犬細小(xiǎo)病毒探(tàn)針法(fǎ)熒光定(dìng)量PCR檢測(cè)試劑盒(hé)使用(yòng)方(fāng)法：
測定法(fǎ)的靈(líng)敏度來自(zì)作為報告(gào)的酶。酶是一(yī)種有機催化(huà)劑(jì)，很少量(liáng)的酶即可(kě)誘導(dǎo)大(dà)量(liáng)的(dí)催(cuī)化反應(yīng)，產生(shēng)可(kě)供觀察的顯色(sè)反應現(xiàn)象(xiàng)。因(yīn)此該(gāi)體係常(cháng)被稱(chēng)為酶放大體係。
1. 標準品的(dí)稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍標準(zhǔn)品(pǐn)一(yī)支(zhī)，用戶可(kě)按照(zhào)下列圖表在小試(shì)管中進行(háng)稀(xī)釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準品    150μl的(dí)原倍標準品加(jiā)入(rù)150μl標(biāo)準品(pǐn)稀釋液(yè)
 12μg/ml    4號標準(zhǔn)品    150μl的5號標準品(pǐn)加(jiā)入(rù)150μl標(biāo)準品稀釋(shì)液
 6μg/ml     3號標準品    150μl的(dí)4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號(hào)標準品(pǐn)    150μl的3號標(biāo)準品(pǐn)加入150μl標準(zhǔn)品稀(xī)釋液
 1.5μg/ml   1號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)    150μl的2號標(biāo)準品加(jiā)入(rù)150μl標準品稀釋液(yè)
2. 加樣：分別設(shè)空(kōng)白孔，標準孔，待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被(bèi)板(bǎn)上標準(zhǔn)品(pǐn)準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔(kǒng)中(zhōng)先(xiān)加樣品(pǐn)稀釋液40μl，然後(hòu)再加待(dài)測樣(yàng)品10μl（樣(yàng)品終(zhōng)稀釋度(dù)為(wéi)5倍）。加(jiā)樣將樣品(pǐn)加於酶標板孔底(dǐ)部(bù)，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃(huǎng)動混匀(yún)。|
3. 溫育：用封板膜封板後置(zhì)37℃溫(wēn)育30分鐘(zhōng)。   
4. 配液：將(jiāng)30倍濃(nóng)縮(suō)洗(xǐ)滌液(yè)用蒸餾水30倍(bèi)稀(xī)釋(shì)後(hòu)備(bèi)用(yòng)
5. 洗滌：小(xiǎo)心揭(jiē)掉封板膜，棄(qì)去液體，甩(shuǎi)幹，每(měi)孔(kǒng)加滿洗滌(dí)液，靜置30秒(miǎo)後棄去(qù)，如(rú)此(cǐ)重復5次，拍幹(gān)。
6. 加(jiā)酶：每(měi)孔(kǒng)加入(rù)酶標(biāo)試劑(jì)50μl，空白(bái)孔(kǒng)除外(wài)。
7. 溫(wēn)育(yù)：操(cāo)作同3。
8. 洗(xǐ)滌(dí)：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入(rù)顯色劑(jì)A50μl，再(zài)加(jiā)入顯色劑B50μl，輕輕震(zhèn)蕩(dàng)混匀，37℃避(bì)光(guāng)顯色15分(fēn)鐘.
10. 終止：每(měi)孔加終止液50μl，終止(zhǐ)反(fǎn)應（此時藍(lán)色立(lì)轉黃(huáng)色(sè)）。
11. 測定(dìng)：以空(kōng)白(bái)空調(tiáo)零(líng)，450nm波(bō)長依(yī)序(xù)測量(liáng)各孔的(dí)吸光度（OD值(zhí)）。 測定(dìng)應(yīng)在(zài)加(jiā)終(zhōng)止液(yè)後15分鐘以內進(jìn)行。