豬心(xīn)肌(jī)成(chéng)纖維細胞培養技(jì)巧：

1.準備：取各(gè)種(zhǒng)已消毒的培(péi)養(yǎng)用品置於淨(jìng)化(huà)台(tái)麵，紫外綫消毒20分鐘(zhōng)。開始工作前(qián)先洗(xǐ)手，75%酒(jiǔ)精擦拭手(shǒu)至肘(zhǒu)部(bù)。

2.布局：點燃酒(jiǔ)精燈(dēng)，安裝吸管(guǎn)帽。

3.處理(lǐ)組織(zhī)：把組織(zhī)塊(kuài)置(zhì)於燒杯(bēi)中，用(yòng)Hanks液(yè)漂洗2~3次，去除(chú)血汙(wū)；如(rú)懷疑組織可能(néng)汙(wū)染(rǎn)，可先(xiān)置於含(hán)有青的混(hùn)合液中30~60分鐘(zhōng)。

4.剪(jiǎn)切(qiē)：用眼科(kē)剪把(bǎ)組(zǔ)織切成2~3毫(háo)米大小的(dí)塊，以便(biàn)於消(xiāo)化(huà)。加入(rù)比(bǐ)組織(zhī)塊(kuài)總量多30~50倍(bèi)的(dí)液，然(rán)後(hòu)一(yī)並倒(dǎo)入三(sān)角燒(shāo)瓶中(zhōng)，結(jié)紮(zā)瓶口或塞以膠塞。

5.消(xiāo)化(huà)：或(huò)用(yòng)恒(héng)溫水浴(yù)，或(huò)置於37℃溫箱消化(huà)均(jūn)可，消(xiāo)化中每(měi)隔(gé)20分鐘應搖動(dòng)一次(cì)，如用電磁恒溫攪拌(bàn)器消化(huà)更(gēng)好(hǎo)。消化(huà)時間(jiān)依組(zǔ)織(zhī)塊(kuài)的大小和(hé)組織(zhī)的(dí)硬度而(ér)定。

6.分離：在(zài)消(xiāo)化過程(chéng)中見消化(huà)液(yè)發混(hùn)濁(zhuó)時，可用吸(xī)管吸出(chū)少許消(xiāo)化(huà)液(yè)在(zài)鏡(jìng)下觀(guān)察，如組織(zhī)已分散(sàn)成(chéng)細胞(bāo)團或(huò)單個細胞，立即終(zhōng)止消(xiāo)化，隨即通(tōng)過(guò)適(shì)宜不(bù)鏽(xiù)鋼(gāng)篩(shāi)，濾(lǜ)掉(diào)尚未充分消(xiāo)化(huà)開(kāi)的(dí)組織塊(kuài)。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離(lí)心消化(huà)液5分(fēn)鐘，吸(xī)出(chū)上清，加(jiā)入(rù)適(shì)量(liáng)含(hán)有血(xiě)清(qīng)的(dí)培(péi)養液。

7.計數：用計數(shù)板(bǎn)計數，如細胞(bāo)懸液細胞(bāo)密(mì)度(dù)過(guò)大，再(zài)補(bǔ)加培養(yǎng)液(yè)調整(zhěng)後，分(fēn)裝入培養(yǎng)瓶(píng)中。對大多數細胞來(lái)說，pH要(yào)求(qiú)在7.2~7.4範圍(wéi)，培(péi)養(yǎng)液呈(chéng)微(wēi)紅(hóng)色(sè)，如顏(yán)色偏黃(huáng)，說明液體變酸，可用NaHCO3調(tiáo)整(zhěng)。

8.培(péi)養：置於36.5℃溫箱培養，如用CO2溫箱(xiāng)培(péi)養，瓶(píng)蓋(gài)需擰鬆半(bàn)圈(quān)。