兔肝成纖(xiān)維細胞

兔(tù)肝(gān)成(chéng)纖維細(xì)胞分離自兔(tù)肝髒間質組織(zhī)，是(shì)構(gòu)成肝髒(zàng)間(jiān)質的主要(yào)功能(néng)細胞(bāo)。核(hé)心功能為合成(chéng)和分泌膠原蛋白(bái)，彈(dàn)性纖維等細(xì)胞外基質，構建肝髒的結(jié)構(gòu)支架(jià)，維持(chí)肝(gān)髒的形態(tài)穩(wěn)定；分泌(mì)多種細(xì)胞因子(zǐ)，調(tiáo)控(kòng)肝細胞(bāo)的(dí)生(shēng)長，分(fēn)化和修復，參(cān)與肝髒微環境穩態(tài)的維(wéi)持(chí)；在(zài)肝髒損(sǔn)傷後(hòu)可大量增殖(zhí)，參與肝組織的修(xiū)復過程，但過度增(zēng)殖會導致(zhì)肝(gān)纖(xiān)維(wéi)化。功能異(yì)常與(yǔ)肝纖維化，肝硬(yìng)化，肝炎等肝髒疾病密切相(xiāng)關。原(yuán)代(dài)培養(yǎng)2-3天後開(kāi)始(shǐ)貼壁，初(chū)始形態呈短(duǎn)梭(suō)形(xíng)或不(bù)規(guī)則形(xíng)；傳(chuán)代(dài)後細胞生長旺盛(shèng)，可穩(wěn)定(dìng)維持(chí)成(chéng)纖維細胞的典型(xíng)形態及(jí)功能。是(shì)研究(jiū)肝髒(zàng)生理功能，肝(gān)髒(zàng)疾病發病(bìng)機製及(jí)抗肝(gān)纖維(wéi)化(huà)藥(yào)物篩選(xuǎn)的重(zhòng)要實驗材料(liào)。

自(zì)備(bèi)試劑：0.25%胰蛋白酶，膠(jiāo)原酶Ⅰ型，PBS緩衝液，完全(quán)培養(yǎng)基

培養基(jī)：兔肝成纖(xiān)維(wéi)細胞完(wán)全培(péi)養基（含FBS，成(chéng)纖維(wéi)細胞生長(cháng)因子，維生素C，Penicillin，Streptomycin等(děng)）

換液(yè)頻率：每2-3天(tiān)換液一次

生長(cháng)特性：貼(tiē)壁(bì)生(shēng)長

細胞形態(tài)：短梭(suō)形，長梭(suō)形(xíng)

傳(chuán)代比(bǐ)例：1:2-1:3

傳代(dài)特(tè)性：可(kě)傳6-8代(dài)；3-5代以(yǐ)內細(xì)胞狀態最佳，功能最穩定

消化液：0.25%胰蛋白酶

兔肝成(chéng)纖(xiān)維細胞(bāo)體外培(péi)養周(zhōu)期有(yǒu)限；建(jiàn)議使用配(pèi)套(tào)的(dí)專用(yòng)生長(cháng)培養(yǎng)基及正(zhèng)確的操作方(fāng)法來培(péi)養(yǎng)，以此(cǐ)保證該細胞(bāo)的最佳培養狀態(tài)。

方(fāng)法(fǎ)簡(jiǎn)介：實驗(yàn)室采(cǎi)用(yòng)胰(yí)蛋(dàn)白酶(méi)-膠(jiāo)原酶(méi)聯合消化法(fǎ)結合(hé)差速(sù)貼(tiē)壁法製備該(gāi)細胞，通過(guò)特定消化(huà)體(tǐ)係(xì)溫(wēn)和分解兔(tù)肝(gān)髒間質組(zǔ)織，分離獲得(dé)單(dān)個(gè)核細胞(bāo)後，利(lì)用成(chéng)纖維細胞(bāo)與其(qí)他細胞貼(tiē)壁(bì)速度的(dí)差(chà)異(yì)進(jìn)行純(chún)化(huà)，最終獲(huò)得高(gāo)純度的兔(tù)肝(gān)成(chéng)纖維細胞，細胞總量約(yuē)為5×10⁵ cells/瓶(píng)。

質(zhì)量檢測(cè)：經成纖(xiān)維細胞(bāo)特異性標(biāo)誌(zhì)物（波形蛋(dàn)白(bái)Vimentin，FSP1，α-SMA）免疫熒(yíng)光鑒定(dìng)，本細胞純度可達90%以(yǐ)上(shàng)；經(jīng)細(xì)胞(bāo)外基(jī)質分(fēn)泌檢(jiǎn)測驗證細胞功能正(zhèng)常(cháng)；經檢測不含有(yǒu)支(zhī)原體，細(xì)菌(jūn)，酵母(mǔ)和真菌(jūn)等(děng)外源(yuán)汙染物(wù)，細胞活性(xìng)達(dá)標(biāo)。