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PCR檢(jiǎn)測試(shì)劑(jì)盒
商(shāng)品(pǐn)屬(shǔ)性
| 產品(pǐn)名稱 | 英文(wén)名稱 | 貨號(hào) |
|
肉孢子蟲通用PCR檢(jiǎn)測(cè)試劑盒 |
Sarcocystis spp.PCR |
YS-P014726 |
分(fēn)類(lèi)：PCR檢(jiǎn)測試(shì)劑(jì)盒(hé)
儲(chǔ)存條件(jiàn)：-20℃避光保存，避免反(fǎn)復凍融(róng)。
運輸(shū)：低(dī)溫(wēn)，避光(guāng)。
有(yǒu)效(xiào)期(qī)：一年
貨期：現貨PCR試劑(jì)盒的有(yǒu)效期一(yī)般(bān)為1年，這(zhè)是(shì)指(zhǐ)在適當的(dí)儲(chǔ)存(cún)溫(wēn)度(dù)下。核(hé)酸(suān)擴增(zēng)部分(fēn)的(dí)試(shì)劑(jì)一(yī)般要(yào)貯(zhù)存於(yú)-20℃下(xià)，產(chǎn)物(wù)檢測部(bù)分試劑則貯(zhù)存於(yú)2-8℃。盡(jìn)量避免反復(fù)凍融。
【結果分析條(tiáo)件設定】
u 閾值(Threshold)設定(dìng)：將閾(yù)值(zhí)綫設(shè)定在剛(gāng)好(hǎo)超過(guò)正(zhèng)常(cháng)陰(yīn)性質控(kòng)品(pǐn)擴增(zēng)曲綫(xiàn)的最高點。
【質(zhì)控標準】
2. 陽性(xìng)質控品的檢(jiǎn)測結(jié)果(guǒ)應為陽性(xìng)，有明(míng)顯(xiǎn)的指數擴(kuò)增期，Ct值應(yīng)小於等(děng)於35；
3. 以上要(yào)求(qiú)需在(zài)一次(cì)實驗中同(tóng)時(shí)滿足，否則該(gāi)次實驗視為(wéi)無效(xiào)。
【結果(guǒ)判斷】
2.可疑：有明(míng)顯(xiǎn)的指(zhǐ)數擴增(zēng)期(qī)，且38≤Ct<40，此(cǐ)時(shí)樣(yàng)本為可疑樣本；對於(yú)可(kě)疑(yí)樣本建議復核一次，若復核結(jié)果(guǒ)Ct<40且有(yǒu)指(zhǐ)數擴增期，則判定為陽性，否則判定為陰(yīn)性；
3. 陰性：無指數(shù)擴增(zēng)期，Ct=40或無Ct值(zhí)均判定為陰性(xìng)樣(yàng)本(běn)。
【對(duì)檢驗結果的解釋(shì)】
1. 實(shí)驗(yàn)室(shì)環境汙(wū)染(rǎn)，試劑汙染，樣品(pǐn)交(jiāo)叉汙(wū)染會(huì)出(chū)現假陽性結果(guǒ)；
2. 試(shì)劑運輸，保存不當或(huò)試(shì)劑(jì)配製(zhì)不準確引(yǐn)起的試劑(jì)檢測(cè)效(xiào)能下降，可能(néng)會導(dǎo)致出現假陰性(xìng)結(jié)果。
PCR反(fǎn)應的(dí)特(tè)異性(xìng)：
②鹼(jiǎn)基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合(hé)成反應的忠實性(xìng)；
④靶基(jī)因(yīn)的特(tè)異性(xìng)與保(bǎo)守性。
肉孢(bāo)子蟲通用(yòng)PCR檢測試(shì)劑盒(hé)其中引物與(yǔ)模(mó)板(bǎn)的正(zhèng)確結合是關鍵。引(yǐn)物與模(mó)板(bǎn)的結合及引物(wù)鏈的(dí)延伸(shēn)是遵循鹼(jiǎn)基(jī)配對原(yuán)則(zé)的。聚(jù)合(hé)酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚(jù)合(hé)酶耐高(gāo)溫性(xìng)，使反(fǎn)應中模板(bǎn)與引物的(dí)結合(hé)(復(fù)性(xìng))可(kě)以在較(jiào)高的溫度下進行(háng)，結(jié)合的特(tè)異(yì)性(xìng)大(dà)大(dà)增加(jiā)，被(bèi)擴增的靶(bǎ)基(jī)因(yīn)片段也(yě)就(jiù)能保(bǎo)持很(hěn)高的正確(què)度。再通(tōng)過選擇特異性(xìng)和保守性(xìng)高的靶基因(yīn)區，其(qí)特異性程度(dù)就更高(gāo)。
(2) 靈(líng)敏度高
PCR產(chǎn)物(wù)的(dí)生成(chéng)量是以指數方式增加的(dí)，能(néng)將(jiāng)皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始(shǐ)待(dài)測(cè)模板擴增到(dào)微(wēi)克(kè)(ug=10-6g)水平。能(néng)從(cóng)100萬個(gè)細(xì)胞(bāo)中檢出(chū)一(yī)個(gè)靶細(xì)胞；在(zài)病毒(dú)的檢測中，PCR的靈(líng)敏度(dù)可(kě)達3個RFU(空(kōng)斑(bān)形成單(dān)位)；在(zài)細菌(jūn)學中(zhōng)zui小(xiǎo)檢(jiǎn)出率為3個(gè)細菌。
(3) 簡便，快速(sù)
PCR反應用耐(nài)高(gāo)溫(wēn)的Taq DNA聚合酶，一(yī)次性地(dì)將反應(yīng)液(yè)加好(hǎo)後，即在(zài)DNA擴(kuò)增(zēng)液和水浴(yù)鍋上進(jìn)行變性-退(tuì)火(huǒ)-延伸反應(yīng)，一般(bān)在2～4 小(xiǎo)時完成(chéng)擴(kuò)增(zēng)反(fǎn)應。擴增產物一(yī)般用電(diàn)泳(yǒng)分析，不(bù)一定要用(yòng)同位(wèi)素，無放(fàng)射(shè)性汙染(rǎn)，易推(tuī)廣(guǎng)。
(4) 對(duì)標本(běn)的純度(dù)要求低(dī)
不需要(yào)分(fēn)離(lí)病(bìng)毒或(huò)細菌(jūn)及培(péi)養細胞(bāo)，DNA 粗(cū)製品及總(zǒng)RNA均可作為(wéi)擴(kuò)增模板。可直(zhí)接用臨床(chuáng)標本如(rú)血液，體(tǐ)腔液，洗(xǐ)嗽液(yè)，毛(máo)發，細(xì)胞，活(huó)PCR技(jì)術(shù)概(gài)論(lùn)。
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