大鼠(shǔ)骨(gǔ)髓樹突狀細胞(成熟DC細胞(bāo))

大鼠骨(gǔ)髓樹(shù)突(tū)狀細胞分離自骨(gǔ)髓；骨(gǔ)髓(suǐ)是機體的(dí)造血組(zǔ)織，位(wèi)於身(shēn)體的(dí)許多骨骼內(nèi)
。成(chéng)年動(dòng)物(wù)的(dí)骨(gǔ)髓(suǐ)分(fēn)兩種紅(hóng)骨(gǔ)髓和黃骨髓
。紅(hóng)骨(gǔ)髓(suǐ)能製造紅(hóng)細胞，血小板(bǎn)和各種白細胞
。血(xiě)小板(bǎn)有止(zhǐ)血作(zuò)用，白細(xì)胞(bāo)能(néng)殺滅(miè)與(yǔ)抑製各種病(bìng)原體，包(bāo)括(kuò)細(xì)菌，病毒等；某些(xiē)淋巴(bā)細胞能(néng)製造抗(kàng)體(tǐ)
。因(yīn)此，骨髓不(bù)但(dàn)是造血器官(guān)，它還(huán)是重(zhòng)要的免疫器官(guān)
。骨(gǔ)髓(suǐ)是存在(zài)於長(cháng)骨(gǔ)（如肱骨，股(gǔ)骨）的(dí)骨髓(suǐ)腔和(hé)扁平骨(gǔ)（如髂骨）的(dí)稀鬆骨質間(jiān)的網(wǎng)眼中(zhōng)，是一種(zhǒng)海(hǎi)綿狀的組織，能產(chǎn)生血細胞(bāo)的骨髓略呈(chéng)紅色，稱為(wéi)紅骨髓
。出生時，紅骨髓充(chōng)滿全身骨(gǔ)髓(suǐ)腔，隨著年齡增(zēng)大，脂肪(fáng)細(xì)胞增(zēng)多，相(xiāng)當(dāng)部分紅骨(gǔ)髓(suǐ)被(bèi)黃骨(gǔ)髓(suǐ)取代，最後幾(jī)乎(hū)隻(zhī)有(yǒu)扁平骨(gǔ)骨髓(suǐ)腔(qiāng)中(zhōng)有紅(hóng)骨髓
。骨(gǔ)髓DC細(xì)胞(bāo)是(shì)由骨髓單核(hé)細胞誘導(dǎo)而成的(dí)；樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和(hé)未(wèi)成熟(shú)樹(shù)突(tū)狀細胞，典(diǎn)型的(dí)未(wèi)成熟(shú)樹突(tū)狀(zhuàng)細胞呈半(bàn)貼(tiē)壁(bì)生長，在GM-CSF，IL4的(dí)作用下形成葡(pú)萄串(chuàn)樣集落(là)，細胞大而形(xíng)態不規則，表麵(miàn)皺(zhòu)褶(zhě)多，亦(yì)可(kě)見(jiàn)少量短刺(cì)狀突(tū)，胞內(nèi)細胞(bāo)器(qì)豐(fēng)富(fù)並(bìng)可(kě)見吞(tūn)噬泡(pào)，具(jù)有(yǒu)較強的遷移能(néng)力(lì)，伴隨(suí)有部(bù)分(fēn)未完(wán)全誘導成的(dí)單(dān)核(hé)細胞，貼壁(bì)形(xíng)態(tài)多(duō)樣
。而成(chéng)熟(shú)的樹突狀細胞(bāo)由未成熟DC進(jìn)一步(bù)經TNFα，LPS等(děng)誘(yòu)導而成，多數呈(chéng)懸浮生長， 細(xì)胞(bāo)呈圓形，細胞(bāo)體積進一(yī)步增(zēng)大(dà)，表(biǎo)麵(miàn)大(dà)量粗細不等的樹枝樣(yàng)突(tū)起（高倍鏡(jìng)或者(zhě)電(diàn)鏡下可觀察到(dào)），伴隨(suí)少量貼壁未成(chéng)熟(shú)細胞或者(zhě)單(dān)核(hé)細胞
。未成(chéng)熟DC細胞(bāo)長時(shí)間培養(yǎng)也(yě)可(kě)能(néng)導(dǎo)致自發分化(huà)成熟(shú)
。DC細(xì)胞(bāo)尚無特(tè)異性細胞(bāo)表麵分(fēn)子標(biāo)誌，主要通過形態(tài)學(xué)，組合(hé)性細(xì)胞(bāo)表麵(miàn)標(biāo)誌(zhì)，在混(hùn)合淋巴(bā)細胞(bāo)反應(yīng)中能激(jī)活初(chū)始T細(xì)胞等(děng)特(tè)征進(jìn)行鑒定(dìng)
。其中(zhōng)成熟樹突狀細(xì)胞(bāo)表(biǎo)麵(miàn)高表達主(zhǔ)要組織(zhī)相容性復合(hé)物（MHC）以及CD80，CD86等共(gòng)刺激分子(zǐ)，進而激活T淋(lín)巴細(xì)胞，誘(yòu)導(dǎo)免疫(yì)應答，處(chǔ)於(yú)啟動，調控，並維持免疫應答(dá)的中心(xīn)環節；未成熟樹突狀細(xì)胞具有(yǒu)很(hěn)強的抗原攝(shè)取加(jiā)工能力，但由於缺(quē)乏多種共(gòng)刺激(jī)分子(zǐ)不(bù)能(néng)使初始T細(xì)胞活化，增殖產(chǎn)生免(miǎn)疫應(yīng)答，不能(néng)激活(huó)T細(xì)胞的第二信(xìn)號(hào)，可導(dǎo)致T細(xì)胞(bāo)無能(néng)，從而誘導免疫(yì)低(dī)反應(yīng)或(huò)抗原免疫特(tè)異性耐受
。樹突狀細胞（DC細(xì)胞），imDC/mDC共同(tóng)基礎鑒定指(zhǐ)標為CD11c，陽性率>80%，其中未(wèi)成熟樹(shù)突(tū)狀(zhuàng)細(xì)胞（imDC細胞）表(biǎo)麵CD80，CD86，MHC-Ⅱ類分子等共(gòng)刺激(jī)分(fēn)子(zǐ)表(biǎo)達較(jiào)低，陽性(xìng)率(shuài)<30%以(yǐ)下(xià)
。成熟樹(shù)突狀(zhuàng)細(xì)胞（mDC細(xì)胞(bāo)）表(biǎo)麵CD80，CD86，MHC-Ⅱ類分子等共(gòng)刺激分子(zǐ)表(biǎo)達(dá)較高，陽(yáng)性率>80%
。依據(jù)成熟度會有(yǒu)波(bō)動變(biàn)化(huà)
。

自(zì)備試(shì)劑： 0.25%胰蛋白(bái)酶  ，PBS  ，完全培(péi)養(yǎng)基(jī)

培(péi)養(yǎng)基： 大鼠骨(gǔ)髓樹突狀細(xì)胞(成熟DC細胞)完(wán)全(quán)培養基(含(hán)FBS，生(shēng)長添加(jiā)劑，Penicillin，Streptomycin等(děng))

換液頻率： 每(měi)2-3天換(huàn)液(yè)一次

生(shēng)長(cháng)特性： 半(bàn)貼壁半(bàn)懸浮

細(xì)胞(bāo)形態(tài)： 圓形，樹突(tū)狀(zhuàng)

傳(chuán)代比例(lì)： 不(bù)傳(chuán)代

傳代特性(xìng)： 屬(shǔ)於高度分(fēn)化細胞(bāo)；屬於(yú)不(bù)增(zēng)殖細胞群

消(xiāo)化液： 0.25%胰蛋白(bái)酶

大鼠(shǔ)骨(gǔ)髓樹突(tū)狀細胞(bāo)(成(chéng)熟DC細胞)體外(wài)培養周期有限；建議(yì)使(shǐ)用(yòng)配(pèi)套(tào)的(dí)專(zhuān)用生(shēng)長培養基(jī)及正確的操(cāo)作方(fāng)法來培養，以(yǐ)此(cǐ)保(bǎo)證(zhèng)該細胞(bāo)的最佳培養狀態
。

方法簡(jiǎn)介 實驗(yàn)室分離的(dí)大鼠骨(gǔ)髓(suǐ)成(chéng)熟DC細(xì)胞(bāo)采用密度(dù)梯(tī)度(dù)離(lí)心(xīn)法(fǎ)分(fēn)離(lí)骨髓單(dān)個(gè)核細胞，培(péi)養過(guò)程(chéng)添加(jiā)細胞(bāo)因子(zǐ)誘(yòu)導(dǎo)而(ér)來(lái)，細胞總量約為5×10⁵ cells/瓶
。

質(zhì)量檢(jiǎn)測 實驗室(shì)分離(lí)的(dí)大鼠骨(gǔ)髓(suǐ)樹突狀細胞（成熟(shú)DC細胞）經CD86免疫熒光(guāng)鑒定(dìng)，細(xì)胞形態(tài)等(děng)綜(zōng)合鑒定，純度可達80%以上(shàng)，且(qiě)不含有HIV-1，HBV，HCV，支(zhī)原(yuán)體(tǐ)，細(xì)菌(jūn)，酵母(mǔ)和真菌(jūn)等
。