人(rén)脂(zhī)肪微血(xiě)管內(nèi)皮(pí)細(xì)胞(bāo)

人脂肪微血(xiě)管(guǎn)內皮細(xì)胞分離(lí)自(zì)人(rén)脂(zhī)肪(fáng)組織(zhī)中(zhōng)的微(wēi)血管(guǎn)，是構成脂肪(fáng)組(zǔ)織微血(xiě)管(guǎn)壁(bì)的核心(xīn)功(gōng)能細胞
。核(hé)心(xīn)功(gōng)能為(wéi)參與脂肪組織內(nèi)的物(wù)質交(jiāo)換和氣體(tǐ)交(jiāo)換，調控脂(zhī)肪組(zǔ)織的(dí)血液循環穩(wěn)態(tài)；分(fēn)泌(mì)多種(zhǒng)血(xiě)管活性物(wù)質和(hé)生長因子(zǐ)，參與脂(zhī)肪(fáng)組(zǔ)織的(dí)生(shēng)長發(fā)育(yù)，代謝(xiè)調控及血(xiě)管新(xīn)生過(guò)程(chéng)，對(duì)維持(chí)脂(zhī)肪組織(zhī)的正常生理功(gōng)能(néng)具(jù)有(yǒu)重要(yào)作用
。功(gōng)能(néng)異常與肥胖，糖尿(niào)病，脂肪代(dài)謝紊亂(luàn)等代謝性(xìng)疾病密切相關(guān)
。原代培養(yǎng)3-4天(tiān)後開始貼壁，初(chū)始形態呈(chéng)圓(yuán)形(xíng)或(huò)短(duǎn)梭形(xíng)；傳(chuán)代後細(xì)胞(bāo)可(kě)穩(wěn)定(dìng)維(wéi)持內(nèi)皮細(xì)胞的典型(xíng)形態(tài)及功能
。是研究脂肪組(zǔ)織代(dài)謝調(tiáo)控(kòng)，代(dài)謝性疾病發病(bìng)機製的重(zhòng)要實驗材料
。

自(zì)備試劑：膠(jiāo)原酶Ⅰ型，PBS緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)，完(wán)全培(péi)養(yǎng)基(jī)，Percoll分離液，VEGF

培養基：人(rén)微(wēi)血(xiě)管(guǎn)內皮細胞(bāo)完(wán)全培(péi)養基(jī)（含(hán)FBS，VEGF，鹼(jiǎn)性(xìng)成纖(xiān)維細胞(bāo)生(shēng)長因子，肝素(sù)，Penicillin，Streptomycin等）

換(huàn)液頻率(shuài)：每(měi)2-3天(tiān)換液一(yī)次(cì)

生長(cháng)特(tè)性：貼壁生長，可(kě)形成(chéng)單層(céng)內(nèi)皮樣(yàng)細胞層

細胞形態：圓形，短梭形，多邊形(xíng)

傳(chuán)代比例(lì)：1:2-1:3

傳(chuán)代(dài)特性：可傳4-6代(dài)；2-4代以內細胞狀態(tài)最佳，功(gōng)能最(zuì)穩定

消(xiāo)化液(yè)：0.25%胰蛋(dàn)白酶(méi)

人(rén)脂肪微(wēi)血(xiě)管(guǎn)內皮(pí)細胞(bāo)體外培養(yǎng)周期(qī)有限(xiàn)；建議(yì)使(shǐ)用(yòng)配套的(dí)專用生長(cháng)培(péi)養基及(jí)正確的操作(zuò)方(fāng)法(fǎ)來培養，以此保證該細胞的(dí)最(zuì)佳培養狀態(tài)
。

方法(fǎ)簡介：實驗室(shì)采用膠原(yuán)酶(méi)消化法(fǎ)結(jié)合(hé)密度(dù)梯度離心(xīn)法及VEGF誘(yòu)導(dǎo)法製備該(gāi)細胞，通過(guò)膠(jiāo)原酶(méi)分解脂肪(fáng)組織釋放(fàng)微(wēi)血(xiě)管(guǎn)片(piàn)段，分離獲得(dé)單個核細(xì)胞後(hòu)，經VEGF誘導分化並純化，最(zuì)終(zhōng)獲得高純(chún)度(dù)的人(rén)脂肪(fáng)微(wēi)血管內(nèi)皮細(xì)胞(bāo)，細胞總(zǒng)量約為5×10⁵ cells/瓶
。

質量(liáng)檢測：經內(nèi)皮(pí)細(xì)胞(bāo)特異性(xìng)標(biāo)誌(zhì)物(wù)（CD31，VEGFR2，Factor Ⅷ）免疫熒(yíng)光鑒(jiàn)定，本細胞純(chún)度(dù)可達90%以上；經體外管(guǎn)腔(qiāng)形(xíng)成實驗驗(yàn)證細(xì)胞(bāo)功能正(zhèng)常；經(jīng)檢測不含有(yǒu)HIV-1，HBV，HCV，支(zhī)原體(tǐ)，細菌(jūn)，酵母和真(zhēn)菌(jūn)等外源汙染(rǎn)物(wù)，細胞活(huó)性(xìng)達標(biāo)
。