山(shān)羊轉化(huà)生(shēng)長因子(zǐ)β2(TGF-β2)elisa檢測(cè)試(shì)劑盒(hé)說明(míng)書(shū)

試驗(yàn)原(yuán)理：

TRH試(shì)劑(jì)盒是(shì)固相夾心法酶聯免疫(yì)吸(xī)附(fù)實驗（ELISA）.已(yǐ)知(zhī)TRH濃(nóng)度(dù)的標準品，未(wèi)知(zhī)濃度的樣(yàng)品加(jiā)入微孔酶(méi)標(biāo)板內進行檢(jiǎn)測。先(xiān)將(jiāng)TRH和(hé)生物(wù)素標記的抗體同時溫育。洗(xǐ)滌(dí)後(hòu)，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過溫(wēn)育和(hé)洗(xǐ)滌，去除未結合的(dí)酶結合(hé)物，然後(hòu)加入底物A，B，和酶結合物同(tóng)時作(zuò)用。產生顏色(sè)。顏色的深淺和(hé)樣(yàng)品(pǐn)中TRH的(dí)濃(nóng)度呈比例關係(xì)。

試(shì)劑(jì)盒內容(róng)及其配製(zhì)

試(shì)劑(jì)盒成份(fèn)（2-8℃保(bǎo)存） 96孔配置 48孔配置 配(pèi)製(zhì)

96/48人份酶(méi)標(biāo)板 1塊(kuài)板(bǎn)（96T） 半(bàn)塊板（48T） 即用(yòng)型

塑(sù)料膜板(bǎn)蓋(gài) 1塊 半塊 即(jí)用型(xíng)

標(biāo)準品：24ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按(àn)說(shuō)明(míng)書(shū)進(jìn)行稀(xī)稀

空白對(duì)照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即(jí)用型

標(biāo)準品稀(xī)釋緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型(xíng)

生物(wù)素標(biāo)記(jì)的抗TRH抗(kàng)體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用型(xíng)

親和鏈酶(méi)素-HRP 1瓶(píng)（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用(yòng)型

洗(xǐ)滌緩衝液 1瓶（20ml） 1瓶(píng)（10ml） 按說明書(shū)進行稀釋(shì)

底物A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

底物(wù)B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型

自備材料

1． 蒸(zhēng)餾水。

2． 加(jiā)樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。

3． 振蕩器及(jí)磁(cí)力(lì)攪拌器等。

安全性

1． 避免(miǎn)直(zhí)接接觸終(zhōng)止液和底物A，B。一旦接(jiē)觸到這些(xiē)液(yè)體(tǐ)，請盡快(kuài)用水(shuǐ)衝(chōng)洗。

2． 實驗中(zhōng)不(bù)要吃喝，抽煙或使用化妝(zhuāng)品(pǐn)。

3． 不(bù)要(yào)用(yòng)嘴吸取試(shì)劑(jì)盒(hé)裏的(dí)任何成份。

操(cāo)作注意事項

1． 試(shì)劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢(huī)復到(dào)室溫。稀稀過(guò)後的標(biāo)準品應(yīng)丟棄，不可保(bǎo)存。

2． 實(shí)驗中不(bù)用的板(bǎn)條應(yīng)立(lì)即放回包(bāo)裝袋(dài)中，密(mì)封保(bǎo)存(cún)，以免(miǎn)變(biàn)質。

3． 不用(yòng)的(dí)其(qí)它試(shì)劑應包(bāo)裝(zhuāng)好或蓋好。不(bù)同(tóng)批(pī)號(hào)的試(shì)劑不要混用。保質(zhì)前(qián)使(shǐ)用。

4． 使用一(yī)次(cì)性的吸頭以免交叉汙(wū)染，吸(xī)取終止液和底(dǐ)物(wù)A，B液時，避(bì)免使用帶金屬(shǔ)部分(fēn)的加(jiā)樣(yàng)器(qì)。

5． 使(shǐ)用幹淨的(dí)塑料(liào)容(róng)器配(pèi)置(zhì)洗(xǐ)滌液(yè)。使用前充分(fēn)混匀試(shì)劑盒裏的各(gè)種(zhǒng)成份(fèn)及(jí)樣(yàng)品(pǐn)。

6． 洗滌酶標板時應充分拍(pāi)幹，不要將吸(xī)水紙(zhǐ)直接(jiē)放入酶(méi)標反(fǎn)應孔(kǒng)中吸(xī)水。

7． 底(dǐ)物(wù)A應揮發，避免(miǎn)長(cháng)時間打開蓋子。底物B對(duì)光敏(mǐn)感，避免長時間暴露於光(guāng)下(xià)。避(bì)免(miǎn)用手接觸(chù)，有毒。實驗完成後(hòu)應立(lì)即讀(dú)取OD值。

8． 加(jiā)入試劑的順(shùn)序(xù)應(yīng)一致，以保(bǎo)證所有(yǒu)反(fǎn)應(yīng)板(bǎn)孔(kǒng)溫育的時間(jiān)一樣。

9． 按照說明(míng)書(shū)中標明(míng)的時間，加(jiā)液(yè)的量(liáng)及順序(xù)進行溫育操(cāo)作。

樣(yàng)品(pǐn)收(shōu)集，處(chǔ)理及保存方(fāng)法

1， 血清-----操作(zuò)過(guò)程中避免任(rèn)何細胞(bāo)刺(cì)激(jī)。使(shǐ)用不含(hán)熱原(yuán)和內毒素的試管(guǎn)。收(shōu)集(jí)血液(yè)後(hòu)，1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘(zhōng)將(jiāng)血清和(hé)紅細(xì)胞(bāo)迅(xùn)速(sù)小心地(dì)分離。

2， 血漿(jiāng)-----EDTA，檸檬酸(suān)鹽，肝(gān)素血漿可用於檢(jiǎn)測。1000×g離心30分鐘去除(chú)顆(kē)粒。

3， 細胞(bāo)上(shàng)清液---1000×g離心10分(fēn)鐘去(qù)除(chú)顆粒和(hé)聚合(hé)物。

4， 保(bǎo)存------如果樣(yàng)品不(bù)立(lì)即使(shǐ)用(yòng)，應將(jiāng)其分(fēn)成小(xiǎo)部分-70 ℃保存，避免反復冷(lěng)凍(dòng)。盡(jìn)可(kě)能的(dí)不(bù)要(yào)使用溶血(xiě)或(huò)高血脂血(xiě)。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先(xiān)離(lí)心或過(guò)濾。不(bù)要在37℃或更高(gāo)的溫度加熱(rè)解(jiě)凍(dòng)。應(yīng)在室(shì)溫下解(jiě)凍(dòng)並(bìng)確(què)保樣品均匀(yún)地充(chōng)分解(jiě)凍(dòng)。

試劑(jì)的(dí)準備

1． 標準品(pǐn)：標(biāo)準品的(dí)係列稀釋(shì)應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時準(zhǔn)備，不(bù)能儲(chǔ)存。稀釋(shì)前(qián)將標(biāo)準品(pǐn)振(zhèn)蕩(dàng)混(hùn)匀。稀(xī)釋(shì)比(bǐ)例按(àn)下(xià)表(biǎo)中進行(háng)：

24 ng/ml （6號標準(zhǔn)品） 原(yuán)倍濃(nóng)度不(bù)用稀釋直接(jiē)加(jiā)入(rù)50ul。

12 ng/ml （5號標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)原(yuán)倍(bèi)標準品(pǐn)加入100ul的標準品稀釋液(yè)

6.0 ng/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號(hào)標(biāo)準品加入100ul的(dí)標準品(pǐn)稀釋(shì)液

3.0 ng/ml （3號(hào)標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的4號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的(dí)標準品稀(xī)釋液

1.5 ng/ml （2號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的(dí)3號標準品加(jiā)入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀(xī)釋液

0.75 ng/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品(pǐn)加入(rù)100ul的標(biāo)準品稀釋(shì)液

0 ng/ml （空白(bái)對照） 原始濃度不(bù)用(yòng)稀釋直接(jiē)加入50ul。

2． 洗(xǐ)滌緩衝液(yè)（50×）的稀釋：蒸餾水50倍(bèi)稀釋。

操作(zuò)步驟(zhòu)

1． 使(shǐ)用(yòng)前(qián)，將(jiāng)所有試劑(jì)充分(fēn)混匀(yún)。不要(yào)使液體(tǐ)產(chǎn)生(shēng)大量(liáng)的(dí)泡(pào)沫，以(yǐ)免(miǎn)加樣(yàng)時(shí)加(jiā)入(rù)大量的(dí)氣泡，產生(shēng)加樣上(shàng)的誤差(chà)。

2． 根(gēn)據(jù)待(dài)測樣(yàng)品(pǐn)數量加上標(biāo)準品的(dí)數量決(jué)定所(suǒ)需的(dí)板(bǎn)條數。每(měi)個(gè)標準(zhǔn)品(pǐn)和空(kōng)白孔建(jiàn)議(yì)做復(fù)孔。每(měi)個(gè)樣(yàng)品根(gēn)據自(zì)己(jǐ)的(dí)數(shù)量來定，能使用復(fù)孔(kǒng)的(dí)盡量(liáng)做復孔(kǒng)。

3． 加入稀釋好後的(dí)標(biāo)準品50ul於(yú)反應孔，加入待測樣(yàng)品(pǐn)50ul於(yú)反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)內(nèi)。立(lì)即加(jiā)入(rù)50ul的生物素標記的抗體(tǐ)。蓋上(shàng)膜(mó)板(bǎn)，輕輕振蕩(dàng)混(hùn)匀，37℃溫育1小時。

4． 甩(shuǎi)去孔(kǒng)內液體，每孔(kǒng)加(jiā)滿洗(xǐ)滌液，振蕩30秒，甩(shuǎi)去(qù)洗滌液(yè)，用吸水紙拍(pāi)幹(gān)。重復(fù)此操作(zuò)3次(cì)。如果(guǒ)用洗板(bǎn)機洗滌，洗滌次(cì)數增加(jiā)一次。

5． 每(měi)孔加入80ul的親和(hé)鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混(hùn)匀，37℃溫育30分鐘(zhōng)。

6． 甩去孔內液(yè)體，每(měi)孔(kǒng)加滿洗滌(dí)液，振蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩(shuǎi)去洗滌(dí)液，用吸水(shuǐ)紙(zhǐ)拍幹(gān)。重復此操(cāo)作3次。如(rú)果(guǒ)用(yòng)洗板(bǎn)機洗(xǐ)滌，洗滌(dí)次數增(zēng)加(jiā)一次。

7． 每(měi)孔加(jiā)入(rù)底物A，B各50ul，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混匀，37℃溫(wēn)育(yù)10分(fēn)鐘。避免光照。

8． 取(qǔ)出酶標(biāo)板，迅速(sù)加(jiā)入(rù)50ul終止液，加入(rù)終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)後(hòu)應(yīng)立即測定結(jié)果(guǒ)。

9． 在(zài)450nm波長處(chǔ)測定(dìng)各孔(kǒng)的OD值(zhí)。

建議使用(yòng)的實驗方案

標(biāo)準品濃度(dù)（ng/ml）

A 24 24 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品

B 12 12 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)

C 6.0 6.0 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品

D 3.0 3.0 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品

E 1.5 1.5 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品

F 0.75 0.75 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品

G 0 0 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品

H 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品

局限

6號標(biāo)準品以(yǐ)上的(dí)結(jié)果為非綫(xiàn)性(xìng)的，根據此(cǐ)標(biāo)準曲綫無法得(dé)到(dào)的結果。

試劑(jì)盒(hé)性(xìng)能

1. 靈敏度：zui小(xiǎo)的檢(jiǎn)測濃度小於1號標準(zhǔn)品。稀(xī)釋(shì)度(dù)的(dí)綫(xiàn)性(xìng)。樣品(pǐn)綫性(xìng)回(huí)歸與預(yù)期濃(nóng)度相(xiāng)關係(xì)數(shù)R值(zhí)為0.990。

2. 特異性：不(bù)與其(qí)它細胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性(xìng)：板(bǎn)內，板間(jiān)變異(yì)係(xì)數(shù)均(jūn)小(xiǎo)於10%。

結 果(guǒ) 判(pàn) 斷 與(yǔ) 分(fēn) 析(xī)

1，儀器值(zhí)：於波長450nm的酶標儀上讀(dú)取(qǔ)各(gè)孔的OD值

2，以吸光度OD值為(wéi)縱坐(zuò)標（Y），相(xiāng)應(yīng)的(dí)TRH標準(zhǔn)品濃度為橫(héng)坐標（X），做得相(xiāng)應的曲(qū)綫(xiàn)，樣品(pǐn)的TRH含量可(kě)根據(jù)其OD值由標準曲綫(xiàn)換算出相應(yīng)的濃(nóng)度(dù)。

3，檢(jiǎn)測值(zhí)範圍：0-24ng/ml

4，敏感(gǎn)度： 0.1 ng/ml