大鼠肌(jī)源性幹細(xì)胞

大(dà)鼠肌源(yuán)性(xìng)幹(gān)細(xì)胞(bāo)分離自(zì)肌肉組(zǔ)織(zhī)；肌(jī)源(yuán)性幹(gān)細胞(bāo)（MDSCs）屬(shǔ)於成體(tǐ)多能幹(gān)細(xì)胞，具有多細胞係(xì)分化(huà)和自我更新(xīn)能力。通過誘導(dǎo)刺激，MDSCs可(kě)以分化為(wéi)脂肪，骨(gǔ)骼(gé)，軟骨，平(píng)滑(huá)肌和神經細(xì)胞(bāo)等(děng)多(duō)種(zhǒng)細胞(bāo)和(hé)組織類(lèi)型；作為基因(yīn)治(zhì)療和組織工程(chéng)的供體(tǐ)細胞，已成為治(zhì)療心(xīn)肌梗死，Duchenne氏肌(jī)營養不良(liáng)等(děng)疾病的研(yán)究熱點(diǎn)；近年(nián)來(lái)，肌源(yuán)性(xìng)幹細(xì)胞在治療尿失(shī)禁(jīn)等方麵的(dí)應(yīng)用逐(zhú)步(bù)得到(dào)重(zhòng)視。需注(zhù)意的是(shì)，肌源性(xìng)幹細(xì)胞主要存在於骨(gǔ)骼肌組(zǔ)織中(zhōng)，隻(zhī)是成熟組織(zhī)的很(hěn)少部分細(xì)胞(bāo)；平(píng)時處於靜(jìng)止(zhǐ)狀(zhuàng)態(tài)，在(zài)細胞應激和組織(zhī)缺失時才會激(jī)活；並且隨(suí)著(zhuó)年(nián)齡的增(zēng)加，所含細胞數量(liáng)逐(zhú)漸(jiàn)減少，而目(mù)前臨床(chuáng)疾(jí)病(bìng)的治(zhì)療(liáo)主要是針對成體進行。肌源(yuán)性幹細胞的體外(wài)擴增對細胞移植(zhí)和幹(gān)細胞介(jiè)導的(dí)基因治療至關重(zhòng)要。對(duì)肌源性幹細胞的擴(kuò)增研(yán)究(jiū)發現，EGF，FGF-2和SCF可以(yǐ)通過(guò)減數分裂或(huò)促使不分(fēn)裂細(xì)胞進入(rù)有絲(sī)分裂周(zhōu)期，從(cóng)而刺激細胞(bāo)增生。更(gēng)重要的是(shì)，細(xì)胞(bāo)因(yīn)子誘導的(dí)體(tǐ)外擴增(zēng)可(kě)以通(tōng)過自(zì)我(wǒ)更新(xīn)不刺激細胞(bāo)分(fēn)化(huà)，從(cóng)而保(bǎo)持幹(gān)細(xì)胞(bāo)表型。

自備試劑： 0.25%胰蛋(dàn)白(bái)酶  ， 多(duō)聚(jù)-L-賴(lài)氨酸溶液（1×）或多聚-L-賴(lài)氨酸(suān)溶液(yè)（10×）  ，PBS  ，完全培養(yǎng)基

包被條件(jiàn)： PLL（0.1 mg/mL）

培養(yǎng)基： 大(dà)鼠肌(jī)源性幹細胞完(wán)全培(péi)養基(含(hán)FBS，生(shēng)長添(tiān)加劑，Penicillin，Streptomycin等)

換液(yè)頻(pín)率： 每(měi)2-3天(tiān)換液一次(cì)

生長(cháng)特(tè)性(xìng)： 貼壁

細胞形態： 梭(suō)形，多角(jiǎo)形

傳(chuán)代(dài)比(bǐ)例： 1:2

傳(chuán)代特性： 可(kě)傳(chuán)5代(dài)左右(yòu)；3代以內(nèi)狀(zhuàng)態最佳(jiā)

消(xiāo)化(huà)液(yè)： 0.25%胰蛋(dàn)白(bái)酶

大鼠(shǔ)肌源性幹(gān)細胞(bāo)體外(wài)培養周期有限(xiàn)；建議使(shǐ)用(yòng)配(pèi)套的專用(yòng)生(shēng)長培養基(jī)及(jí)正確的操作方(fāng)法來培(péi)養，以(yǐ)此保證該細(xì)胞的最佳培(péi)養狀(zhuàng)態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 實驗室分(fēn)離的大(dà)鼠肌源(yuán)性幹細(xì)胞采用膠原酶-中(zhōng)性蛋(dàn)白(bái)酶-胰蛋(dàn)白酶聯合消化(huà)法結合密度梯(tī)度離心(xīn)，差速(sù)貼(tiē)壁法(fǎ)，最後(hòu)通過肌(jī)源性幹(gān)細胞專用培養基(jī)培養篩選(xuǎn)製備而來(lái)，細胞總量(liáng)約為5×10⁵ cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離(lí)的大(dà)鼠(shǔ)肌(jī)源性幹細胞(bāo)經Sca-1免(miǎn)疫熒(yíng)光(guāng)鑒(jiàn)定(dìng)，純度(dù)可(kě)達90%以上，且(qiě)不(bù)含有(yǒu)HIV-1，HBV，HCV，支(zhī)原體，細(xì)菌，酵母和真菌等。