人骨(gǔ)髓來源(yuán)內皮祖(zǔ)細(xì)胞(bāo)

人(rén)骨髓來(lái)源(yuán)內皮祖細(xì)胞分(fēn)離自骨髓(suǐ)；骨(gǔ)髓是機體的(dí)造(zào)血組織(zhī)，位(wèi)於(yú)身體(tǐ)的許(xǔ)多骨骼(gé)內。成年動物(wù)的骨(gǔ)髓(suǐ)分(fēn)兩(liǎng)種紅(hóng)骨(gǔ)髓(suǐ)和(hé)黃骨(gǔ)髓(suǐ)。紅(hóng)骨(gǔ)髓能製造(zào)紅(hóng)細胞，血小板和各種白細胞。血(xiě)小(xiǎo)板(bǎn)有止血(xiě)作用(yòng)，白(bái)細胞能殺(shā)滅與(yǔ)抑(yì)製各(gè)種(zhǒng)病(bìng)原體，包(bāo)括細菌，病(bìng)毒等(děng)；某(mǒu)些淋(lín)巴細胞能製造抗體。因此(cǐ)，骨髓不(bù)但是造(zào)血器官，它還(huán)是重(zhòng)要(yào)的(dí)免(miǎn)疫(yì)器官。骨(gǔ)髓(suǐ)是存(cún)在(zài)於長(cháng)骨（如(rú)肱(gōng)骨(gǔ)，股(gǔ)骨）的骨髓(suǐ)腔和扁(biǎn)平骨（如(rú)髂(qià)骨(gǔ)）的稀鬆骨質(zhì)間(jiān)的網(wǎng)眼中(zhōng)，是一種(zhǒng)海(hǎi)綿狀(zhuàng)的(dí)組織，能產(chǎn)生血細胞(bāo)的骨髓略呈紅(hóng)色(sè)，稱為(wéi)紅(hóng)骨髓。出生時，紅(hóng)骨髓(suǐ)充(chōng)滿(mǎn)全身骨髓腔，隨(suí)著(zhuó)年齡增大(dà)，脂肪細胞增多，相當(dāng)部分紅(hóng)骨髓(suǐ)被(bèi)黃骨髓(suǐ)取代，最後(hòu)幾(jī)乎(hū)隻(zhī)有扁平骨骨(gǔ)髓腔(qiāng)中有(yǒu)紅(hóng)骨(gǔ)髓(suǐ)。內(nèi)皮祖細胞(bāo)是血管內(nèi)皮細胞的前體細胞(bāo)，亦稱(chēng)為(wéi)成(chéng)血管細(xì)胞(bāo)（Angioblast），是一群具(jù)有遊走特性，能進(jìn)一步(bù)增殖(zhí)分(fēn)化的幼稚內皮(pí)細胞，缺(quē)乏成(chéng)熟內皮細胞的(dí)特征性表(biǎo)型，不能形(xíng)成(chéng)管(guǎn)腔(qiāng)樣結構，其功(gōng)能(néng)主要為(wéi)參(cān)與(yǔ)了出生後缺血組織的血管發生(shēng)和(hé)血(xiě)管(guǎn)損傷後(hòu)的(dí)修(xiū)復。研(yán)究顯(xiǎn)示，內皮祖細胞(bāo)在心(xīn)腦血(xiě)管(guǎn)疾病，外(wài)周血管疾病(bìng)，腫(zhǒng)瘤(liú)血管(guǎn)形(xíng)成及創(chuàng)傷愈合等(děng)方(fāng)麵均發(fā)揮(huī)重要作用，並(bìng)為缺(quē)血性(xìng)疾(jí)病的研(yán)究治(zhì)療提供了新(xīn)思路(lù)，EPCs生物學(xué)特(tè)性和治療作用的研究(jiū)成(chéng)為(wéi)這一領(lǐng)域新的(dí)熱點。

自(zì)備(bèi)試(shì)劑： 0.25%胰(yí)蛋(dàn)白酶  ，多聚-L-賴(lài)氨(ān)酸(suān)溶(róng)液(yè)（1×）或多(duō)聚(jù)-L-賴氨酸溶液(yè)（10×）或明膠包被(bèi)液(yè)（1 mg/mL）  ，PBS  ，完(wán)全(quán)培養(yǎng)基

包(bāo)被條件(jiàn)： PLL（0.1 mg/mL）或(huò)明(míng)膠（0.1%）

培養(yǎng)基(jī)： 人骨髓(suǐ)來源內(nèi)皮祖(zǔ)細(xì)胞完(wán)全(quán)培養(yǎng)基(jī)(含FBS，生長(cháng)添加(jiā)劑，Penicillin，Streptomycin等)

換液頻率： 每(měi)2-3天(tiān)換(huàn)液一次

生長特性(xìng)： 貼(tiē)壁

細(xì)胞(bāo)形(xíng)態(tài)： 內皮細胞(bāo)樣

傳(chuán)代比例： 1:2

傳代特(tè)性(xìng)： 可(kě)傳(chuán)2-3代；不建議多次(cì)傳代

消(xiāo)化(huà)液(yè)： 0.25%胰(yí)蛋白酶

人骨髓(suǐ)來(lái)源內(nèi)皮(pí)祖(zǔ)細(xì)胞(bāo)體外培(péi)養(yǎng)周(zhōu)期有限；建議(yì)使用配套(tào)的(dí)專用(yòng)生長培養基及正(zhèng)確的(dí)操(cāo)作(zuò)方法來培(péi)養(yǎng)，以(yǐ)此保證(zhèng)該(gāi)細(xì)胞的(dí)最(zuì)佳培養(yǎng)狀(zhuàng)態(tài)。

方法簡(jiǎn)介(jiè) 實(shí)驗室(shì)分離的人(rén)骨髓(suǐ)來(lái)源(yuán)內(nèi)皮(pí)祖細(xì)胞采用衝洗(xǐ)骨(gǔ)髓(suǐ)，密(mì)度梯(tī)度離(lí)心，差(chà)速(sù)貼壁(bì)法(fǎ)結合(hé)內皮細胞(bāo)專用(yòng)培(péi)養(yǎng)基(jī)培養(yǎng)篩選(xuǎn)製備而(ér)來，細胞(bāo)總量約(yuē)為5×10⁵ cells/瓶。

質量(liáng)檢測 實(shí)驗(yàn)室分(fēn)離的(dí)人骨髓來(lái)源(yuán)內皮祖(zǔ)細胞經CD34免疫熒(yíng)光(guāng)鑒定(dìng)，純度可達(dá)90%以上(shàng)，且不含(hán)有HIV-1，HBV，HCV，支原(yuán)體，細菌(jūn)，酵(jiào)母(mǔ)和真(zhēn)菌(jūn)等。