犬(quǎn)血纖(xiān)蛋(dàn)白原(yuán)降解產物(FDP)elisa檢(jiǎn)測試劑盒操(cāo)作步驟(zhòu):

1. 標準品的(dí)稀釋與加樣
：在酶標包(bāo)被板(bǎn)上(shàng)設標準品孔10孔(kǒng)
，在di一，第二孔(kǒng)中(zhōng)分別(bié)加標準品100μl
，然後(hòu)在di一，第(dì)二孔(kǒng)中(zhōng)加(jiā)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液50μl
，混匀；然後從di一(yī)孔，第二孔中各取100μl分(fēn)別加到第(dì)三孔(kǒng)和(hé)第四孔(kǒng)
，再在(zài)第三(sān)，第(dì)四孔分別(bié)加標(biāo)準(zhǔn)品稀(xī)釋液(yè)50μl
，混匀；然後在(zài)第三孔(kǒng)和第(dì)四孔中先各(gè)取(qǔ)50μl棄(qì)掉(diào)
，再(zài)各(gè)取(qǔ)50μl分別加到第五，第六孔中
，再在第五(wǔ)，第(dì)六(liù)孔(kǒng)中(zhōng)分別加(jiā)標(biāo)準品稀釋液50ul
，混匀；混(hùn)匀後從第(dì)五，第六孔(kǒng)中各取50μl分別加到第七，第八(bā)孔中
，再在第七，第(dì)八孔中(zhōng)分(fēn)別加標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)50μl
，混匀(yún)後(hòu)從(cóng)第(dì)七(qī)，第(dì)八(bā)孔(kǒng)中分別取50μl加(jiā)到(dào)第九，第十孔中(zhōng)
，再(zài)在(zài)第九第十孔分別(bié)加標準品稀釋液50μl
，混匀後從第九(jiǔ)第(dì)十孔中(zhōng)各(gè)取50μl棄掉。（稀(xī)釋後各孔(kǒng)加樣(yàng)量都(dū)為50μl
，濃(nóng)度分(fēn)別為(wéi)180 ng/L
，120 ng/L 
，60 ng/L
，30 ng/
，15 ng/L）。

2. 加樣(yàng)
：分別設空白(bái)孔（空(kōng)白(bái)對(duì)照(zhào)孔(kǒng)不加(jiā)樣(yàng)品及(jí)酶(méi)標試(shì)劑
，其(qí)餘(yú)各步操作相同），待測(cè)樣(yàng)品孔(kǒng)。在酶(méi)標包(bāo)被(bèi)板(bǎn)上(shàng)待測(cè)樣品孔(kǒng)中先(xiān)加樣品(pǐn)稀釋液(yè)40μl
，然後再加待(dài)測(cè)樣品(pǐn)10μl（樣(yàng)品(pǐn)最終(zhōng)稀(xī)釋度為5倍）。加樣將樣品(pǐn)加於(yú)酶標(biāo)板(bǎn)孔底部(bù)
，盡(jìn)量不觸及孔(kǒng)壁
，輕輕晃動混匀(yún)。

3. 溫育
：用封板膜封板後置(zhì)37℃溫(wēn)育(yù)30分(fēn)鐘。

4. 配液(yè)
：將(jiāng)30（48T的20倍）倍(bèi)濃縮洗(xǐ)滌液用蒸餾水30（48T的(dí)20倍）倍(bèi)稀釋(shì)後備用。

5. 洗(xǐ)滌(dí)
：小心揭(jiē)掉封板膜
，棄去液(yè)體(tǐ)
，甩(shuǎi)幹
，每(měi)孔(kǒng)加滿洗滌(dí)液
，靜(jìng)置30秒(miǎo)後(hòu)棄(qì)去
，如此(cǐ)重復5次
，拍(pāi)幹。

6. 加酶
：每孔(kǒng)加入酶標試(shì)劑(jì)50μl
，空白孔除外(wài)。

7. 溫(wēn)育(yù)
：操作(zuò)同3。

8. 洗(xǐ)滌(dí)
：操(cāo)作同5。

9. 顯色
：每孔先加(jiā)入(rù)顯色(sè)劑(jì)A50μl
，再加(jiā)入顯色劑B50μl
，輕(qīng)輕震蕩(dàng)混(hùn)匀
，37℃避光顯(xiǎn)色15分鐘.

10. 終止
：每孔加終止(zhǐ)液(yè)50μl
，終止(zhǐ)反(fǎn)應（此(cǐ)時藍色立轉黃色）。

11. 測定
：以空白空調零
，450nm波長依(yī)序測量(liáng)各孔的吸(xī)光(guāng)度（OD值）。 測(cè)定(dìng)應在(zài)加(jiā)終(zhōng)止液(yè)後15分(fēn)鐘(zhōng)。

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