魚(yú)組(zǔ)胺(àn)(HIS)ELISA試劑(jì)盒說明(míng)書(shū)

魚(yú)組(zǔ)胺(àn)(HIS)ELISA試劑盒 優(yōu)勢(shì)
：

1，原(yuán)裝進(jìn)口(kǒu)抗(kàng)體－－－－高效(xiào)，靈(líng)敏，特(tè)異性好(hǎo)

2，規範(fàn)包被操(cāo)作(zuò)－－－－吸(xī)附均(jūn)匀，吸(xī)附(fù)性(xìng)好(hǎo)，空(kōng)白值(zhí)低，孔底透明(míng)度高(gāo)

3，先進的優(yōu)化方(fāng)案－－－－重復(fù)性高，可(kě)靠性(xìng)強

4，高標準(zhǔn)技術服(fú)務要(yào)求
：靈敏度(dù)高，特(tè)異性強 

5，適(shì)用範圍廣
：血漿，血清，組(zǔ)織(zhī)匀漿液(yè)，細(xì)胞培養(yǎng)上(shàng)清液，尿(niào)液等多(duō)種(zhǒng)類(lèi)型的樣(yàng)本

檢測原理

試(shì)劑(jì)盒采(cǎi)用(yòng)雙(shuāng)抗體(tǐ)一步(bù)夾心法酶聯(lián)免(miǎn)疫吸(xī)附試驗（ELISA）。往(wǎng)預先包(bāo)被(bèi)組胺（HIS）抗體(tǐ)的包(bāo)被微(wēi)孔(kǒng)中(zhōng)，依次加入標(biāo)本，標(biāo)準品，HRP標記的(dí)檢(jiǎn)測抗體，經(jīng)過(guò)溫(wēn)育並徹(chè)底(dǐ)洗滌。用底物(wù)TMB顯(xiǎn)色(sè)，TMB在(zài)過氧化(huà)物酶(méi)的(dí)催(cuī)化(huà)下轉化成藍(lán)色(sè)，並在(zài)酸的(dí)作用下(xià)轉(zhuǎn)化(huà)成(chéng)終的黃色(sè)。顏(yán)色的(dí)深(shēn)淺(qiǎn)和樣品中的(dí)組胺（HIS）呈(chéng)正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在(zài)450nm 波長(cháng)下(xià)測(cè)定吸(xī)光度(dù)（OD 值(zhí)），計(jì)算樣品(pǐn)濃(nóng)度。

樣(yàng)品收(shōu)集，處理及保存(cún)方法

1.  血清
：使(shǐ)用(yòng)不含熱(rè)原和內毒素(sù)的試管，操作過程(chéng)中避(bì)免任(rèn)何細(xì)胞刺(cì)激(jī)，收集(jí)血液後，3000轉離心10分(fēn)鐘將(jiāng)血清(qīng)和(hé)紅細胞迅速小(xiǎo)心地分(fēn)離(lí)。

2.  血漿
：EDTA，檸(níng)檬酸鹽(yán)或肝素抗凝。3000轉離心(xīn)30分鐘取上清(qīng)。

3.  細(xì)胞(bāo)上(shàng)清液(yè)
：3000轉離(lí)心(xīn)10分鐘去除顆(kē)粒和(hé)聚(jù)合物。

4.  組織匀(yún)漿
：將(jiāng)組(zǔ)織加入(rù)適(shì)量(liáng)生(shēng)理鹽(yán)水(shuǐ)搗(dǎo)碎。3000轉離(lí)心10分(fēn)鐘取(qǔ)上清(qīng)。

5.  保(bǎo)存
：如(rú)果樣本收集後不(bù)及(jí)時(shí)檢(jiǎn)測，請按(àn)一(yī)次(cì)用量分(fēn)裝(zhuāng)，凍存於(yú)-20℃，避(bì)免反(fǎn)復凍(dòng)融，在室(shì)溫(wēn)下解(jiě)凍(dòng)並確保(bǎo)樣(yàng)品均匀地(dì)充(chōng)分解凍(dòng)。

自(zì)備(bèi)物品

酶標儀（450nm）

高精(jīng)度加(jiā)樣器及(jí)槍頭
：0.5-10uL，2-20uL，20-200uL，200-1000uL

37℃恒溫(wēn)箱

操(cāo)作注意(yì)事項(xiàng)

1.  試劑(jì)盒保存在2-8℃，使用(yòng)前(qián)室溫平(píng)衡20分(fēn)鐘。從冰箱取出(chū)的濃縮(suō)洗滌液(yè)會有結晶(jīng)，這(zhè)屬(shǔ)於(yú)正常現象，水(shuǐ)浴(yù)加(jiā)熱使(shǐ)結(jié)晶(jīng)完全(quán)溶解後再使用(yòng)。

2.  實驗(yàn)中(zhōng)不(bù)用(yòng)的板(bǎn)條應立(lì)即放回自(zì)封(fēng)袋中，密(mì)封(fēng)（低溫幹燥(zào)）保存。

3.  濃度(dù)為0的(dí)S0號(hào)標(biāo)準品即(jí)可(kě)視為陰(yīn)性對(duì)照(zhào)或者空白；按(àn)照(zhào)說(shuō)明(míng)書操作時樣本(běn)已(yǐ)經(jīng)稀(xī)釋(shì)5倍，終(zhōng)結果(guǒ)乘(chéng)以5才(cái)是(shì)樣(yàng)本實際濃度。

4.  嚴格按(àn)照說(shuō)明書(shū)中(zhōng)標明的(dí)時間，加液(yè)量及(jí)順序進行(háng)溫育操作。

5.  所(suǒ)有(yǒu)液體組分使用前(qián)充分(fēn)搖(yáo)匀。

試劑盒組(zǔ)成(chéng)

名(míng)稱(chēng) 96孔(kǒng)配置(zhì) 48孔配置 備(bèi)注(zhù)

微孔酶標(biāo)板 12孔×8條 12孔(kǒng)×4條(tiáo) 無

標準品(pǐn) 0.3mL*6管 0.3mL*6管(guǎn) 無(wú)

樣(yàng)本(běn)稀釋液 6mL 3mL 無(wú)

檢(jiǎn)測(cè)抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩(huǎn)衝液(yè) 25mL 15mL 按說明書進行(háng)稀釋

底(dǐ)物A 6mL 3mL 無(wú)

底物B 6mL 3mL 無

終止液(yè) 6mL 3mL 無

封(fēng)板(bǎn)膜 2張 2張 無

說明書(shū) 1份 1份 無(wú)

自封袋 1個(gè) 1個 無(wú)

注
：標(biāo)準品(pǐn)（S0-S5）濃度依次為
：0，12.5，25，50，100，200 mg/L

試(shì)劑(jì)的準(zhǔn)備

 20×洗(xǐ)滌緩衝液(yè)的(dí)稀釋
：蒸(zhēng)餾(liù)水按1
：20稀(xī)釋，即1份的20×洗(xǐ)滌(dí)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)加(jiā)19份的蒸(zhēng)餾水(shuǐ)。

洗板方(fāng)法

1.  手工洗板
：甩盡孔(kǒng)內(nèi)液體(tǐ)，每(měi)孔加滿洗(xǐ)滌液，靜置(zhì)1min後甩(shuǎi)盡孔內液體(tǐ)，在(zài)吸水(shuǐ)紙上拍幹，如(rú)此洗板(bǎn)5次。

2.  自動洗板機
：每孔(kǒng)注(zhù)入洗液(yè)350μL，浸泡1min，洗(xǐ)板5次。

操(cāo)作步驟

1.  從室(shì)溫平衡(héng)20min後的(dí)鋁(lǚ)箔袋中取(qǔ)出(chū)所(suǒ)需板條，剩餘(yú)板(bǎn)條(tiáo)用(yòng)自封(fēng)袋(dài)密(mì)封(fēng)放回4℃。

2.  設置標準品孔(kǒng)和樣本(běn)孔(kǒng)，標準品孔(kǒng)各(gè)加不同濃(nóng)度(dù)的(dí)標準(zhǔn)品50μL；

3.  樣(yàng)本孔(kǒng)先加待測(cè)樣本10μL，再加(jiā)樣本稀(xī)釋液40μL；空(kōng)白(bái)孔不加(jiā)。

4.  除(chú)空白孔外，標準品孔和樣本(běn)孔(kǒng)中每(měi)孔(kǒng)加(jiā)入辣根(gēn)過(guò)氧化(huà)物酶（HRP）標記(jì)的(dí)檢測抗(kàng)體(tǐ)100μL，用(yòng)封板(bǎn)膜封(fēng)住反(fǎn)應孔(kǒng)，37℃水浴(yù)鍋(guō)或恒溫(wēn)箱溫育60min。

5.  棄去(qù)液體(tǐ)，吸水紙(zhǐ)上拍(pāi)幹，每(měi)孔(kǒng)加滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，靜置1min，甩(shuǎi)去洗滌液(yè)，吸(xī)水紙上拍(pāi)幹(gān)，如(rú)此重(zhòng)復洗(xǐ)板5次(cì)（也可(kě)用洗(xǐ)板機洗板(bǎn)）。

6.  每孔加入底物(wù)A，B各(gè)50μL，37℃避光(guāng)孵育(yù)15min。

7.  每(měi)孔加入終止(zhǐ)液50μL，15min內，在450nm波長(cháng)處測定各(gè)孔(kǒng)的OD值。

結果(guǒ)判(pàn)斷

 繪製(zhì)標準(zhǔn)曲(qū)綫
：在Excel工作表(biǎo)中(zhōng)，以(yǐ)標準品濃度(dù)作(zuò)橫坐(zuò)標，對應(yīng)OD值作縱(zòng)坐標(biāo)，繪製出(chū)標(biāo)準品綫(xiàn)性回(huí)歸(guī)曲綫(xiàn)，按曲綫方程(chéng)計算各(gè)樣本濃度(dù)值。

試(shì)劑(jì)盒性能

 準確性
：標(biāo)準品綫(xiàn)性回歸與預(yù)期濃(nóng)度相(xiāng)關係數R值(zhí)，大於等(děng)於0.9900。

 靈(líng)敏度(dù)
：低檢測濃度(dù)小於1.0 mg/L。

 特異(yì)性
：不(bù)與(yǔ)其它可溶(róng)性結構類(lèi)似物(wù)交叉反應(yīng)。

 重(zhòng)復性
：板(bǎn)內(nèi)，板間(jiān)變異(yì)係數均(jūn)小於15%。

 貯藏(cáng)
：2-8℃，避(bì)光(guāng)防(fáng)潮保(bǎo)存(cún)。

 有效期
：6個月

免責聲明

  試(shì)劑(jì)盒(hé)僅(jǐn)供(gōng)研(yán)究(jiū)使用(yòng)，不得用於臨(lín)床(chuáng)實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則(zé)所(suǒ)產(chǎn)生的一切後果，由實驗(yàn)者(zhě)承擔，本(běn)公(gōng)司概不(bù)負(fù)責。

  嚴格按(àn)照說明(míng)書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違(wéi)反說明(míng)書操作(zuò)，後果由實驗(yàn)者承擔(dān)。