大鼠結腸黏(nián)膜上皮(pí)細(xì)胞

大鼠結腸黏(nián)膜上皮細胞(bāo)分離自(zì)結腸組(zǔ)織；結(jié)腸在右(yòu)髂窩內(nèi)續於盲(máng)腸，在第(dì)3骶椎平麵連(lián)接直腸。結(jié)腸(cháng)分(fēn)升結腸(cháng)，橫(héng)結腸，降結(jié)腸(cháng)和乙(yǐ)狀(zhuàng)結(jié)腸(cháng)4部分，大部分(fēn)固定於腹後壁，結(jié)腸的排列(liè)酷似英(yīng)文(wén)字(zì)母“M”，將小腸(cháng)包(bāo)圍在內。結腸橫切麵(miàn)由內(nèi)到外依次(cì)為黏膜(mó)（上皮層(céng)，固有層，黏膜肌層(céng)），黏膜(mó)下層（疏(shū)鬆結締組織），肌層（內環形(xíng)，外(wài)縱行(háng)兩(liǎng)層平滑(huá)肌），外膜(mó)（纖維膜或漿膜）。腸黏(nián)膜上(shàng)皮(pí)細(xì)胞(bāo)是機(jī)體(tǐ)內(nèi)外(wài)環境的重要屏(píng)障，持續(xù)暴(bào)露於大(dà)量(liáng)抗(kàng)原中(zhōng)，也是機體麵對(duì)病原微生(shēng)物(wù)的(dí)第一道防綫。因此，腸黏(nián)膜上皮細(xì)胞除(chú)有(yǒu)吸收，分泌(mì)和轉運等重(zhòng)要(yào)生(shēng)理功能(néng)之外，在黏(nián)膜先天性(xìng)和(hé)獲得性免疫(yì)防御機製中也(yě)起著(zhuó)重要作(zuò)用(yòng)。腸(cháng)黏膜上皮細胞作為首先接(jiē)觸(chù)抗原的細胞，在(zài)黏膜(mó)免疫(yì)反應的起始階段發(fā)揮關鍵(jiàn)作用，它決定黏(nián)膜免疫(yì)反應的(dí)發(fā)生，性(xìng)質(zhì)和(hé)強(qiáng)度。探討(tǎo)正常結腸黏(nián)膜上皮細胞(bāo)的(dí)分(fēn)離(lí)，體外(wài)培養方(fāng)法，為(wéi)研(yán)究(jiū)腸黏膜上(shàng)皮(pí)細胞以及與腸黏膜相(xiāng)關疾病建立合(hé)適的(dí)細(xì)胞模(mó)型。

自備試劑(jì)： 0.25%胰蛋(dàn)白酶  ，鼠尾膠(jiāo)原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾(wěi)膠(jiāo)原蛋(dàn)白Ⅰ型（1 mg/mL）  ，PBS  ，完(wán)全培養基

包(bāo)被條(tiáo)件： 鼠尾(wěi)膠原(yuán)Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培養基： 大(dà)鼠結腸黏(nián)膜(mó)上皮細(xì)胞完(wán)全(quán)培(péi)養基(jī)(含(hán)FBS，生長(cháng)添加劑(jì)，Penicillin，Streptomycin等)

換液頻(pín)率： 每2-3天換液一(yī)次

生(shēng)長(cháng)特性： 貼壁

細(xì)胞形(xíng)態： 上皮細胞(bāo)樣

傳(chuán)代比例(lì)： 1:2

傳(chuán)代特性： 可傳1-2代(dài)

消(xiāo)化液： 0.25%胰蛋白酶(méi)

大鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞(bāo)體(tǐ)外(wài)培養(yǎng)周期有限(xiàn)；建議使用配套的(dí)專(zhuān)用(yòng)生長(cháng)培(péi)養(yǎng)基(jī)及正確(què)的操(cāo)作(zuò)方法來(lái)培養，以此(cǐ)保證該(gāi)細胞的(dí)最佳培養(yǎng)狀(zhuàng)態。

方法(fǎ)簡介(jiè) 實驗(yàn)室分離的(dí)大鼠(shǔ)結腸黏(nián)膜(mó)上(shàng)皮(pí)細胞(bāo)采用先(xiān)機(jī)械分(fēn)離(lí)法，後(hòu)膠原酶消化法(fǎ)並通過上(shàng)皮細(xì)胞專(zhuān)用(yòng)培(péi)養基培(péi)養篩選製備而(ér)來，細胞(bāo)總量(liáng)約為5×10⁵ cells/瓶。

質(zhì)量(liáng)檢(jiǎn)測 實(shí)驗(yàn)室(shì)分(fēn)離的大鼠結(jié)腸(cháng)黏膜(mó)上皮(pí)細胞經Cytokeratin-18免疫(yì)熒(yíng)光鑒(jiàn)定，純(chún)度(dù)可達(dá)90%以上(shàng)，且不含(hán)有(yǒu)HIV-1，HBV，HCV，支(zhī)原(yuán)體(tǐ)，細(xì)菌(jūn)，酵母和真菌(jūn)等(děng)。