人外周(zhōu)血(xiě)T淋巴細(xì)胞(bāo)

人外(wài)周(zhōu)血T淋巴(bā)細胞分離自外(wài)周(zhōu)血；外(wài)周血(xiě)是(shì)除骨(gǔ)髓(suǐ)之外(wài)的(dí)血(xiě)液
，臨(lín)床(chuáng)上常(cháng)用(yòng)一些(xiē)方(fāng)法把(bǎ)骨髓中的(dí)造血幹細胞釋(shì)放(fàng)到血(xiě)液(yè)中
，再在從血液(yè)中提取(qǔ)分離得(dé)到造血幹(gān)細胞(bāo)
，我們(mén)把(bǎ)這(zhè)樣得到的(dí)幹細胞(bāo)稱為外周血幹細(xì)胞
，在二十一世紀(jì)初人(rén)類開始的生命方舟(zhōu)計劃(huá)中(zhōng)首(shǒu)次提(tí)出外(wài)周血這(zhè)一(yī)新概念(niàn)。外周血單(dān)個核細(xì)胞（PBMC）即外(wài)周血中(zhōng)具(jù)有單個(gè)核的(dí)細胞
，包括淋巴細(xì)胞(bāo)和單核細(xì)胞。目(mù)前(qián)
，主要的(dí)分(fēn)離(lí)方(fāng)法是(shì)密度梯(tī)度(dù)離心法
，因為血液(yè)中各有形成(chéng)分的比重(zhòng)存(cún)在差(chà)異
，因(yīn)此得以分離出不(bù)同的(dí)細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞(bāo)（T-lymphocyte）來源於骨(gǔ)髓(suǐ)的多能幹(gān)細(xì)胞（胚胎期則來(lái)源(yuán)於卵黃囊和肝(gān)）。在(zài)人(rén)體胚胎(tāi)期和(hé)初生期
，骨髓(suǐ)中的(dí)一(yī)部(bù)分(fēn)多能(néng)幹細胞或前(qián)T細胞遷移到胸腺內(nèi)
，在胸(xiōng)腺激素(sù)的(dí)誘(yòu)導下(xià)分化成(chéng)熟(shú)
，成為具(jù)有免疫活性的T細胞。成(chéng)熟的(dí)T細胞(bāo)經(jīng)血流分布(bù)至外(wài)周(zhōu)免疫器(qì)官的胸腺(xiàn)依(yī)賴區定居
，並可經(jīng)淋巴管，外(wài)周血(xiě)和組織液等進行再(zài)循(xún)環
，發揮細(xì)胞免疫(yì)及免(miǎn)疫(yì)調節等(děng)功(gōng)能。T細胞的再循(xún)環有利於廣泛(fàn)接(jiē)觸進入體內的(dí)抗(kàng)原(yuán)物(wù)質
，加(jiā)強免疫應(yīng)答
，較長期(qī)保(bǎo)持免(miǎn)疫記憶(yì)。T細胞的細胞膜(mó)上(shàng)有許多(duō)不同的標誌(zhì)
，主要是表麵抗(kàng)原和表麵(miàn)受(shòu)體(tǐ)。這(zhè)些表麵標誌(zhì)都是(shì)結(jié)合在(zài)細胞膜上(shàng)的巨蛋白分(fēn)子。多能幹細胞轉(zhuǎn)變(biàn)為淋巴樣前(qián)體細胞（Lymphoid precursor）遷移至胸腺
，在(zài)胸(xiōng)腺(xiàn)素的(dí)誘(yòu)導(dǎo)下
，經(jīng)歷一(yī)係(xì)列(liè)有序的(dí)分(fēn)化(huà)過程(chéng)
，逐(zhú)漸(jiàn)在胸腺發(fā)育成(chéng)熟(shú)為(wéi)識別各(gè)種(zhǒng)抗原(yuán)的T細胞庫。T淋(lín)巴細胞(bāo)進入胸腺後(hòu)首(shǒu)先(xiān)經歷兩個階(jiē)段(duàn)①早期T淋巴細(xì)胞(bāo)發育(yù)階(jiē)段
，即(jí)始(shǐ)祖CIM和CD8雙陰性(xìng)T淋巴細胞（double negative cell, DN）分(fēn)化為(wéi)CD4和(hé)CD8雙陽(yáng)性(xìng)T細胞（double positive cell, DP）；②DP細(xì)胞(bāo)分(fēn)別經(jīng)歷陽性選(xuǎn)擇階段(duàn)和陰(yīn)性選(xuǎn)擇階(jiē)段獲取MHC限(xiàn)製性識別能(néng)力(lì)和對自身抗原的耐(nài)受性
，發(fā)育(yù)為(wéi)其(qí)表麵(miàn)標誌為CD4或CD8的(dí)單陽(yáng)性T細(xì)胞（single positive cell
，SP）
，遷往周(zhōu)圍(wéi)淋巴器(qì)官(guān)定居。T細胞(bāo)是相當復雜的不(bù)均(jūn)一體(tǐ)，又不斷(duàn)在體內(nèi)更新(xīn)，在(zài)同一時間可以(yǐ)存在不(bù)同(tóng)發(fā)育階段或功能的(dí)亞(yà)群
，但(dàn)分(fēn)類(lèi)原(yuán)則和(hé)命名比較(jiào)混(hùn)亂
，尚未統(tǒng)一。按(àn)免疫(yì)應(yīng)答中的(dí)功(gōng)能不(bù)同
，可將(jiāng)T細(xì)胞分成(chéng)若幹亞群
，一致公認的(dí)有1，輔(fǔ)助(zhù)性(xìng)T細胞(bāo)（Helper T cells, Th）
，具(jù)有協助體液免疫和細(xì)胞(bāo)免(miǎn)疫的功能(néng)；2，抑(yì)製性T細胞（Suppressor T cells, Ts）
，具(jù)有抑製(zhì)細胞(bāo)免疫及體液免疫的功能；3，效(xiào)應T細胞(bāo)（Effector T cells, Te）
，具(jù)有釋(shì)放淋巴因子的功能；4，細(xì)胞毒(dú)性T細胞（Cytotoxic T cells, Tc）
，具有殺傷(shāng)靶細胞的功(gōng)能(néng)；5，遲發性變態反(fǎn)應T細(xì)胞（Delayed type hypersensitivity T cells, Td）
，有(yǒu)參(cān)與(yǔ)Ⅳ型變態反應的(dí)作用；放大T細胞（Ta）
，可作(zuò)用於(yú)Th和Ts
，有擴大免疫(yì)效果的(dí)作用(yòng)；6，原始的或(huò)天然T細(xì)胞(bāo)（Virgin or Natural T cells）
，他(tā)們和(hé)抗(kàng)原(yuán)接觸(chù)後分化(huà)成(chéng)效(xiào)應(yīng)T細胞(bāo)和記(jì)憶T細胞；7，記(jì)憶(yì)T細(xì)胞(bāo)（Memory T cell, Tm）
，有(yǒu)記(jì)憶特異性(xìng)抗原刺激的作(zuò)用。T細(xì)胞(bāo)在(zài)體內存活(huó)的(dí)時間可數月至數(shù)年(nián)。其記(jì)憶細胞(bāo)存(cún)活的(dí)時(shí)間則更長。其中
，Th細胞又被稱為CD4+細(xì)胞
，因(yīn)為其(qí)在表(biǎo)麵表達(dá)CD4（cluster of differentiation 4）。通過與(yǔ)MHCⅡ（主要組織相(xiāng)容(róng)性復(fù)合體
，major histocompatibility complex）遞呈(chéng)的多肽(tài)抗原反應被(bèi)激(jī)活(huó)。MHCⅡ在抗(kàng)原遞呈(chéng)細胞(bāo)（antigen presenting cells,APCs）表(biǎo)麵表達。一旦(dàn)激活
，可(kě)以分(fēn)泌(mì)細胞(bāo)因(yīn)子(zǐ)
，調節或者協(xié)助(zhù)免(miǎn)疫(yì)反應。Tc細(xì)胞又名(míng)為CD8+細胞
，其表麵表(biǎo)達CD8。這(zhè)類細胞可以通(tōng)過(guò)MHCI與(yǔ)抗原直(zhí)接結(jié)合。淋巴細胞主(zhǔ)要包(bāo)括T淋巴細胞（CD3+）
，B淋(lín)巴細胞（CD19+）
，NK細胞（CD16+CD56+）。

培養基(jī)： 人(rén)外周血T淋(lín)巴細(xì)胞(bāo)完(wán)全(quán)培養(yǎng)基(基礎培(péi)養基(jī)
，含(hán)IL-2，Penicillin，Streptomycin等)

換液頻(pín)率： 每(měi)2-3天換液(yè)一(yī)次

生(shēng)長特性： 懸(xuán)浮

細(xì)胞形(xíng)態： 圓(yuán)形(xíng)

傳代(dài)比例： 不傳(chuán)代(dài)

傳代(dài)特性(xìng)： 不(bù)建(jiàn)議(yì)傳代

人(rén)外周(zhōu)血T淋巴(bā)細(xì)胞體外(wài)培養(yǎng)周期有(yǒu)限；建議(yì)使用(yòng)配套的(dí)專(zhuān)用(yòng)生(shēng)長培(péi)養基及正(zhèng)確的(dí)操作方法來(lái)培養
，以此保證該細胞的(dí)最(zuì)佳(jiā)培(péi)養(yǎng)狀態(tài)。

人外(wài)周血(xiě)T淋(lín)巴細(xì)胞體(tǐ)外(wài)培(péi)養周(zhōu)期有限；建(jiàn)議(yì)使(shǐ)用配(pèi)套(tào)的(dí)專(zhuān)用(yòng)生(shēng)長培(péi)養基(jī)及(jí)正確的(dí)操(cāo)作方(fāng)法來培(péi)養
，以此保(bǎo)證(zhèng)該細(xì)胞(bāo)的最佳培(péi)養狀態。

方法(fǎ)簡(jiǎn)介(jiè) 實驗室分離的(dí)人(rén)外周血T淋巴細胞采(cǎi)用取外(wài)周血(xiě)，通(tōng)過密(mì)度梯度離(lí)心法(fǎ)結合磁珠(zhū)分選(xuǎn)製(zhì)備而(ér)來
，細胞總量(liáng)約為5×10⁵ cells/瓶(píng)。

質(zhì)量(liáng)檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的(dí)人外周血(xiě)T淋(lín)巴(bā)細胞經(jīng)CD3免疫(yì)熒光鑒(jiàn)定
，純度可(kě)達(dá)90%以上
，且(qiě)不(bù)含有(yǒu)HIV-1，HBV，HCV，支原(yuán)體(tǐ)，細(xì)菌，酵母(mǔ)和(hé)真菌等。