技(jì)術文獻
相(xiāng)關(guān)資訊
技術(shù)文(wén)獻(xiàn)
人(rén)卵巢(cháo)癌長春新(xīn)鹼(jiǎn)耐(nài)藥株細胞收(shōu)到(dào)後應(yīng)如(rú)何(hé)去(qù)正確的處理(lǐ)
A2780/VCR人(rén)卵巢(cháo)癌(ái)長(cháng)春新鹼(jiǎn)耐藥(yào)株細(xì)胞(bāo)收到後應如(rú)何去正確(què)的(dí)處理:
您需要(yào)準備好細胞(bāo)所要用(yòng)到的培養(yǎng)基(jī)和(hé)相關試劑,雖(suī)然(rán)所(suǒ)有的(dí)貼壁,半貼壁或者懸浮(fú)細胞處理方式(shì)差不多(duō),但(dàn)是(shì)不同的(dí)實驗室(shì)培養條件(jiàn)和(hé)處理力度(dù)還(huán)有試劑的批間(jiān)差這些(xiē)問題存(cún)在(zài),也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細胞(bāo)處(chǔ)理不(bù)當(dāng),或者(zhě)環境的不(bù)適應而造成細(xì)胞(bāo)的死亡。
1.收到細(xì)胞,*時間(jiān)要鏡檢:觀(guān)察(chá)細胞形態(tài)是否(fǒu)正常(cháng),對(duì)於貼壁細胞(bāo)則(zé)要(yào)注(zhù)意(yì)看貼(tiē)壁情況(kuàng)是否(fǒu)很(hěn)好,觀察細胞密(mì)度(dù),有疑議(yì)及(jí)時(shí)咨提(tí)供細胞的技(jì)術人員。由於(yú)運輸的時間或(huò)者溫度的(dí)變化(huà),很(hěn)多(duō)貼(tiē)壁細胞(bāo)在盛滿培養(yǎng)基的瓶子裏生長的狀(zhuàng)態(tài)和平時會有點不一(yī)樣(yàng),主要(yào)是貼壁(bì)牢固問題(tí)。比如(rú)293T,平(píng)時(shí)貼(tiē)壁(bì)就不(bù)是很牢(láo),在(zài)裝滿的(dí)培養(yǎng)基(jī)瓶子(zǐ)裏(lǐ)麵,會發生(shēng)大片的脫落,細胞(bāo)聚(jù)集(jí)在一起,但(dàn)是(shì)細(xì)胞生長(cháng)還是(shì)正(zhèng)常的(dí),通過離(lí)心(xīn)收(shōu)集,加以胰(yí)酶的消化,重(zhòng)新打散(sàn),又(yòu)可(kě)以(yǐ)正(zhèng)常(cháng)的貼壁生(shēng)長。
2.當(dāng)通(tōng)過上一步(bù)的觀(guān)察,細胞初(chū)步(bù)沒(méi)有任(rèn)何問(wèn)題(tí)時,進行下一步操作。當收到的(dí)細(xì)胞密達到80%左右(yòu)時(shí),則(zé)處理(lǐ)如下(xià):棄(qì)除(chú)瓶中大部分(fēn)培(péi)養基,僅保(bǎo)留(liú)5到(dào)10mL培養(yǎng)所(suǒ)需(xū)的常規(guī)培(péi)養基(jī);或更(gēng)換新(xīn)鮮的培(péi)養基(jī),置(zhì)於(yú)培養箱中,隨(suí)後(hòu)每(měi)天(tiān)觀(guān)察。細胞在低於正(zhèng)常生(shēng)長溫(wēn)度情(qíng)況下,會調整為靜(jìng)止(zhǐ)期(qī),或者慢(màn)速生長(cháng)期(qī),必須(xū)恢(huī)復(fù)37度的(dí)環境(jìng)至少3個小(xiǎo)時左(zuǒ)右(yòu),才能(néng)重(zhòng)新(xīn)調整(zhěng)到接(jiē)近對(duì)數(shù)生(shēng)長期(qī)的(dí)狀(zhuàng)態,在(zài)對(duì)數生長(cháng)期(qī)進行細胞(bāo)的傳代會(huì)大大(dà)增加(jiā)傳代的(dí)成(chéng)功(gōng)率,和(hé)細胞(bāo)的(dí)存(cún)活率。
3.如(rú)果(guǒ)經(jīng)*步觀察(chá)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞(bāo)密度(dù)超(chāo)過90%,並且(qiě)細(xì)胞狀(zhuàng)態很好時(shí),則復溫(wēn)後2個(gè)小時(shí)需要(yào)立即(jí)傳代。傳代的比(bǐ)例應依據(jù)不同(tóng)的細胞而定。對於(yú)生(shēng)長比較(jiào)快,狀態穩定,不易受(shòu)外界影響的(dí)細胞(bāo)可以(yǐ)一次(cì)多傳幾瓶(píng);對(duì)於生長較(jiào)慢,細胞(bāo)比較薄(báo),狀態(tài)容易(yì)波動的(dí)細胞類(lèi)型,一(yī)次少(shǎo)傳些,保證每(měi)瓶細胞(bāo)密(mì)度大些,便(biàn)於穩定生長。至於(yú)一(yī)些(xiē)比較陌生的(dí)細(xì)胞,*次(cì)處(chǔ)理(lǐ)也可以依照(zhào)第(dì)二(èr)種(zhǒng)情(qíng)況(kuàng)。
您需要(yào)準備好細胞(bāo)所要用(yòng)到的培養(yǎng)基(jī)和(hé)相關試劑,雖(suī)然(rán)所(suǒ)有的(dí)貼壁,半貼壁或者懸浮(fú)細胞處理方式(shì)差不多(duō),但(dàn)是(shì)不同的(dí)實驗室(shì)培養條件(jiàn)和(hé)處理力度(dù)還(huán)有試劑的批間(jiān)差這些(xiē)問題存(cún)在(zài),也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細胞(bāo)處(chǔ)理不(bù)當(dāng),或者(zhě)環境的不(bù)適應而造成細(xì)胞(bāo)的死亡。
1.收到細(xì)胞,*時間(jiān)要鏡檢:觀(guān)察(chá)細胞形態(tài)是否(fǒu)正常(cháng),對(duì)於貼壁細胞(bāo)則(zé)要(yào)注(zhù)意(yì)看貼(tiē)壁情況(kuàng)是否(fǒu)很(hěn)好,觀察細胞密(mì)度(dù),有疑議(yì)及(jí)時(shí)咨提(tí)供細胞的技(jì)術人員。由於(yú)運輸的時間或(huò)者溫度的(dí)變化(huà),很(hěn)多(duō)貼(tiē)壁細胞(bāo)在盛滿培養(yǎng)基的瓶子裏生長的狀(zhuàng)態(tài)和平時會有點不一(yī)樣(yàng),主要(yào)是貼壁(bì)牢固問題(tí)。比如(rú)293T,平(píng)時(shí)貼(tiē)壁(bì)就不(bù)是很牢(láo),在(zài)裝滿的(dí)培養(yǎng)基(jī)瓶子(zǐ)裏(lǐ)麵,會發生(shēng)大片的脫落,細胞(bāo)聚(jù)集(jí)在一起,但(dàn)是(shì)細(xì)胞生長(cháng)還是(shì)正(zhèng)常的(dí),通過離(lí)心(xīn)收(shōu)集,加以胰(yí)酶的消化,重(zhòng)新打散(sàn),又(yòu)可(kě)以(yǐ)正(zhèng)常(cháng)的貼壁生(shēng)長。
2.當(dāng)通(tōng)過上一步(bù)的觀(guān)察,細胞初(chū)步(bù)沒(méi)有任(rèn)何問(wèn)題(tí)時,進行下一步操作。當收到的(dí)細(xì)胞密達到80%左右(yòu)時(shí),則(zé)處理(lǐ)如下(xià):棄(qì)除(chú)瓶中大部分(fēn)培(péi)養基,僅保(bǎo)留(liú)5到(dào)10mL培養(yǎng)所(suǒ)需(xū)的常規(guī)培(péi)養基(jī);或更(gēng)換新(xīn)鮮的培(péi)養基(jī),置(zhì)於(yú)培養箱中,隨(suí)後(hòu)每(měi)天(tiān)觀(guān)察。細胞在低於正(zhèng)常生(shēng)長溫(wēn)度情(qíng)況下,會調整為靜(jìng)止(zhǐ)期(qī),或者慢(màn)速生長(cháng)期(qī),必須(xū)恢(huī)復(fù)37度的(dí)環境(jìng)至少3個小(xiǎo)時左(zuǒ)右(yòu),才能(néng)重(zhòng)新(xīn)調整(zhěng)到接(jiē)近對(duì)數(shù)生(shēng)長期(qī)的(dí)狀(zhuàng)態,在(zài)對(duì)數生長(cháng)期(qī)進行細胞(bāo)的傳代會(huì)大大(dà)增加(jiā)傳代的(dí)成(chéng)功(gōng)率,和(hé)細胞(bāo)的(dí)存(cún)活率。
3.如(rú)果(guǒ)經(jīng)*步觀察(chá)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞(bāo)密度(dù)超(chāo)過90%,並且(qiě)細(xì)胞狀(zhuàng)態很好時(shí),則復溫(wēn)後2個(gè)小時(shí)需要(yào)立即(jí)傳代。傳代的比(bǐ)例應依據(jù)不同(tóng)的細胞而定。對於(yú)生(shēng)長比較(jiào)快,狀態穩定,不易受(shòu)外界影響的(dí)細胞(bāo)可以(yǐ)一次(cì)多傳幾瓶(píng);對(duì)於生長較(jiào)慢,細胞(bāo)比較薄(báo),狀態(tài)容易(yì)波動的(dí)細胞類(lèi)型,一(yī)次少(shǎo)傳些,保證每(měi)瓶細胞(bāo)密(mì)度大些,便(biàn)於穩定生長。至於(yú)一(yī)些(xiē)比較陌生的(dí)細(xì)胞,*次(cì)處(chǔ)理(lǐ)也可以依照(zhào)第(dì)二(èr)種(zhǒng)情(qíng)況(kuàng)。
