地(dì)龍(lóng)染料法(fǎ)PCR鑒定(dìng)試劑(jì)盒(hé)反應的特異(yì)性決(jué)定因(yīn)素：
1.引(yǐn)物與模(mó)板DNA特異(yì)正(zhèng)確的結(jié)合。
2.鹼(jiǎn)基配對原(yuán)則(zé)。
3. Tag DNA聚合酶(méi)合成反應(yīng)的忠(zhōng)實性。
4.靶基因的(dí)特異性與保守性(xìng)。
其(qí)中引(yǐn)物(wù)與(yǔ)模(mó)板的正確(què)結合(hé)是關鍵。引物(wù)與(yǔ)模板(bǎn)的結(jié)合及(jí)引(yǐn)物鏈(liàn)的延伸是(shì)遵循鹼(jiǎn)基配(pèi)對原則的(dí)。聚合酶(méi)合(hé)成反應的忠實(shí)性(xìng)及(jí) Tag DNA聚(jù)合(hé)醇耐高(gāo)溫(wēn)性(xìng),使(shǐ)反應中模板(bǎn)與(yǔ)引物的結合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行(háng),結合的特(tè)異(yì)性大大増加加(jiā),被擴(kuò)増的靶(bǎ)基因片段也就(jiù)能保(bǎo)持很(hěn)高的正(zhèng)確度。再通過(guò)選(xuǎn)擇(zé)特異(yì)性(xìng)和保(bǎo)守(shǒu)性(xìng)高的(dí)靶基因區(qū),其(qí)特異(yì)性程(chéng)度就(jiù)更高。
靈(líng)敏度(dù)高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數方式増加的(dí),能(néng)將(jiāng)皮克(pg=10-129)量(liáng)級(jí)的起始待(dài)測(cè)模板(bǎn)擴増(zēng)到微克(ug=10-69)水平(píng)。能(néng)從100萬個(gè)細胞中(zhōng)檢出一個靶細(xì)胞(bāo);在病(bìng)毒的檢(jiǎn)測(cè)中(zhōng),PCR的靈(líng)敏(mǐn)度(dù)可(kě)達3個(gè)RFU(空(kōng)斑形(xíng)成(chéng)單(dān)位(wèi));在(zài)細(xì)菌學中(zhōng)zu小檢(jiǎn)出率為3個(gè)細菌(jūn)。
(3)簡便，快速
PCR反應用耐(nài)高溫的(dí) Tag DNA聚合(hé)酶,一(yī)次性地(dì)將(jiāng)反(fǎn)應液加好(hǎo)後(hòu),即在DNA擴(kuò)増液和水浴鍋上進行變性退火(huǒ)-延伸(shēn)反應,一般在2-4小(xiǎo)時完(wán)成擴(kuò)増(zēng)反應。擴(kuò)増(zēng)產物一(yī)般用電(diàn)泳(yǒng)分(fēn)析(xī),不一定要用同位素,無放射(shè)性(xìng)汙染，易推廣(guǎng)。
(4)對標(biāo)本(běn)的純(chún)度要求低
不(bù)需要分離病(bìng)毒或(huò)細(xì)菌(jūn)及(jí)培(péi)養細(xì)胞(bāo),DNA粗製(zhì)品(pǐn)及總RNA均可(kě)作(zuò)為擴(kuò)増模板。可直(zhí)接用(yòng)臨床(chuáng)標本如血(xiě)液，體腔液，洗嗽液(yè)，毛(máo)發，細胞(bāo)，活PCR技術概論。