人C1q相(xiāng)關(guān)蛋(dàn)白1ELISA試(shì)劑盒操作步驟(zhòu)

1. 標準品的稀釋(shì)與(yǔ)加樣：在酶標(biāo)包被板(bǎn)上設標(biāo)準品孔10孔
，在di一，第二(èr)孔(kǒng)中分(fēn)別(bié)加(jiā)標準(zhǔn)品(pǐn)100μl
，然後在di一，第(dì)二孔中加(jiā)標(biāo)準(zhǔn)品稀(xī)釋(shì)液50μl
，混(hùn)匀(yún)；然(rán)後(hòu)從di一(yī)孔，第二(èr)孔(kǒng)中各(gè)取100μl分(fēn)別加到(dào)第三孔(kǒng)和(hé)第四孔
，再在第三，第四(sì)孔分(fēn)別加標準(zhǔn)品稀釋液50μl
，混(hùn)匀(yún)；然後(hòu)在(zài)第三(sān)孔(kǒng)和第四(sì)孔中先各(gè)取50μl棄掉
，再(zài)各取(qǔ)50μl分別取50μl分(fēn)別加到第七(qī)，第八(bā)孔(kǒng)中(zhōng)
，再在第(dì)七，第八孔中(zhōng)分(fēn)別加(jiā)標準品稀(xī)釋液(yè)50μl
，混匀(yún)後從第七，第八孔(kǒng)中加到(dào)第(dì)五，第(dì)六孔中
，再(zài)在(zài)第五，第(dì)六(liù)孔(kǒng)中分別(bié)加(jiā)標(biāo)準品(pǐn)稀釋(shì)液50ul
，混匀；混匀後(hòu)從第五(wǔ)，第六孔(kǒng)中各(gè)分別(bié)取50μl加到第九，第(dì)十(shí)孔中(zhōng)
，再(zài)在第(dì)九(jiǔ)第十(shí)孔(kǒng)分別加標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液50μl
，混(hùn)匀(yún)後(hòu)從(cóng)第九(jiǔ)第十孔中各(gè)取50μl棄(qì)掉。（稀(xī)釋後(hòu)各孔(kǒng)加(jiā)樣量(liáng)都(dū)為50μl
，濃度(dù)分別(bié)為(wéi)180 ng/L
，120 ng/L
，60 ng/L
，30 ng/
，15 ng/L）。
2. 加(jiā)樣(yàng)：分(fēn)別(bié)設(shè)空(kōng)白孔(kǒng)（空白對照孔(kǒng)不加樣品及酶標試劑(jì)
，其餘各(gè)步(bù)操作相同），待測(cè)樣品孔。在酶標包(bāo)被板上(shàng)待測樣(yàng)品孔中先加樣(yàng)品稀釋液40μl
，然(rán)後再加待測樣(yàng)品10μl（樣(yàng)品(pǐn)最(zuì)終(zhōng)稀釋(shì)度(dù)為5倍）。加樣將樣(yàng)品加於酶(méi)標板孔底(dǐ)部
，盡(jìn)量不(bù)觸及(jí)孔(kǒng)壁
，輕輕(qīng)晃動混(hùn)匀(yún)。
3. 溫育：用封板膜(mó)封板後(hòu)置37℃溫(wēn)育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃(nóng)縮(suō)洗(xǐ)滌(dí)液用蒸餾(liù)水30（48T的20倍）倍稀(xī)釋後(hòu)備用。
5. 洗滌：小心(xīn)揭掉(diào)封板膜
，棄去液(yè)體
，甩(shuǎi)幹
，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗(xǐ)滌液
，靜(jìng)置(zhì)30秒(miǎo)後棄去
，如(rú)此重復5次
，拍(pāi)幹。
6. 加酶(méi)：每孔加入酶標(biāo)試劑(jì)50μl
，空(kōng)白(bái)孔除外。
7. 溫育：操作同(tóng)3。
8. 洗滌(dí)：操(cāo)作(zuò)同5。
9. 顯色(sè)：每(měi)孔先加入顯色(sè)劑A50μl
，再(zài)加(jiā)入(rù)顯(xiǎn)色(sè)劑(jì)B50μl
，輕輕震蕩(dàng)混(hùn)匀(yún)
，37℃避光顯(xiǎn)色15分鐘.
10. 終止(zhǐ)：每(měi)孔(kǒng)加(jiā)終止液50μl
，終(zhōng)止反(fǎn)應（此(cǐ)時藍色(sè)立(lì)轉(zhuǎn)黃(huáng)色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(tiáo)零
，450nm波(bō)長依序(xù)測量各孔(kǒng)的吸光度(dù)（OD值）。 測定(dìng)應在加(jiā)終(zhōng)止液後15分鐘(zhōng)。