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PCR檢測(cè)試劑盒(hé)
商品屬性(xìng)
| 產品(pǐn)名稱(chēng) | 規格 | 貨(huò)號(hào) |
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豬瘟(wēn)病(bìng)毒RT-PCR試劑盒 |
50T |
YS-P015355 |
儲(chǔ)存條(tiáo)件(jiàn)：-20℃避光保存，避免(miǎn)反(fǎn)復(fù)凍融(róng)。
運(yùn)輸：低(dī)溫，避光(guāng)。
有效(xiào)期：一(yī)年
貨(huò)期(qī)：現(xiàn)貨(huò)PCR試劑(jì)盒的有(yǒu)效期(qī)一般(bān)為1年，這(zhè)是(shì)指在適當的(dí)儲(chǔ)存溫(wēn)度下。核(hé)酸擴(kuò)增(zēng)部(bù)分的(dí)試(shì)劑一般要貯存(cún)於(yú)-20℃下，產物檢測部分試劑則貯存於2-8℃。盡(jìn)量(liáng)避(bì)免(miǎn)反(fǎn)復(fù)凍融。
【結(jié)果(guǒ)分(fēn)析(xī)條(tiáo)件(jiàn)設(shè)定(dìng)】
u 閾(yù)值(zhí)(Threshold)設定(dìng)：將(jiāng)閾(yù)值(zhí)綫(xiàn)設(shè)定在剛好超(chāo)過(guò)正常陰性質控品擴(kuò)增曲(qū)綫的最(zuì)高點。
【質(zhì)控(kòng)標準】
2. 陽性(xìng)質控(kòng)品的檢測(cè)結(jié)果應為陽性，有(yǒu)明顯(xiǎn)的(dí)指數(shù)擴(kuò)增期(qī)，Ct值應(yīng)小於等於35；
3. 以上(shàng)要(yào)求需(xū)在一次(cì)實驗中同時(shí)滿足(zú)，否則該次實驗視為無效(xiào)。
【結(jié)果判斷】
2.可疑(yí)：有(yǒu)明(míng)顯(xiǎn)的指(zhǐ)數擴(kuò)增期，且38≤Ct<40，此(cǐ)時樣(yàng)本(běn)為可(kě)疑樣(yàng)本；對於可(kě)疑樣本建(jiàn)議復核一(yī)次(cì)，若(ruò)復核(hé)結果Ct<40且(qiě)有(yǒu)指數(shù)擴增期，則判定(dìng)為(wéi)陽(yáng)性，否則判(pàn)定為陰(yīn)性(xìng)；
3. 陰(yīn)性(xìng)：無指數擴(kuò)增期(qī)，Ct=40或無Ct值均判定為陰(yīn)性樣本(běn)。
【對檢驗(yàn)結果(guǒ)的解釋(shì)】
1. 實(shí)驗室(shì)環境汙染(rǎn)，試劑(jì)汙(wū)染(rǎn)，樣(yàng)品交叉汙染(rǎn)會出(chū)現(xiàn)假陽(yáng)性結果；
2. 試劑運輸，保存(cún)不當(dāng)或試劑配(pèi)製(zhì)不準確引起的試劑(jì)檢測(cè)效能(néng)下(xià)降，可能(néng)會導(dǎo)致(zhì)出現(xiàn)假(jiǎ)陰(yīn)性結果(guǒ)。
PCR反應的特(tè)異性：
②鹼(jiǎn)基(jī)配對原則(zé)；
③Taq DNA聚合酶合成(chéng)反(fǎn)應的忠實性(xìng)；
④靶基(jī)因的(dí)特異(yì)性與保守(shǒu)性(xìng)。
豬瘟病毒(dú)RT-PCR試劑盒(hé)其中引物(wù)與模板(bǎn)的正確結(jié)合是關鍵(jiàn)。引物與模(mó)板的結(jié)合及引物(wù)鏈的延伸是遵(zūn)循鹼基配對(duì)原則的(dí)。聚合(hé)酶合(hé)成反應的(dí)忠(zhōng)實性(xìng)及(jí)Taq DNA聚合酶耐(nài)高(gāo)溫(wēn)性，使反應中模板與引(yǐn)物的結合(hé)(復(fù)性)可以在(zài)較(jiào)高(gāo)的(dí)溫(wēn)度下(xià)進(jìn)行，結合的特異性大大增加，被(bèi)擴增的靶(bǎ)基(jī)因片(piàn)段也(yě)就能保持很高(gāo)的正(zhèng)確度。再通過選擇(zé)特異(yì)性和保守性高(gāo)的靶(bǎ)基(jī)因區，其特(tè)異性程(chéng)度就更高。
(2) 靈敏(mǐn)度(dù)高(gāo)
PCR產物的(dí)生成量(liáng)是(shì)以指(zhǐ)數方式增加的，能將皮(pí)克(pg=10-12g)量級的起始待(dài)測模板擴增到微克(ug=10-6g)水(shuǐ)平。能從(cóng)100萬個(gè)細胞(bāo)中(zhōng)檢出(chū)一個靶(bǎ)細胞；在病毒的檢(jiǎn)測中，PCR的靈(líng)敏度(dù)可達(dá)3個RFU(空斑形(xíng)成單(dān)位(wèi))；在(zài)細菌(jūn)學中zui小檢出(chū)率為(wéi)3個(gè)細菌。
(3) 簡(jiǎn)便，快(kuài)速
PCR反應用(yòng)耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次(cì)性地(dì)將反(fǎn)應(yīng)液(yè)加好後(hòu)，即(jí)在DNA擴增(zēng)液(yè)和(hé)水(shuǐ)浴鍋(guō)上(shàng)進(jìn)行(háng)變(biàn)性(xìng)-退火(huǒ)-延(yán)伸反應，一般在2～4 小時完(wán)成(chéng)擴增(zēng)反應(yīng)。擴增(zēng)產(chǎn)物一般用(yòng)電(diàn)泳(yǒng)分析，不(bù)一定要用同(tóng)位素，無放射性汙染，易(yì)推(tuī)廣。
(4) 對標本的純(chún)度要求低
不需要分(fēn)離(lí)病毒(dú)或細(xì)菌(jūn)及(jí)培養(yǎng)細(xì)胞(bāo)，DNA 粗製品及總(zǒng)RNA均可作(zuò)為(wéi)擴(kuò)增模(mó)板。可直接(jiē)用臨(lín)床(chuáng)標本如(rú)血(xiě)液(yè)，體腔(qiāng)液(yè)，洗(xǐ)嗽液，毛(máo)發，細(xì)胞，活PCR技(jì)術概論。
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