鴿子(zǐ)脂聯素(ADP)ELISA檢(jiǎn)測(cè)試劑盒說明(míng)書(shū)

優(yōu)勢(shì)：

1，原裝(zhuāng)進(jìn)口抗體(tǐ)－－－－高效(xiào)，靈(líng)敏，特異(yì)性好(hǎo)

2，規範(fàn)包被(bèi)操作(zuò)－－－－吸附(fù)均(jūn)匀，吸附性(xìng)好(hǎo)，空白值低(dī)，孔底(dǐ)透(tòu)明度高

3，先進的優(yōu)化方案－－－－重復性高(gāo)，可靠性(xìng)強(qiáng)

4，高(gāo)標準技術(shù)服(fú)務(wù)要求(qiú)：靈敏度(dù)高，特異(yì)性強(qiáng)

5，適用(yòng)範(fàn)圍廣：血漿，血清，組(zǔ)織(zhī)匀(yún)漿液(yè)，細胞培(péi)養(yǎng)上(shàng)清(qīng)液，尿液(yè)等(děng)多(duō)種類(lèi)型的(dí)樣(yàng)本(běn)

檢(jiǎn)測(cè)原理

試(shì)劑(jì)盒采(cǎi)用(yòng)雙(shuāng)抗體一步夾(jiā)心(xīn)法酶聯免疫吸(xī)附試(shì)驗（ELISA）
。往預先包被組胺（HIS）抗體的包被(bèi)微孔(kǒng)中，依(yī)次(cì)加入標本(běn)，標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)，HRP標記的檢(jiǎn)測抗體，經(jīng)過溫育(yù)並(bìng)徹底洗滌(dí)
。用底(dǐ)物TMB顯(xiǎn)色，TMB在(zài)過氧(yǎng)化物(wù)酶的(dí)催化下(xià)轉(zhuǎn)化(huà)成藍色(sè)，並在酸(suān)的作(zuò)用下(xià)轉化(huà)成(chéng)終的黃(huáng)色(sè)
。顏(yán)色的深淺和(hé)樣(yàng)品(pǐn)中的組(zǔ)胺(àn)（HIS）呈正相(xiāng)關
。用酶(méi)標(biāo)儀(yí)在(zài)450nm 波長下測定吸(xī)光(guāng)度(dù)（OD 值(zhí)），計(jì)算樣(yàng)品(pǐn)濃度
。

樣(yàng)品收集，處理及保(bǎo)存方(fāng)法

1.  血清：使用(yòng)不(bù)含(hán)熱(rè)原和內毒素的試管(guǎn)，操作過(guò)程(chéng)中(zhōng)避(bì)免任何細胞(bāo)刺(cì)激(jī)，收(shōu)集(jí)血液後，3000轉離(lí)心(xīn)10分(fēn)鐘將血清(qīng)和紅細(xì)胞(bāo)迅速小心(xīn)地分(fēn)離
。

2.  血(xiě)漿(jiāng)：EDTA，檸(níng)檬酸鹽(yán)或肝(gān)素(sù)抗凝
。3000轉離(lí)心(xīn)30分(fēn)鐘(zhōng)取上(shàng)清(qīng)
。

3.  細(xì)胞上(shàng)清液(yè)：3000轉離心10分鐘去除(chú)顆(kē)粒和(hé)聚合(hé)物
。

4.  組織(zhī)匀漿：將組織(zhī)加入適量生理鹽(yán)水搗碎
。3000轉離(lí)心10分(fēn)鐘(zhōng)取上清
。

5.  保(bǎo)存：如果(guǒ)樣本收(shōu)集後(hòu)不(bù)及時(shí)檢(jiǎn)測，請按一次(cì)用量分(fēn)裝，凍存於(yú)-20℃，避免反(fǎn)復凍融(róng)，在室溫下(xià)解(jiě)凍並確保(bǎo)樣品(pǐn)均匀(yún)地充(chōng)分解凍
。

自(zì)備物(wù)品

酶(méi)標(biāo)儀（450nm）

高(gāo)精度(dù)加樣(yàng)器(qì)及槍頭：0.5-10uL，2-20uL，20-200uL，200-1000uL

37℃恒溫(wēn)箱(xiāng)

操(cāo)作注意事(shì)項

1.  試(shì)劑盒保(bǎo)存在2-8℃，使用前(qián)室溫(wēn)平(píng)衡20分(fēn)鐘
。從冰箱取出(chū)的(dí)濃縮(suō)洗滌(dí)液會(huì)有結(jié)晶(jīng)，這屬(shǔ)於正常現象，水浴(yù)加熱使(shǐ)結晶完全溶(róng)解(jiě)後再(zài)使用(yòng)
。

2.  實驗(yàn)中(zhōng)不(bù)用(yòng)的板(bǎn)條應立即(jí)放(fàng)回(huí)自(zì)封袋中，密封(fēng)（低溫幹燥）保存(cún)
。

3.  濃度為0的S0號(hào)標準品即(jí)可視(shì)為陰(yīn)性對(duì)照(zhào)或者(zhě)空白；按(àn)照說(shuō)明書操(cāo)作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，終結(jié)果乘以(yǐ)5才是樣本實(shí)際(jì)濃度
。

4.  嚴格按照說明書中(zhōng)標明的時(shí)間，加液(yè)量(liáng)及順序(xù)進行溫育(yù)操作
。

5.  所有液體組分(fēn)使用前充分搖(yáo)匀
。

試劑(jì)盒組(zǔ)成

名稱 96孔(kǒng)配(pèi)置(zhì) 48孔配置 備(bèi)注

微(wēi)孔酶標(biāo)板 12孔(kǒng)×8條(tiáo) 12孔×4條 無(wú)

標(biāo)準品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 無(wú)

樣(yàng)本(běn)稀釋(shì)液 6mL 3mL 無

檢測抗體(tǐ)-HRP 10mL 5mL 無(wú)

20×洗滌(dí)緩衝液 25mL 15mL 按說(shuō)明書進(jìn)行稀(xī)釋

底(dǐ)物(wù)A 6mL 3mL 無(wú)

底物B 6mL 3mL 無

終止液(yè) 6mL 3mL 無

封板膜(mó) 2張 2張 無(wú)

說(shuō)明書(shū) 1份 1份(fèn) 無

自封(fēng)袋(dài) 1個(gè) 1個(gè) 無(wú)

注(zhù)：標(biāo)準品(pǐn)（S0-S5）濃(nóng)度(dù)依次為：0，12.5，25，50，100，200 mg/L

試(shì)劑的準(zhǔn)備

20×洗滌(dí)緩衝液的(dí)稀釋：蒸(zhēng)餾水按1：20稀釋(shì)，即1份的20×洗滌(dí)緩衝液加19份的(dí)蒸餾水
。

洗(xǐ)板方法

1.  手(shǒu)工(gōng)洗板：甩盡孔內(nèi)液(yè)體(tǐ)，每(měi)孔(kǒng)加滿洗滌(dí)液(yè)，靜置1min後甩盡(jìn)孔內液(yè)體，在吸水(shuǐ)紙上拍幹，如此洗(xǐ)板5次
。

2.  自(zì)動洗板機：每孔(kǒng)注入洗液(yè)350μL，浸泡(pào)1min，洗板(bǎn)5次(cì)
。

操作(zuò)步驟(zhòu)

1.  從室溫平衡20min後的(dí)鋁箔袋中取出所(suǒ)需板(bǎn)條(tiáo)，剩(shèng)餘板條用自封袋(dài)密封(fēng)放(fàng)回(huí)4℃
。

2.  設(shè)置(zhì)標準品(pǐn)孔和(hé)樣(yàng)本孔，標準品孔各加不(bù)同(tóng)濃度的標(biāo)準品50μL；

3.  樣本孔(kǒng)先加待測樣本10μL，再加(jiā)樣本(běn)稀(xī)釋液(yè)40μL；空(kōng)白(bái)孔(kǒng)不(bù)加
。

4.  除空白孔外，標準品孔和(hé)樣本孔中每孔加(jiā)入辣根(gēn)過氧化(huà)物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗(kàng)體100μL，用(yòng)封(fēng)板膜(mó)封住反(fǎn)應孔，37℃水浴鍋(guō)或恒溫箱溫(wēn)育60min
。

5.  棄去液(yè)體(tǐ)，吸水紙上拍幹(gān)，每(měi)孔加(jiā)滿洗(xǐ)滌液，靜置1min，甩(shuǎi)去(qù)洗滌液，吸(xī)水紙上拍(pāi)幹(gān)，如(rú)此(cǐ)重(zhòng)復(fù)洗(xǐ)板(bǎn)5次(cì)（也(yě)可(kě)用洗板(bǎn)機(jī)洗(xǐ)板(bǎn)）
。

6.  每(měi)孔加入底(dǐ)物(wù)A，B各50μL，37℃避光(guāng)孵育(yù)15min
。

7.  每(měi)孔加入終(zhōng)止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各(gè)孔的OD值(zhí)
。

結果(guǒ)判斷

繪製標(biāo)準(zhǔn)曲綫(xiàn)：在Excel工作(zuò)表中(zhōng)，以標準品濃度(dù)作(zuò)橫坐標(biāo)，對應OD值作(zuò)縱坐標(biāo)，繪製出(chū)標(biāo)準品(pǐn)綫性回(huí)歸曲(qū)綫(xiàn)，按(àn)曲(qū)綫方(fāng)程計算(suàn)各樣本(běn)濃度值
。

試劑(jì)盒(hé)性能(néng)

 準(zhǔn)確性：標準(zhǔn)品(pǐn)綫性回歸與預期濃度相關(guān)係數R值(zhí)，大於(yú)等(děng)於(yú)0.9900
。

 靈敏度：低檢測濃(nóng)度小(xiǎo)於1.0 mg/L
。

 特異性：不與其(qí)它可溶(róng)性結構(gòu)類(lèi)似(sì)物(wù)交叉(chā)反(fǎn)應
。

 重復性：板(bǎn)內，板間(jiān)變異(yì)係數(shù)均(jūn)小(xiǎo)於15%
。

 貯藏：2-8℃，避(bì)光(guāng)防潮保存(cún)
。

 有效期：6個月

免責(zé)聲(shēng)明(míng)

  試劑(jì)盒僅供(gōng)研(yán)究使用，不(bù)得(dé)用(yòng)於臨床實(shí)驗或人(rén)體實驗，否則(zé)所產生(shēng)的一(yī)切後(hòu)果(guǒ)，由(yóu)實(shí)驗(yàn)者(zhě)承擔(dān)，本公司概不(bù)負(fù)責(zé)
。

  嚴(yán)格按照(zhào)說明書(shū)操(cāo)作(zuò)，實(shí)驗者(zhě)違(wéi)反說(shuō)明(míng)書操作(zuò)，後(hòu)果由實驗者承擔
。