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PCR檢測試(shì)劑盒
| 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
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饒氏(shì)無(wú)綠藻(zǎo)PCR檢(jiǎn)測試(shì)劑盒(hé) |
Prototheca zopfiiPCR |
YS-P014643 |
分類(lèi):PCR檢測(cè)試(shì)劑(jì)盒(hé)
儲(chǔ)存條件:-20℃避(bì)光保存,避(bì)免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸(shū):低(dī)溫(wēn),避光。
有(yǒu)效期:一年(nián)
貨(huò)期(qī):現貨(huò)PCR試劑(jì)盒(hé)的有效期一(yī)般(bān)為(wéi)1年,這(zhè)是指在(zài)適當(dāng)的儲存溫度(dù)下(xià)。核酸(suān)擴增部(bù)分的試(shì)劑一般要貯存(cún)於-20℃下,產物檢(jiǎn)測部(bù)分(fēn)試(shì)劑則(zé)貯存於2-8℃。盡量避免(miǎn)反復(fù)凍融。
u 閾值(Threshold)設定:將閾值綫(xiàn)設定(dìng)在剛好超過(guò)正常陰性質(zhì)控品擴增(zēng)曲綫的最(zuì)高(gāo)點(diǎn)。
2. 陽性質控品的檢測結(jié)果(guǒ)應為陽性,有(yǒu)明顯(xiǎn)的指(zhǐ)數(shù)擴增(zēng)期,Ct值(zhí)應小於等(děng)於(yú)35;
3. 以(yǐ)上要(yào)求需在(zài)一次實驗中(zhōng)同時滿足(zú),否(fǒu)則該(gāi)次實驗視為無(wú)效(xiào)。
2.可疑:有明顯的指數擴增(zēng)期(qī),且(qiě)38≤Ct<40,此(cǐ)時樣(yàng)本(běn)為可(kě)疑(yí)樣本;對於可(kě)疑樣(yàng)本建(jiàn)議(yì)復(fù)核(hé)一次(cì),若(ruò)復(fù)核結(jié)果(guǒ)Ct<40且有指數擴(kuò)增期(qī),則判定為(wéi)陽性,否則判定為陰性;
3. 陰(yīn)性:無(wú)指數(shù)擴增(zēng)期,Ct=40或無Ct值均判定為陰(yīn)性樣(yàng)本。
【對檢(jiǎn)驗結(jié)果(guǒ)的解釋】
1. 實驗室(shì)環(huán)境汙染,試劑汙染(rǎn),樣品交叉(chā)汙染會出(chū)現(xiàn)假陽性結果;
2. 試(shì)劑運(yùn)輸(shū),保(bǎo)存不(bù)當或試劑配製不準確(què)引起(qǐ)的試劑檢測(cè)效能(néng)下(xià)降(jiàng),可(kě)能會(huì)導(dǎo)致(zhì)出現假(jiǎ)陰(yīn)性結果(guǒ)。
②鹼基配(pèi)對原(yuán)則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性(xìng);
④靶基因的特異性與保(bǎo)守性(xìng)。
饒氏無綠藻(zǎo)PCR檢測試(shì)劑盒其(qí)中(zhōng)引物與模板的正確結(jié)合是關鍵(jiàn)。引物(wù)與(yǔ)模板(bǎn)的(dí)結合(hé)及(jí)引物鏈(liàn)的(dí)延伸(shēn)是遵循鹼(jiǎn)基(jī)配對(duì)原則(zé)的。聚合(hé)酶合成反(fǎn)應的忠實性及Taq DNA聚(jù)合(hé)酶(méi)耐高溫性(xìng),使(shǐ)反(fǎn)應(yīng)中模板與引物的結合(復性)可以在較(jiào)高的溫(wēn)度(dù)下進(jìn)行,結合的特(tè)異性大(dà)大(dà)增(zēng)加,被擴增的靶基(jī)因(yīn)片段也就(jiù)能保持很高的正確(què)度。再通過(guò)選擇特異(yì)性和(hé)保(bǎo)守性高的靶(bǎ)基(jī)因區(qū),其特異性(xìng)程度(dù)就(jiù)更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量(liáng)是(shì)以指數(shù)方式(shì)增(zēng)加的,能將(jiāng)皮克(pg=10-12g)量(liáng)級的起(qǐ)始(shǐ)待測(cè)模板(bǎn)擴(kuò)增(zēng)到(dào)微(wēi)克(kè)(ug=10-6g)水平。能(néng)從(cóng)100萬個細(xì)胞中(zhōng)檢(jiǎn)出(chū)一個靶(bǎ)細(xì)胞;在(zài)病毒的檢(jiǎn)測中,PCR的(dí)靈敏度(dù)可(kě)達(dá)3個(gè)RFU(空(kōng)斑(bān)形成單(dān)位(wèi));在(zài)細菌學中(zhōng)zui小檢(jiǎn)出率為3個(gè)細菌。
(3) 簡便,快速
PCR反應用(yòng)耐(nài)高(gāo)溫(wēn)的(dí)Taq DNA聚合酶,一次(cì)性地(dì)將反應液(yè)加(jiā)好後(hòu),即在DNA擴(kuò)增液和(hé)水浴鍋上(shàng)進行變(biàn)性-退火(huǒ)-延(yán)伸反應,一般(bān)在(zài)2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴(kuò)增(zēng)產物一(yī)般用(yòng)電泳(yǒng)分析,不一定要(yào)用同位素,無(wú)放(fàng)射性(xìng)汙染(rǎn),易推廣。
(4) 對標本的純(chún)度(dù)要(yào)求(qiú)低
不(bù)需(xū)要分離病(bìng)毒(dú)或(huò)細(xì)菌及培養細胞,DNA 粗(cū)製(zhì)品及總(zǒng)RNA均可作為擴增模板(bǎn)。可(kě)直接用(yòng)臨(lín)床標(biāo)本如血液,體腔液,洗嗽液(yè),毛發,細胞,活PCR技(jì)術(shù)概論(lùn)。
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