人(rén)真皮(pí)成(chéng)纖維細(xì)胞

人(rén)真皮成纖維細胞分離(lí)自皮膚組織(zhī)內的真皮(pí)層
；皮(pí)膚(fū)組(zǔ)織(zhī)來源(yuán)包(bāo)括(kuò)頭部(bù)
，臉部(bù)
，手
，腳(jiǎo)
，腿
，背(bèi)部(bù)
，腹部(bù)
，包皮等(děng)體(tǐ)表(biǎo)部(bù)位皮膚(fū)，可依據需求(qiú)選(xuǎn)用
；真(zhēn)皮，位(wèi)於表(biǎo)皮(pí)深層，向下與皮下組(zǔ)織相連(lián)，真皮(pí)結締組織的(dí)膠(jiāo)原纖維和彈(dàn)性(xìng)纖維(wéi)互相(xiāng)交織在(zài)一起，埋於基質(zhì)內。其內(nèi)分(fēn)布著各(gè)種結締(dì)組織(zhī)細胞和(hé)大量(liáng)的膠原纖(xiān)維彈性纖維，使皮膚既有(yǒu)彈性，又有韌(rèn)性(xìng)。其(qí)由兩層組成(chéng)——乳頭(tóu)層與(yǔ)網(wǎng)狀(zhuàng)層。真皮(pí)的(dí)結構組成是膠原蛋(dàn)白
，彈性纖(xiān)維(wéi)以及基(jī)質。成纖(xiān)維細胞（Fibroblast）是疏(shū)鬆結締(dì)組織的主(zhǔ)要細(xì)胞成分，由胚胎(tāi)時期的間(jiān)充(chōng)質細胞(bāo)分化而(ér)來(lái)。成纖維細(xì)胞(bāo)較大，輪(lún)廓清楚(chǔ)，多為(wéi)突(tū)起(qǐ)的(dí)紡(fǎng)錘形或星形的扁平(píng)狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形(xíng)，核(hé)仁大(dà)而明顯。成纖(xiān)維(wéi)細(xì)胞(bāo)功(gōng)能活動(dòng)旺(wàng)盛(shèng)，細胞(bāo)質嗜弱(ruò)鹼性，具(jù)明顯(xiǎn)的蛋(dàn)白質合成(chéng)和分泌(mì)活動，在一定條件(jiàn)下，它可(kě)以實現跟(gēn)纖(xiān)維細胞的(dí)互(hù)相轉化
；成纖維細(xì)胞對不(bù)同程(chéng)度(dù)的細胞(bāo)變性(xìng)
，壞死和組織缺損的修復有著十(shí)分(fēn)重(zhòng)要的作用。剛(gāng)分離的真皮(pí)成纖(xiān)維細(xì)胞(bāo)呈(chéng)圓(yuán)形
，折(zhē)光(guāng)性(xìng)良(liáng)好，懸浮(fú)於培(péi)養基(jī)中(zhōng)。30 min細(xì)胞貼壁(bì)，其中部(bù)分(fēn)開始(shǐ)伸出偽(wěi)足，表(biǎo)現為小的(dí)突起
；6 h後細胞(bāo)基本(běn)貼(tiē)壁(bì)完(wán)全，伸展成(chéng)梭(suō)形，胞(bāo)核清晰，分(fēn)布(bù)較均匀(yún)，散在(zài)生長，不聚集(jí)成(chéng)團(tuán)
；細(xì)胞(bāo)生長迅速(sù)，5-7天即呈融合狀態，細胞排(pái)列緊(jǐn)密，有的(dí)交叉(chā)重疊(dié)生長，平(píng)坦(tǎn)
，胞體(tǐ)較(jiào)大(dà)，細胞質(zhì)透明，細(xì)胞(bāo)核較(jiào)大(dà)，呈(chéng)橢圓(yuán)形，顏色(sè)淡。細(xì)胞融合，並(bìng)彼此(cǐ)連接(jiē)成(chéng)網狀(zhuàng)
；細胞(bāo)呈突起(qǐ)的(dí)紡錘形或星(xīng)形(xíng)的扁(biǎn)平(píng)分布。真皮(pí)成纖維細胞在(zài)生理(lǐ)條件下的主要功能包(bāo)括(kuò)構造(zào)和(hé)維持組織的正常形(xíng)態，合成(chéng)和釋放細胞外基質以及組(zǔ)織損(sǔn)傷(shāng)後(hòu)及(jí)時(shí)大量聚集修復(fù)損(sǔn)傷(shāng)組織(zhī)。

自備(bèi)試劑(jì)： 0.25%胰(yí)蛋(dàn)白(bái)酶  
，PBS  
，完全(quán)培(péi)養基

培(péi)養基： 人(rén)真皮成(chéng)纖維(wéi)細胞完(wán)全(quán)培養基(含FBS
，生(shēng)長添加(jiā)劑
，Penicillin
，Streptomycin等)

換液頻率： 每(měi)2-3天(tiān)換液一(yī)次

生(shēng)長特性(xìng)： 貼壁(bì)

細(xì)胞形(xíng)態(tài)： 成(chéng)纖維細胞(bāo)樣(yàng)

傳代比(bǐ)例(lì)： 1:2

傳(chuán)代特性： 可傳5代(dài)左右
；3代(dài)以內(nèi)狀態(tài)最(zuì)佳

消化液(yè)： 0.25%胰蛋(dàn)白(bái)酶(méi)

人真皮(pí)成纖(xiān)維細胞體外培(péi)養(yǎng)周期(qī)有(yǒu)限(xiàn)
；建議使用配(pèi)套(tào)的(dí)專(zhuān)用生長培養基(jī)及(jí)正確(què)的操作(zuò)方法(fǎ)來培(péi)養，以(yǐ)此(cǐ)保證(zhèng)該細胞(bāo)的(dí)最(zuì)佳培養狀態(tài)。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室(shì)分(fēn)離(lí)的人真皮(pí)成纖(xiān)維(wéi)細胞(bāo)采用(yòng)先(xiān)中性(xìng)蛋白酶消(xiāo)化(huà)
，後(hòu)胰蛋白(bái)酶(méi)-膠(jiāo)原(yuán)酶(méi)混合(hé)消化(huà)法結(jié)合(hé)差(chà)速(sù)貼(tiē)壁法製(zhì)備(bèi)而(ér)來，細胞(bāo)總量約為5×10⁵ cells/瓶。

質(zhì)量檢(jiǎn)測(cè) 實驗室分(fēn)離的人(rén)真皮(pí)成(chéng)纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒(jiàn)定，純(chún)度可達90%以上(shàng)，且(qiě)不(bù)含有HIV-1
，HBV
，HCV
，支(zhī)原體(tǐ)
，細菌
，酵母(mǔ)和(hé)真菌(jūn)等(děng)。