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技術文(wén)獻(xiàn)

鳥(niǎo)類多瘤(liú)病(bìng)毒(dú)PCR檢(jiǎn)測試劑盒準(zhǔn)備試劑(jì)與(yǔ)收(shōu)集血樣(yàng)

文字:[大][中(zhōng)][小(xiǎo)] 2020-12-18    瀏(liú)覽(lǎn)次數(shù):843    
鳥類多(duō)瘤病(bìng)毒PCR檢(jiǎn)測試劑(jì)盒準備試劑與收集血(xiě)樣:
1.  收集(jí)標本:血(xiě)清,血(xiě)漿(EDTA ,檸檬酸鹽,肝(gān)素抗(kàng)凝(níng)),細胞(bāo)培(péi)養上(shàng)清液,組(zǔ)織匀(yún)漿等盡(jìn)早檢(jiǎn)測, 2-8 ℃ 保存(cún)48 小(xiǎo)時;更長時(shí)間須(xū)冷凍( -20   ℃或(huò) -70   ℃ )保存(cún),避免反復(fù)凍(dòng)融。
2.  標準品液配(pèi)製(zhì):使用前(qián)加入0.5ml 蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ) 混(hùn)匀,配(pèi)成 120 0ng/ml 的(dí)溶液 。 設(shè)標準(zhǔn) 管(guǎn) 8 管,管(guǎn)加(jiā)標本(běn)稀(xī)釋液 900ul ,第二至第(dì)八管加(jiā)入標(biāo)本稀(xī)釋液(yè) 500ul 。在(zài)管(guǎn)中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶(róng)液(yè) 100ul 混(hùn)匀後用加(jiā)樣器吸出(chū) 500ul ,移至第(dì)二(èr)管 。如此反(fǎn)復作(zuò)對倍稀釋,從(cóng)第七(qī) 管(guǎn) 中(zhōng)吸出 500ul 棄(qì)去。第(dì)八(bā) 管(guǎn) 為(wéi)空(kōng)白對(duì)照。
3.  10× 標(biāo)本稀釋液(yè)用蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)作(zuò) 1: 1 0 倍(bèi)稀釋( 示例(lì): 1ml濃稀釋(shì)液 +9ml 蒸餾水)。
4.  洗滌(dí)液(yè):用(yòng)重蒸水 1:20 稀(xī)釋(shì)(示例(lì):1ml 濃(nóng)縮洗(xǐ)滌液(yè)加入 19ml 的重(zhòng)蒸水(shuǐ))
檢(jiǎn)測(cè)程序:
1.  加樣(yàng):每孔(kǒng)各(gè)加入標準品(pǐn)或(huò)待(dài)測(cè)樣品 100ul ,將反應(yīng)板(bǎn)充分混(hùn)匀後(hòu)置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板:用(yòng)洗(xǐ)滌液將(jiāng)反(fǎn)應(yīng)板(bǎn)充分洗(xǐ)滌 4-6 次(cì),向濾紙上(shàng)印(yìn)幹。
3.  每(měi)孔中加入抗(kàng)體(tǐ)工作液10 0ul 。將(jiāng)反應板(bǎn)充分混(hùn)匀後置 37 ℃ 6 0 分(fēn)鐘。
4.  洗板:同前(qián)。
5.  每孔加(jiā)酶標(biāo)抗體(tǐ)工作液100ul 。將反應(yīng)板置(zhì) 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗(xǐ)板(bǎn):同前。
7.  每(měi)孔加(jiā)入底物(wù)工作(zuò)液(yè)100ul ,置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分(fēn)鐘。
8.  每(měi)孔(kǒng)加入(rù)100ul 終(zhōng)止液(yè)混(hùn)匀。
9.  30分(fēn)鐘內(nèi)用(yòng)酶(méi)標儀(yí)在 45 0 nm 處測 吸光值(zhí)。
性(xìng)能:
1. 準(zhǔn)確(què)性:標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)綫(xiàn)性回歸與(yǔ)預(yù)期(qī)濃(nóng)度相關(guān)係數(shù)R值(zhí),大(dà)於(yú)等(děng)於(yú)0.9900。
2. 靈敏度:檢(jiǎn)測濃(nóng)度(dù)小(xiǎo)於0.1 U/mL。
3. 特(tè)異(yì)性:不與其它可(kě)溶性(xìng)結構類(lèi)似物交(jiāo)叉(chā)反(fǎn)應。
4. 重(zhòng)復(fù)性(xìng):板內,板間(jiān)變異係數(shù)均(jūn)小於15%。
5. 貯(zhù)藏(cáng):2-8℃,避(bì)光(guāng)防潮保存。
6. 有效(xiào)期(qī):6個月
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