大鼠(shǔ)角(jiǎo)膜上皮細胞(bāo)

大(dà)鼠(shǔ)角(jiǎo)膜(mó)上皮(pí)細胞分(fēn)離自眼(yǎn)角膜(mó)組織(zhī)
；角(jiǎo)膜位於眼(yǎn)球(qiú)前壁(bì)的(dí)一層(céng)透(tòu)明膜(mó)，約(yuē)占纖(xiān)維膜(mó)的(dí)前1/6，從後麵看角膜呈正(zhèng)圓形，從前(qián)麵看(kàn)為(wéi)橫橢(tuǒ)圓形。角(jiǎo)膜厚度(dù)各(gè)部(bù)分不盡相同，中(zhōng)央(yāng)部(bù)最(zuì)薄。角膜有十分(fēn)敏感的(dí)神(shén)經(jīng)末(mò)梢，如(rú)有外物(wù)接觸角膜(mó)，眼(yǎn)瞼(jiǎn)便(biàn)會不由(yóu)自(zì)主(zhǔ)地合上以(yǐ)保(bǎo)護(hù)眼睛(jīng)。為了(liǎo)保持(chí)透(tòu)明，角(jiǎo)膜並(bìng)沒有血(xiě)管，透(tòu)過外界(jiè)空(kōng)氣，淚液(yè)及房(fáng)水(shuǐ)獲取養份及(jí)氧氣(qì)。角膜(mó)分為(wéi)五層，由(yóu)前向(xiàng)後依(yī)次(cì)為上(shàng)皮細(xì)胞層(céng)，前(qián)彈力層，基質層(céng)，後彈(dàn)力層，內皮(pí)細(xì)胞(bāo)層(céng)。其主(zhǔ)要(yào)功能(néng)如下①角(jiǎo)膜(mó)是唯(wéi)一(yī)的(dí)無血管的(dí)組織，具(jù)有透(tòu)明(míng)的(dí)特(tè)性和(hé)合(hé)成許多蛋(dàn)白的功(gōng)能，分三層細胞層(céng)，外(wài)層即(jí)是(shì)上皮(pí)細胞
；②角膜上(shàng)皮細胞能參與(yǔ)先天性免疫，能(néng)感應病原體(tǐ)存(cún)在(zài)並發(fā)出信(xìn)號(hào)從(cóng)而(ér)激活(huó)角膜(mó)防御係統
；③角膜(mó)上(shàng)皮細胞(bāo)能高(gāo)效(xiào)表達醛脫(tuō)氫(qīng)酶(méi)。角膜上(shàng)皮細胞(bāo)的(dí)體外培養(yǎng)對(duì)研(yán)究角膜的生理學(xué)，病理(lǐ)學(xué)，免疫(yì)學以及分子生(shēng)物學(xué)都是(shì)極為(wéi)重要(yào)的手段，常(cháng)用於研究(jiū)細(xì)胞代(dài)謝(xiè)產(chǎn)物(wù)，病毒(dú)感染，各種生(shēng)長因子和(hé)藥物(wù)對(duì)細(xì)胞(bāo)生(shēng)長的影(yǐng)響。

自(zì)備試劑(jì)： 0.25%胰(yí)蛋白(bái)酶(méi)  ，鼠(shǔ)尾膠原蛋白(bái)Ⅰ型(xíng)（1×）或(huò)鼠(shǔ)尾(wěi)膠原蛋白(bái)Ⅰ型(xíng)（1 mg/mL）  ，PBS  ，完全培(péi)養基(jī)

包(bāo)被條(tiáo)件(jiàn)： 鼠(shǔ)尾(wěi)膠原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培(péi)養基： 大鼠角(jiǎo)膜(mó)上(shàng)皮(pí)細(xì)胞完全(quán)培養基(jī)(含(hán)FBS，生長(cháng)添加(jiā)劑，Penicillin，Streptomycin等)

換液頻率(shuài)： 每2-3天換液(yè)一(yī)次(cì)

生(shēng)長特(tè)性(xìng)： 貼壁

細胞形(xíng)態(tài)： 上(shàng)皮細胞(bāo)樣

傳代比例(lì)： 1:2

傳代特性(xìng)： 可(kě)傳1-2代(dài)

消(xiāo)化(huà)液： 0.25%胰(yí)蛋(dàn)白酶

大鼠(shǔ)角膜上皮細胞體(tǐ)外(wài)培養周期(qī)有(yǒu)限(xiàn)
；建議使用配套(tào)的(dí)專(zhuān)用生(shēng)長培(péi)養基及(jí)正確(què)的操作(zuò)方(fāng)法來培養，以此保證(zhèng)該細胞的最佳(jiā)培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗室分離(lí)的大鼠角膜上皮(pí)細胞采用胰蛋白(bái)酶(méi)-膠原酶(méi)混(hùn)合(hé)消化(huà)法結合差速貼(tiē)壁(bì)法，並通過(guò)上皮細(xì)胞(bāo)專用(yòng)培(péi)養(yǎng)基培養(yǎng)篩選製(zhì)備(bèi)而來(lái)，細胞總量約(yuē)為5×10⁵ cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實(shí)驗室(shì)分(fēn)離(lí)的大(dà)鼠(shǔ)角膜上皮細胞經PCK免(miǎn)疫熒光(guāng)鑒定(dìng)，純(chún)度可(kě)達90%以上，且不(bù)含有(yǒu)HIV-1，HBV，HCV，支原體(tǐ)，細菌(jūn)，酵(jiào)母和真(zhēn)菌等(děng)。