接(jiē)在(zài)抗(kàng)體上(shàng),製成酶(méi)標(biāo)抗體(tǐ),再借(jiè)酶對底物的(dí)特(tè)異(yì)催(cuī)化(huà)作(zuò)用(yòng),生(shēng)成(chéng)有色的不(bù)溶性產(chǎn)物或(huò)具(jù)有一(yī)定(dìng)電子(zǐ)密(mì)度(dù)的顆(kē)粒(lì),於普通(tōng)顯微鏡或電鏡(jìng)下(xià)進行細胞(bāo)表麵及(jí)細胞內各種(zhǒng)抗(kàng)原成分(fēn)的(dí)定位,根(gēn)據酶標記(jì)的部位可(kě)將其分為直接法(一(yī)步法),間接(jiē)法(fǎ)(二步(bù)法(fǎ)),橋聯法(fǎ)(多步(bù)法)等,用(yòng)於標記的(dí)抗體(tǐ)可以(yǐ)是用免(miǎn)疫動物製(zhì)備的多(duō)克隆抗體或(huò)特異性單(dān)克(kè)隆抗體,最好是特異性(xìng)強的(dí)高(gāo)效價(jià)的單克隆抗體。直(zhí)接法是(shì)將酶(méi)直(zhí)接(jiē)標(biāo)記(jì)在第(dì)一抗體上,間接(jiē)法(fǎ)是(shì)將(jiāng)酶(méi)標記在第(dì)二抗體上,檢(jiǎn)測(cè)組(zǔ)織細胞內(nèi)的特定抗原物(wù)質(zhì)。目前通(tōng)常(cháng)選用免(miǎn)疫酶(méi)組(zǔ)化間接(jiē)染(rǎn)色法。
那麼,顯色常用的酶為(wéi)辣根過(guò)氧化物酶(HRP),常(cháng)用的顯色(sè)底(dǐ)物為DAB(3,3’-二(èr)氨(ān)基(jī)聯苯(běn)胺),偶(ǒu)爾用(yòng)AEC(3-氨(ān)基-9-乙基(jī)咔(kǎ)唑(zuò))。鹼(jiǎn)性磷酸酶(méi)(AP或AKP)也是目前免疫(yì)診斷(duàn)試(shì)劑(jì)最常用的標記(jì)酶之(zhī)一,穩(wěn)定(dìng)性(xìng)好(hǎo),靈敏(mǐn)度高。免(miǎn)疫組化技術(shù)的應(yīng)用範(fàn)圍(wéi)極為(wéi)廣泛,尤其(qí)在(zài)腫瘤(liú)病(bìng)理診(zhěn)斷中發揮著不可替代(dài)的(dí)作用。通(tōng)過(guò)特異(yì)性(xìng)抗(kàng)體(tǐ)標記,可(kě)以(yǐ)準確區分(fēn)腫瘤(liú)細胞的來源和分化(huà)程(chéng)度(dù),例(lì)如利用細(xì)胞(bāo)角蛋白(CK)標(biāo)記(jì)上皮(pí)源(yuán)性腫瘤,波形(xíng)蛋白(bái)(Vimentin)標記(jì)間葉(yè)組織腫瘤。在神(shén)經病(bìng)理學(xué)領域,膠(jiāo)質(zhì)纖維(wéi)酸(suān)性(xìng)蛋白(bái)(GFAP)能特異(yì)性(xìng)顯(xiǎn)示星(xīng)形膠質細胞,而突觸素(sù)(Syn)則可(kě)用(yòng)於(yú)突觸前末梢的(dí)定位研(yán)究。
此外(wài),免疫(yì)組(zǔ)化(huà)技(jì)術還可用(yòng)於(yú)感染(rǎn)性疾(jí)病的病(bìng)原體(tǐ)檢測(cè)。例(lì)如,針(zhēn)對(duì)EB病毒(dú)潛(qián)伏膜(mó)蛋白(LMP-1)的免(miǎn)疫(yì)組化染色可輔(fǔ)助(zhù)診斷鼻(bí)咽癌(ái),而(ér)針對HPV(人乳頭瘤病(bìng)毒(dú))的免疫標記(jì)則有助於宮頸病變(biàn)的(dí)鑒別診斷(duàn)。在(zài)自(zì)身(shēn)免(miǎn)疫性(xìng)疾病(bìng)研(yán)究中(zhōng),通(tōng)過(guò)檢測組織中免疫復(fù)合物的(dí)沉積(如IgG,IgM,補體(tǐ)C3等(děng)),可以輔(fǔ)助診(zhěn)斷係統(tǒng)性(xìng)紅(hóng)斑狼瘡(chuāng),類風濕關節炎等疾病(bìng)。
隨(suí)著技術(shù)的進(jìn)步(bù),多(duō)重(zhòng)免疫熒(yíng)光(guāng)染色(Multiplex Immunofluorescence)逐漸成為(wéi)研(yán)究熱點。該(gāi)方(fāng)法通過不(bù)同熒(yíng)光(guāng)標記的抗體(tǐ)同時檢測多種抗原,結合高分(fēn)辨(biàn)率共(gòng)聚(jù)焦顯微(wēi)鏡,可在(zài)同一(yī)組織切(qiē)片上實現多(duō)靶點(diǎn)共(gòng)定(dìng)位(wèi)分析,為腫瘤(liú)微環境(jìng),免疫細胞浸潤等研究(jiū)提(tí)供更(gēng)全麵的信(xìn)息。未來(lái),隨(suí)著人(rén)工智能圖像分析技術的發展(zhǎn),免疫組化結(jié)果的(dí)判(pàn)讀(dú)將(jiāng)更加(jiā)標準化和高效(xiào)化,進(jìn)一步推動精準醫(yī)療(liáo)的實(shí)現。
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