技(jì)術文獻(xiàn)
技術(shù)文獻(xiàn)
1. 標準品(pǐn)的稀(xī)釋與加樣(yàng):在(zài)酶標包被(bèi)板上(shàng)設標(biāo)準品孔(kǒng)10孔,在(zài)di一,第(dì)二孔(kǒng)中(zhōng)分(fēn)別加(jiā)標準品100μl,然後在(zài)di一(yī),第二孔(kǒng)中(zhōng)加標準(zhǔn)品稀(xī)釋液50μl,混匀(yún);然後(hòu)從di一孔(kǒng),第二(èr)孔中(zhōng)各取(qǔ)100μl分別加到(dào)第三(sān)孔和第四(sì)孔(kǒng),再在第三,第四孔(kǒng)分別(bié)加標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液50μl,混(hùn)匀;然後在(zài)第(dì)三(sān)孔和(hé)第(dì)四(sì)孔中先(xiān)各(gè)取(qǔ)50μl棄掉,再(zài)各取(qǔ)50μl分別加到第五(wǔ),第(dì)六(liù)孔(kǒng)中,再在(zài)第五(wǔ),第六孔(kǒng)中(zhōng)分別加(jiā)標準(zhǔn)品稀(xī)釋液(yè)50ul,混(hùn)匀;混(hùn)匀後從第(dì)五(wǔ),第六(liù)孔中各取50μl分(fēn)別加(jiā)到(dào)第七(qī),第八(bā)孔中,再(zài)在(zài)第七,第(dì)八孔中分(fēn)別加(jiā)標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)50μl,混(hùn)匀(yún)後從第(dì)七(qī),第八孔(kǒng)中分別取(qǔ)50μl加到(dào)第九(jiǔ),第十孔(kǒng)中(zhōng),再在(zài)第九(jiǔ)第(dì)十孔(kǒng)分別加標準品稀(xī)釋(shì)液50μl,混(hùn)匀後從(cóng)第九第十孔(kǒng)中(zhōng)各取50μl棄(qì)掉(diào)。(稀釋(shì)後(hòu)各孔(kǒng)加樣量都為50μl,濃度分別(bié)為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分(fēn)別設空白孔(kǒng)(空白對照孔不加樣(yàng)品(pǐn)及酶(méi)標(biāo)試(shì)劑,其(qí)餘(yú)各步操作相同(tóng)),待測樣(yàng)品孔。在酶標包被(bèi)板(bǎn)上待測樣品孔(kǒng)中(zhōng)先加樣品稀釋液(yè)40μl,然(rán)後再(zài)加待測樣品10μl(樣品最終(zhōng)稀(xī)釋(shì)度為5倍)。加樣將(jiāng)樣品(pǐn)加(jiā)於(yú)酶標(biāo)板孔底部,盡(jìn)量不(bù)觸及孔壁,輕輕晃(huǎng)動混匀(yún)。
3. 溫(wēn)育(yù):用封(fēng)板膜封(fēng)板後(hòu)置(zhì)37℃溫(wēn)育(yù)30分(fēn)鐘(zhōng)。
4. 配(pèi)液(yè):將30(48T的20倍(bèi))倍(bèi)濃縮洗(xǐ)滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍(bèi)稀釋後備用(yòng)。
5. 洗滌:小心揭掉(diào)封板膜(mó),棄去液(yè)體,甩幹,每孔加滿洗(xǐ)滌液,靜置30秒後棄去,如(rú)此重(zhòng)復5次(cì),拍幹。
6. 加(jiā)酶(méi):每孔加入(rù)酶標試劑50μl,空白(bái)孔除(chú)外(wài)。
7. 溫育:操(cāo)作同(tóng)3。
8. 洗(xǐ)滌(dí):操作同5。
9. 顯(xiǎn)色:每孔(kǒng)先(xiān)加入顯(xiǎn)色(sè)劑A50μl,再(zài)加入(rù)顯色(sè)劑B50μl,輕(qīng)輕(qīng)震(zhèn)蕩混匀,37℃避(bì)光(guāng)顯(xiǎn)色(sè)15分(fēn)鐘.
10. 終止:每孔(kǒng)加(jiā)終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)50μl,終(zhōng)止(zhǐ)反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立(lì)轉(zhuǎn)黃(huáng)色)。
11. 測定:以(yǐ)空(kōng)白空調(tiáo)零(líng),450nm波長依(yī)序測量各(gè)孔(kǒng)的(dí)吸光(guāng)度(OD值)。 測定應在加(jiā)終(zhōng)止液後15分(fēn)鐘。
內皮粘(nián)蛋(dàn)白EMCN抗(kàng)體
環(huán)磷酸腺(xiàn)苷(gān)調(tiáo)節鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子(zǐ)1抗體
磷(lín)酸(suān)化轉錄(lù)因子E2F1抗(kàng)體
上皮細胞(bāo)特異(yì)性轉錄(lù)因(yīn)子1抗(kàng)體
內皮素(sù)2抗體
內(nèi)皮細(xì)胞受體(tǐ)蛋(dàn)白酪氨(ān)酸激(jī)酶B3抗體
軟骨(gǔ)外(wài)胚層發(fā)育不(bù)良相(xiāng)關蛋白(bái)抗體
髓鞘(qiào)蛋(dàn)白(bái)P0樣(yàng)蛋白(bái)2抗(kàng)體
雌(cí)激素受體α抗體
內(nèi)質網核信(xìn)號轉導蛋(dàn)白2抗體(tǐ)
鋅(xīn)指(zhǐ)蛋(dàn)白521抗體(tǐ)
大腸(cháng)杆(gān)菌(jūn)埃希杆(gān)菌(jūn)O6抗(kàng)體
植物延展素-β
內皮(pí)素-1抗體
絲(sī)裂原活(huó)化(huà)蛋白激酶4抗(kàng)體(tǐ)
埃茲(zī)蛋白抗(kàng)體
細胞轉錄(lù)因(yīn)子ELK1抗(kàng)體
內皮素-1單克隆抗(kàng)體(tǐ)
腸(cháng)道(dào)病毒(dú)71型抗體(tǐ)
抗誌賀(hè)毒(dú)素大腸杆(gān)菌O139抗(kàng)體
表(biǎo)皮(pí)生長(cháng)因(yīn)子抗(kàng)體
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