大鼠表皮角(jiǎo)化上皮細(xì)胞

大鼠表(biǎo)皮(pí)角化(huà)上(shàng)皮細(xì)胞分離(lí)自(zì)皮膚組(zǔ)織；表皮位於(yú)動物皮膚的外層，由(yóu)胚胎時(shí)期(qī)外胚(pēi)層(céng)形(xíng)成，具有(yǒu)抗摩擦和抗損傷的作用(yòng)。表(biǎo)皮是皮膚(fū)的淺(qiǎn)層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層(céng)扁平(píng)上(shàng)皮構成。從(cóng)基(jī)底層到(dào)表麵可(kě)分為五層(céng)，即基底層，棘(jí)層(céng)，顆(kē)粒層，透明層和角(jiǎo)質層。依(yī)據(jù)細胞(bāo)的分化狀(zhuàng)態，功能類型可以分(fēn)為(wéi)多種細(xì)胞(bāo)類(lèi)型，表(biǎo)皮角化上皮細胞與角質(zhì)形(xíng)成(chéng)細胞核(hé)心(xīn)細胞(bāo)群體(tǐ)本質是(shì)同一(yī)細胞群(qún)體(tǐ)，前者從(cóng)“表皮屬角化(huà)復層(céng)扁平(píng)上(shàng)皮”的組(zǔ)織屬性命名(míng)，後者(zhě)從“合成角蛋白，執行(háng)角化功(gōng)能(néng)”的功(gōng)能特征命名(míng)，二者(zhě)均涵蓋表(biǎo)皮(pí)從(cóng)基底(dǐ)層增殖細胞到(dào)角(jiǎo)質層終(zhōng)末細(xì)胞的(dí)全(quán)分(fēn)化譜係，且(qiě)占(zhān)表皮(pí)細(xì)胞(bāo)總(zǒng)量(liáng)超90%，是(shì)表(biǎo)皮(pí)屏(píng)障(zhàng)功(gōng)能的核心載體。在(zài)這(zhè)一分化譜係中(zhōng)，存(cún)在(zài)明(míng)確的階(jiē)段(duàn)差(chà)異(yì)基(jī)底層細(xì)胞(bāo)是角質形(xíng)成細胞的(dí)“增(zēng)殖源頭”，呈(chéng)柱狀，有完整活性細胞核(hé)，以(yǐ)K5，K14，Ki-67，幹細(xì)胞標(biāo)誌物p63為(wéi)核心，無角化相關(guān)蛋白(bái)，未(wèi)啟動角(jiǎo)化(huà)，一般描述(shù)為角(jiǎo)化形成細胞(bāo)/角質形成細胞/角化(huà)上皮(pí)細(xì)胞等；當細(xì)胞(bāo)遷移(yí)至(zhì)棘(jí)層(céng)中上(shàng)部至顆粒層(céng)，成(chéng)為“角(jiǎo)化(huà)細胞”——這(zhè)是仍含固縮細胞核（但(dàn)細胞器減(jiǎn)少(shǎo)）的(dí)中間(jiān)活細胞，能主動(dòng)合成角(jiǎo)蛋白與(yǔ)絲(sī)聚蛋白(bái)前(qián)體，處(chǔ)於“正(zhèng)在(zài)角化”的(dí)執(zhí)行階(jiē)段，表達切(qiē)換為(wéi)K1，K10為(wéi)主(zhǔ)，同時表(biǎo)達絲(sī)聚(jù)蛋白(bái)前體(tǐ)（絲聚(jù)合(hé)蛋(dàn)白原(yuán)，顆粒(lì)層特(tè)征(zhēng)），轉(zhuǎn)穀氨酰(xiān)胺(àn)酶1（TG1，促(cù)進角(jiǎo)蛋(dàn)白交聯(lián)），Ki-67陰性(xìng)；最終角(jiǎo)化(huà)細胞進一步退化，在角質層形(xíng)成(chéng)“角質(zhì)細胞”（角(jiǎo)質層終末(mò)細(xì)胞），這(zhè)是無(wú)細胞核(hé)，無細胞器的終末(mò)細胞，胞質(zhì)充(chōng)滿交聯(lián)角(jiǎo)蛋白(bái)纖維(wéi)，通過細胞(bāo)間連(lián)接(jiē)構成表皮物理屏障，無(wú)核(hé)相關標誌(zhì)物，以(yǐ)終(zhōng)末成(chéng)熟(shú)標(biāo)誌(zhì)物(wù)兜甲蛋白(bái)，小富脯蛋(dàn)白(bái)（SPRRs）為特征，K1，K10持(chí)續(xù)存在(zài)但無(wú)活性(xìng)合成(chéng)功能(néng)；PCNA是增殖細胞的標誌(zhì)物，表(biǎo)皮角質(zhì)形成細胞(bāo)在基(jī)底層(céng)（增殖活躍區(qū)）可(kě)能(néng)表(biǎo)達PCNA，而(ér)終末分(fēn)化層（角質(zhì)層）可(kě)能(néng)不表達，細(xì)胞(bāo)在不同(tóng)增(zēng)殖狀(zhuàng)態(tài)表達量不一樣；這四(sì)種細胞的核心差異在於分(fēn)化階段（全階段/中(zhōng)間(jiān)態/終末態），形(xíng)態（核與細胞(bāo)器有無/活(huó)性）及功(gōng)能(néng)（增殖/合成/屏障(zhàng)），且存(cún)在“角質(zhì)形(xíng)成(chéng)細胞（表皮角(jiǎo)化上皮細胞(bāo)）包(bāo)含角化細(xì)胞與角質細(xì)胞”的(dí)邏輯關係(xì)。表(biǎo)皮也包含其他非角(jiǎo)化上(shàng)皮(pí)細胞(bāo)黑色素細(xì)胞（Melanocytes），朗格(gé)漢(hàn)斯細胞(bāo)（Langerhanscells），Merkel細胞等。

自(zì)備(bèi)試劑： 0.25%胰(yí)蛋白(bái)酶  ，鼠尾(wěi)膠原(yuán)蛋白(bái)Ⅰ型(xíng)（1×）或(huò)鼠尾膠原(yuán)蛋(dàn)白Ⅰ型(xíng)（1 mg/mL）  ，PBS  ，完全培養基

包被條件(jiàn)： 鼠尾膠原(yuán)Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培養(yǎng)基： 大(dà)鼠表皮角(jiǎo)化上(shàng)皮細胞完(wán)全(quán)培(péi)養基(含(hán)FBS，生長(cháng)添加(jiā)劑，Penicillin，Streptomycin等(děng))

換液(yè)頻率(shuài)： 每2-3天(tiān)換液一次(cì)

生長(cháng)特(tè)性： 貼壁(bì)

細胞(bāo)形態： 上(shàng)皮細胞(bāo)樣(yàng)

傳(chuán)代比(bǐ)例(lì)： 1:2

傳代特性(xìng)： 可(kě)傳(chuán)1-2代左右

消(xiāo)化(huà)液(yè)： 0.25%胰蛋白酶(méi)

大(dà)鼠(shǔ)表(biǎo)皮(pí)角(jiǎo)化(huà)上皮細胞(bāo)體(tǐ)外培養(yǎng)周(zhōu)期(qī)有(yǒu)限(xiàn)；建(jiàn)議使(shǐ)用(yòng)配(pèi)套(tào)的專(zhuān)用(yòng)生長(cháng)培養基(jī)及正確的(dí)操作(zuò)方(fāng)法(fǎ)來(lái)培(péi)養，以此保(bǎo)證該(gāi)細(xì)胞的(dí)最佳培(péi)養狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介(jiè) 實驗室分離的(dí)大(dà)鼠(shǔ)表(biǎo)皮角(jiǎo)化上皮細(xì)胞先中(zhōng)性蛋(dàn)白(bái)酶消(xiāo)化，後胰(yí)蛋(dàn)白(bái)酶(méi)-膠(jiāo)原酶混(hùn)合(hé)消化法(fǎ)製(zhì)備而來，細胞(bāo)總(zǒng)量(liáng)約為(wéi)5×10⁵ cells/瓶(píng)。

質量檢測(cè) 實驗(yàn)室分(fēn)離(lí)的(dí)大鼠表皮角(jiǎo)化(huà)上皮細胞(bāo)經K5免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且(qiě)不含(hán)有(yǒu)HIV-1，HBV，HCV，支(zhī)原體，細(xì)菌，酵母和真菌(jūn)等。