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PCR檢測(cè)試(shì)劑(jì)盒(hé)
| 產品名稱 | 英文(wén)名(míng)稱 | 貨(huò)號 |
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馬立(lì)克氏病病毒(dú)型(xíng)PCR檢測(cè)試(shì)劑(jì)盒(hé) |
Marek's Disease Virus(MDV)3PCR |
YS-P014404 |
分類(lèi):PCR檢(jiǎn)測試(shì)劑盒
儲存條件:-20℃避光(guāng)保(bǎo)存,避免(miǎn)反復凍(dòng)融。
運(yùn)輸(shū):低(dī)溫,避光。
有效期:一年
貨期(qī):現(xiàn)貨PCR試劑(jì)盒的(dí)有效(xiào)期一般為(wéi)1年(nián),這是指在(zài)適當的儲(chǔ)存溫(wēn)度下。核酸(suān)擴增(zēng)部分的(dí)試(shì)劑一(yī)般要貯存(cún)於(yú)-20℃下(xià),產(chǎn)物(wù)檢測部(bù)分試(shì)劑(jì)則貯(zhù)存(cún)於2-8℃。盡(jìn)量避免反(fǎn)復(fù)凍(dòng)融。
u 閾值(zhí)(Threshold)設(shè)定:將閾(yù)值(zhí)綫設(shè)定(dìng)在(zài)剛好(hǎo)超(chāo)過正常(cháng)陰性(xìng)質控(kòng)品(pǐn)擴增(zēng)曲綫(xiàn)的最(zuì)高點(diǎn)。
2. 陽(yáng)性質控品的(dí)檢測(cè)結果應(yīng)為(wéi)陽性,有(yǒu)明顯(xiǎn)的指數(shù)擴增期,Ct值應小(xiǎo)於等於35;
3. 以(yǐ)上要(yào)求(qiú)需在一次實驗(yàn)中同時(shí)滿足(zú),否則(zé)該(gāi)次實(shí)驗視(shì)為無(wú)效(xiào)。
2.可疑:有明(míng)顯(xiǎn)的指數(shù)擴(kuò)增(zēng)期(qī),且38≤Ct<40,此(cǐ)時(shí)樣(yàng)本(běn)為可(kě)疑樣(yàng)本;對(duì)於可疑(yí)樣(yàng)本建議(yì)復(fù)核一(yī)次(cì),若(ruò)復核結(jié)果(guǒ)Ct<40且有指數(shù)擴增(zēng)期(qī),則(zé)判(pàn)定為陽性(xìng),否(fǒu)則判(pàn)定(dìng)為陰性(xìng);
3. 陰(yīn)性(xìng):無指數(shù)擴(kuò)增(zēng)期(qī),Ct=40或無(wú)Ct值均判定(dìng)為(wéi)陰(yīn)性(xìng)樣(yàng)本。
【對檢驗結(jié)果的解釋(shì)】
1. 實驗室環境(jìng)汙染,試劑(jì)汙(wū)染(rǎn),樣(yàng)品(pǐn)交叉汙染(rǎn)會(huì)出現假(jiǎ)陽性(xìng)結果;
2. 試劑運輸(shū),保存不當(dāng)或試劑配(pèi)製不準(zhǔn)確引起的(dí)試(shì)劑(jì)檢(jiǎn)測效能下(xià)降,可(kě)能(néng)會(huì)導致出現假陰性結果。
②鹼基配(pèi)對(duì)原則(zé);
③Taq DNA聚合酶(méi)合(hé)成反應的忠(zhōng)實性;
④靶基因(yīn)的(dí)特異(yì)性與保(bǎo)守性(xìng)。
馬(mǎ)立(lì)克(kè)氏(shì)病(bìng)病毒型(xíng)PCR檢測試劑(jì)盒其(qí)中(zhōng)引物(wù)與(yǔ)模板的(dí)正確(què)結合是關鍵(jiàn)。引物(wù)與(yǔ)模(mó)板(bǎn)的結(jié)合及(jí)引(yǐn)物鏈(liàn)的延伸是遵(zūn)循鹼(jiǎn)基配對原則(zé)的(dí)。聚合酶(méi)合(hé)成反(fǎn)應的忠實性(xìng)及Taq DNA聚合酶耐高溫(wēn)性(xìng),使(shǐ)反(fǎn)應中模板(bǎn)與引物(wù)的(dí)結合(復性)可(kě)以在(zài)較高(gāo)的溫度(dù)下進(jìn)行(háng),結合(hé)的特(tè)異性大大(dà)增(zēng)加(jiā),被擴增(zēng)的靶基因片(piàn)段也就(jiù)能保(bǎo)持很高的(dí)正(zhèng)確度(dù)。再(zài)通過選擇特異(yì)性和(hé)保守性高的靶基因區(qū),其特(tè)異性(xìng)程度就更(gēng)高(gāo)。
(2) 靈(líng)敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是(shì)以(yǐ)指數(shù)方式(shì)增(zēng)加的,能(néng)將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的(dí)起始(shǐ)待測模板擴增(zēng)到微(wēi)克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中(zhōng)檢(jiǎn)出(chū)一個(gè)靶(bǎ)細胞(bāo);在病毒的檢(jiǎn)測中,PCR的(dí)靈敏度可達3個(gè)RFU(空斑形(xíng)成(chéng)單位);在(zài)細菌學(xué)中zui小(xiǎo)檢(jiǎn)出率為(wéi)3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便,快速(sù)
PCR反(fǎn)應用耐高溫(wēn)的Taq DNA聚合(hé)酶,一(yī)次性地將反(fǎn)應(yīng)液加好後,即在DNA擴增液和水浴鍋上(shàng)進行(háng)變性-退火-延伸反(fǎn)應,一般在2~4 小(xiǎo)時完成(chéng)擴(kuò)增(zēng)反(fǎn)應。擴增(zēng)產物一(yī)般用電泳分析(xī),不(bù)一定要(yào)用同位素,無(wú)放射(shè)性汙染,易(yì)推(tuī)廣。
(4) 對標本的純度要求(qiú)低
不(bù)需要(yào)分離病毒或細菌及培(péi)養(yǎng)細胞,DNA 粗製品及(jí)總RNA均(jūn)可(kě)作為(wéi)擴(kuò)增模板(bǎn)。可(kě)直(zhí)接(jiē)用(yòng)臨床標本如血液,體(tǐ)腔(qiāng)液,洗嗽(sòu)液,毛(máo)發,細胞,活PCR技術概論(lùn)。
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