大象黃體激素(sù)(LH)ELISA檢(jiǎn)測(cè)試劑(jì)盒(hé)說明書(shū)

優(yōu)勢(shì)：

1，原裝進(jìn)口抗體(tǐ)－－－－高效(xiào)，靈敏(mǐn)，特異性好(hǎo)

2，規範(fàn)包被操(cāo)作－－－－吸(xī)附均(jūn)匀(yún)，吸附(fù)性(xìng)好，空(kōng)白(bái)值低，孔(kǒng)底(dǐ)透明度(dù)高

3，先進(jìn)的(dí)優化(huà)方案－－－－重復性(xìng)高，可(kě)靠性強(qiáng)

4，高標準(zhǔn)技術服(fú)務要(yào)求：靈敏度高，特(tè)異性強

5，適用範(fàn)圍廣(guǎng)：血(xiě)漿，血清(qīng)，組織匀漿液(yè)，細胞培(péi)養(yǎng)上清液(yè)，尿液(yè)等多(duō)種類型(xíng)的樣(yàng)本(běn)

檢測原理(lǐ)

試劑(jì)盒采用(yòng)雙(shuāng)抗體(tǐ)一(yī)步夾(jiā)心(xīn)法酶聯免疫吸附(fù)試(shì)驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包(bāo)被組胺(àn)（HIS）抗體(tǐ)的包被微孔(kǒng)中(zhōng)，依(yī)次(cì)加(jiā)入標本，標準品(pǐn)，HRP標記的檢(jiǎn)測(cè)抗體，經過(guò)溫育(yù)並徹底洗滌。用(yòng)底物(wù)TMB顯(xiǎn)色，TMB在(zài)過氧化(huà)物酶的催(cuī)化下轉化成藍色，並在酸(suān)的(dí)作用(yòng)下轉化成終的黃色。顏(yán)色的(dí)深淺和樣品(pǐn)中的(dí)組胺（HIS）呈正(zhèng)相關(guān)。用(yòng)酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸(xī)光(guāng)度（OD 值），計算(suàn)樣(yàng)品濃(nóng)度(dù)。

樣(yàng)品(pǐn)收(shōu)集(jí)，處理(lǐ)及(jí)保存方法

1.  血(xiě)清：使(shǐ)用(yòng)不(bù)含熱(rè)原和內毒(dú)素的試(shì)管，操(cāo)作過程(chéng)中(zhōng)避免(miǎn)任何(hé)細胞刺激，收集血液後，3000轉離心10分鐘將血(xiě)清和(hé)紅細胞(bāo)迅速小(xiǎo)心(xīn)地(dì)分(fēn)離(lí)。

2.  血漿：EDTA，檸(níng)檬酸鹽(yán)或肝素抗(kàng)凝。3000轉離(lí)心30分(fēn)鐘取(qǔ)上清。

3.  細胞(bāo)上清液(yè)：3000轉(zhuǎn)離(lí)心10分(fēn)鐘(zhōng)去除顆粒和聚合物(wù)。

4.  組織匀(yún)漿(jiāng)：將組織加入適(shì)量(liáng)生理鹽水搗碎(suì)。3000轉離心(xīn)10分(fēn)鐘取(qǔ)上(shàng)清。

5.  保存：如果樣本收集後(hòu)不及時檢(jiǎn)測，請按一次用量分裝(zhuāng)，凍(dòng)存於-20℃，避免(miǎn)反復凍(dòng)融，在室(shì)溫下解凍(dòng)並(bìng)確保(bǎo)樣(yàng)品均匀(yún)地充(chōng)分解(jiě)凍。

自備(bèi)物(wù)品

酶標儀(yí)（450nm）

高精度(dù)加樣器(qì)及(jí)槍頭：0.5-10uL，2-20uL，20-200uL，200-1000uL

37℃恒(héng)溫箱

操(cāo)作注(zhù)意事項(xiàng)

 試劑(jì)盒保存在(zài)2-8℃，使(shǐ)用(yòng)前室(shì)溫平衡(héng)20分(fēn)鐘。從(cóng)冰箱取(qǔ)出的(dí)濃(nóng)縮洗(xǐ)滌液(yè)會有(yǒu)結(jié)晶，這(zhè)屬(shǔ)於正常現象，水(shuǐ)浴(yù)加(jiā)熱(rè)使結晶完全溶(róng)解後(hòu)再(zài)使(shǐ)用(yòng)。

 實驗中(zhōng)不用(yòng)的板條應(yīng)立即放(fàng)回(huí)自封(fēng)袋(dài)中，密(mì)封（低(dī)溫(wēn)幹燥）保(bǎo)存。

 濃(nóng)度為0的S0號標準品即可視為(wéi)陰性對(duì)照或者空白
；按(àn)照(zhào)說明書操(cāo)作時(shí)樣(yàng)本(běn)已(yǐ)經稀(xī)釋(shì)5倍，終結果(guǒ)乘(chéng)以5才是(shì)樣本(běn)實(shí)際濃度(dù)。

 嚴格(gé)按照說明書中標(biāo)明的時間，加(jiā)液(yè)量及(jí)順(shùn)序進行溫育(yù)操(cāo)作。

 所有(yǒu)液體組分(fēn)使(shǐ)用前充分(fēn)搖匀。

試劑(jì)盒(hé)組成

名(míng)稱 96孔(kǒng)配置 48孔(kǒng)配置(zhì) 備注

微孔(kǒng)酶標(biāo)板(bǎn) 12孔×8條 12孔×4條 無

標準品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 無

樣本稀釋液 6mL 3mL 無(wú)

檢(jiǎn)測抗體(tǐ)-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩衝液(yè) 25mL 15mL 按(àn)說明(míng)書進行稀釋

底(dǐ)物A 6mL 3mL 無

底(dǐ)物(wù)B 6mL 3mL 無

終(zhōng)止(zhǐ)液 6mL 3mL 無

封(fēng)板(bǎn)膜(mó) 2張(zhāng) 2張 無

說明書 1份 1份 無

自封(fēng)袋 1個(gè) 1個 無

注(zhù)：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃(nóng)度依次為(wéi)：0，12.5，25，50，100，200 mg/L

試(shì)劑的(dí)準(zhǔn)備

20×洗滌緩(huǎn)衝(chōng)液的稀釋：蒸餾水(shuǐ)按1：20稀(xī)釋，即(jí)1份的(dí)20×洗滌緩衝液(yè)加(jiā)19份的(dí)蒸(zhēng)餾水。

洗板方法

 手工(gōng)洗板(bǎn)：甩盡孔內液體，每孔(kǒng)加(jiā)滿(mǎn)洗(xǐ)滌液，靜置1min後(hòu)甩(shuǎi)盡(jìn)孔內液(yè)體，在吸(xī)水紙上(shàng)拍幹，如(rú)此洗板(bǎn)5次(cì)。

 自動(dòng)洗板(bǎn)機：每(měi)孔(kǒng)注(zhù)入(rù)洗液(yè)350μL，浸(jìn)泡(pào)1min，洗板5次。

操作步(bù)驟

 從室溫平(píng)衡20min後的(dí)鋁(lǚ)箔袋中取(qǔ)出所(suǒ)需板(bǎn)條(tiáo)，剩(shèng)餘板條(tiáo)用(yòng)自(zì)封袋(dài)密封放回4℃。

 設置標準(zhǔn)品(pǐn)孔(kǒng)和樣本(běn)孔，標(biāo)準品(pǐn)孔(kǒng)各加(jiā)不(bù)同濃(nóng)度的(dí)標準(zhǔn)品50μL
；

 樣本孔先加(jiā)待(dài)測(cè)樣本(běn)10μL，再(zài)加樣(yàng)本稀釋(shì)液40μL
；空白(bái)孔不加(jiā)。

 除(chú)空(kōng)白孔(kǒng)外，標準(zhǔn)品(pǐn)孔和樣本孔(kǒng)中每孔(kǒng)加入辣根過氧(yǎng)化物酶（HRP）標(biāo)記(jì)的(dí)檢(jiǎn)測(cè)抗(kàng)體(tǐ)100μL，用封(fēng)板(bǎn)膜封(fēng)住反應孔(kǒng)，37℃水浴(yù)鍋(guō)或(huò)恒(héng)溫(wēn)箱(xiāng)溫育(yù)60min。

 棄(qì)去(qù)液體(tǐ)，吸水(shuǐ)紙上拍幹(gān)，每孔加滿洗滌(dí)液，靜(jìng)置1min，甩(shuǎi)去洗(xǐ)滌液，吸(xī)水紙上(shàng)拍(pāi)幹，如此(cǐ)重復(fù)洗(xǐ)板5次（也可(kě)用(yòng)洗板機洗板(bǎn)）。

 每孔加入底物(wù)A，B各(gè)50μL，37℃避光孵育15min。

 每(měi)孔(kǒng)加入(rù)終止液50μL，15min內，在450nm波長處(chǔ)測(cè)定各孔的OD值。

結果判斷

繪(huì)製標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)：在Excel工作表中(zhōng)，以(yǐ)標準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應OD值(zhí)作(zuò)縱坐標(biāo)，繪(huì)製(zhì)出(chū)標(biāo)準品(pǐn)綫(xiàn)性(xìng)回(huí)歸(guī)曲綫，按(àn)曲(qū)綫方程(chéng)計(jì)算(suàn)各(gè)樣(yàng)本濃度值。

試劑(jì)盒性能

準確(què)性(xìng)：標準(zhǔn)品綫(xiàn)性回歸(guī)與(yǔ)預(yù)期(qī)濃度(dù)相(xiāng)關係數R值，大於(yú)等於(yú)0.9900。

靈敏(mǐn)度(dù)：低檢(jiǎn)測濃度小(xiǎo)於(yú)1.0 mg/L。

特異(yì)性(xìng)：不與(yǔ)其(qí)它可溶(róng)性結構(gòu)類似(sì)物(wù)交(jiāo)叉反應。

重復性：板(bǎn)內(nèi)，板間(jiān)變異係(xì)數(shù)均(jūn)小(xiǎo)於(yú)15%。

貯(zhù)藏：2-8℃，避光防(fáng)潮保存(cún)。

有效(xiào)期(qī)：6個月

免責聲(shēng)明

 試劑盒僅(jǐn)供研(yán)究(jiū)使(shǐ)用，不得用於臨(lín)床(chuáng)實(shí)驗(yàn)或人體實驗，否則所(suǒ)產(chǎn)生的(dí)一切(qiē)後(hòu)果，由(yóu)實(shí)驗者承(chéng)擔，本公(gōng)司概不(bù)負責。

 嚴格(gé)按照說(shuō)明(míng)書(shū)操(cāo)作(zuò)，實驗者(zhě)違(wéi)反說明書(shū)操(cāo)作，後果由實驗者承擔。