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技術文獻(xiàn)

胞(bāo)漿異(yì)檸檬酸脫氫(qīng)酶(ICDHc)測試盒操作(zuò)步(bù)驟(zhòu)

文字(zì):[大][中][小] 2021-11-24    瀏(liú)覽次(cì)數(shù):818    
胞漿(jiāng)異檸(níng)檬(méng)酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒(hé)操(cāo)作步驟:
1,貼壁(bì)細(xì)胞的消化
①吸除培(péi)養液(yè),用無菌 PBS,Hanks 液(yè)或無血清培養液(yè)洗滌細胞一次,以(yǐ)去(qù)除(chú)殘餘的(dí)血清。
②加(jiā)入(rù)少(shǎo)量(liáng) 源葉(yè)生(shēng)物 Trypsin-EDTA solution,略蓋(gài)過(guò)細胞(bāo)即(jí)可(kě),室(shì)溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時(shí)間(jiān)有所(suǒ)不同。

   

③顯(xiǎn)微鏡下觀察(chá),細胞(bāo)明(míng)顯(xiǎn)收(shōu)縮(suō),並(bìng)且肉(ròu)眼(yǎn)觀察培養器皿(mǐn)底(dǐ)部(bù)發(fā)現細胞的(dí)形態發生明(míng)顯(xiǎn)的變(biàn)

化(huà);或者用槍吹打(dǎ)細(xì)胞發現(xiàn)細(xì)胞(bāo)剛好可以被吹(chuī)打(dǎ)下(xià)來(lái),吸(xī)除胰酶細(xì)胞消化(huà)液。加(jiā)入含血清的  完(wán)全細胞(bāo)培養(yǎng)液,吹打(dǎ)下細胞,即(jí)可(kě)直(zhí)接用於後續(xù)實(shí)驗。
④如果(guǒ)發現消(xiāo)化不足,則(zé)加入 Trypsin-EDTA solution 重(zhòng)新(xīn)消(xiāo)化(huà)。
⑤如果(guǒ)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞(bāo)消化時(shí)間過長(cháng),未及吹打細胞,細胞已(yǐ)經有(yǒu)部分(fēn)直(zhí)接從培(péi)養器(qì)皿底部脫(tuō)落, 直接(jiē)用胰酶(méi)細胞(bāo)培(péi)養液(yè)把(bǎ)細胞(bāo)全(quán)部(bù)吹打(dǎ)下來(lái)。000~2000g 離(lí)心(xīn) min,沉澱(diàn)細(xì)胞,盡量(liáng)去除胰酶細胞(bāo)消化(huà)液(yè)後,加(jiā)入含(hán)血清(qīng)的(dí)完全(quán)培養(yǎng)液重新(xīn)懸浮細胞(bāo),即(jí)可用(yòng)於(yú)後續(xù)實(shí)驗。

2,組(zǔ)織(zhī)的消(xiāo)化不同的組(zǔ)織需要消化的時間(jiān)相(xiāng)差很大(dà),通(tōng)常(cháng)以消化(huà)後(hòu)可以(yǐ)充分(fēn)打散組(zǔ)織(zhī)為宜。

 空腸彎(wān)曲杆菌
 嗜酸乳杆菌(jūn)
 幹酪乳杆(gān)菌(jūn)
  耐(nài)鹽(yán)芽(yá)孢杆菌(jūn)
 無(wú)乳鏈球菌
 德氏(shì)乳杆菌乳(rǔ)酸亞種(萊氏曼氏乳(rǔ)杆菌)
 斯氏李斯(sī)特氏菌
 側(cè)孢短芽孢杆菌
 乳酸(suān)乳球菌乳亞(yà)種
 牙(yá)齦卟啉單胞(bāo)菌(jūn)
 菩(pú)提奇異(yì)球菌
 幹(gān)燥(zào)棒杆菌(jūn)
 屎腸球(qiú)菌(屎(shǐ)鏈(liàn)球菌(jūn))
 具(jù)核(hé)梭(suō)杆菌多形(xíng)亞(yà)種
 脆弱(ruò)擬(nǐ)杆菌(jūn)
 齒(chǐ)雙歧(qí)杆菌(jūn)
 粘性(xìng)放綫菌(jūn)
 植(zhí)物乳杆菌植(zhí)物(wù)亞種
 遲(chí)緩(huǎn)愛(ài)德(dé)華(huá)氏(shì)菌(jūn)
 哈(hā)氏弧菌
 Hydrotalea flava
 萎(wěi)縮芽孢(bāo)杆菌
 血(xiě)鏈球菌
 醋酸(suān)醋杆菌
 伊(yī)氏(shì)李斯特氏(shì)菌
 英(yīng)諾(nuò)克(kè)李(lǐ)斯特氏(shì)菌
 紅(hóng)曲黴
 不動杆(gān)菌(jūn)
 食(shí)酸(suān)菌
 短波單胞菌
 多頭(tóu)黴(méi)
 掘(jué)氏(shì)疫(yì)黴(méi)


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