大鼠骨髓樹突(tū)狀(zhuàng)細胞(未(wèi)成(chéng)熟(shú)DC細(xì)胞)

大鼠(shǔ)骨髓樹突狀(zhuàng)細胞(bāo)分(fēn)離自(zì)骨髓；骨(gǔ)髓(suǐ)是機(jī)體(tǐ)的(dí)造(zào)血組(zǔ)織，位於身體的(dí)許(xǔ)多骨骼內(nèi)
。成年(nián)動(dòng)物(wù)的骨髓分兩種紅(hóng)骨髓和(hé)黃骨髓(suǐ)
。紅骨髓能(néng)製(zhì)造紅細(xì)胞，血小板(bǎn)和(hé)各(gè)種白細(xì)胞(bāo)
。血小(xiǎo)板(bǎn)有止血作用，白細胞能殺(shā)滅與(yǔ)抑(yì)製各(gè)種病(bìng)原(yuán)體(tǐ)，包括(kuò)細菌，病毒等；某些淋巴(bā)細(xì)胞能(néng)製(zhì)造抗(kàng)體
。因此，骨髓不但是造血器官，它(tā)還是重要(yào)的免(miǎn)疫器(qì)官
。骨(gǔ)髓是存在於(yú)長(cháng)骨（如肱骨，股(gǔ)骨）的骨髓腔和扁平骨(gǔ)（如(rú)髂(qià)骨(gǔ)）的稀(xī)鬆(sōng)骨質間的(dí)網眼中(zhōng)，是(shì)一種(zhǒng)海(hǎi)綿狀(zhuàng)的(dí)組(zǔ)織(zhī)，能產(chǎn)生(shēng)血細胞的骨(gǔ)髓略呈(chéng)紅色(sè)，稱為紅骨髓
。出生時(shí)，紅(hóng)骨髓充滿(mǎn)全身骨(gǔ)髓(suǐ)腔，隨著(zhuó)年齡(líng)增(zēng)大(dà)，脂肪細(xì)胞增(zēng)多，相(xiāng)當(dāng)部(bù)分(fēn)紅骨(gǔ)髓被(bèi)黃(huáng)骨髓取代，最後(hòu)幾(jī)乎(hū)隻(zhī)有(yǒu)扁平(píng)骨骨(gǔ)髓腔(qiāng)中(zhōng)有(yǒu)紅(hóng)骨(gǔ)髓
。骨髓DC細胞是由(yóu)骨(gǔ)髓單核細(xì)胞(bāo)誘(yòu)導(dǎo)而成的；樹(shù)突狀細(xì)胞分為成熟(shú)樹突狀(zhuàng)細胞和未成(chéng)熟(shú)樹(shù)突狀細(xì)胞(bāo)，典型的(dí)未(wèi)成熟(shú)樹(shù)突狀細胞(bāo)呈半(bàn)貼壁(bì)生長，在GM-CSF，IL4的作(zuò)用(yòng)下形成(chéng)葡萄串樣集(jí)落，細(xì)胞大而(ér)形(xíng)態不(bù)規(guī)則(zé)，表麵皺褶(zhě)多，亦可(kě)見(jiàn)少量短(duǎn)刺(cì)狀(zhuàng)突(tū)，胞內細胞(bāo)器(qì)豐富並(bìng)可(kě)見(jiàn)吞(tūn)噬(shì)泡(pào)，具有較強的(dí)遷移能力，伴(bàn)隨(suí)有部分未完(wán)全誘(yòu)導成的單(dān)核細(xì)胞(bāo)，貼(tiē)壁形態多樣(yàng)
。而成(chéng)熟的樹(shù)突(tū)狀細胞由(yóu)未成熟(shú)DC進一(yī)步經(jīng)TNFα，LPS等誘(yòu)導(dǎo)而成，多數(shù)呈(chéng)懸(xuán)浮生(shēng)長， 細(xì)胞呈(chéng)圓形(xíng)，細胞體(tǐ)積(jī)進一(yī)步增大(dà)，表(biǎo)麵大量(liáng)粗細不(bù)等的樹枝(zhī)樣(yàng)突(tū)起(qǐ)（高(gāo)倍(bèi)鏡或者(zhě)電(diàn)鏡(jìng)下(xià)可觀(guān)察到(dào)），伴(bàn)隨(suí)少量(liáng)貼(tiē)壁未(wèi)成(chéng)熟(shú)細(xì)胞(bāo)或(huò)者單核細胞(bāo)
。未(wèi)成(chéng)熟DC細胞長時間(jiān)培養也(yě)可能導致自(zì)發分化成熟
。DC細(xì)胞尚無(wú)特異性細胞表麵(miàn)分子標誌(zhì)，主要通(tōng)過形態(tài)學(xué)，組合性細胞(bāo)表(biǎo)麵標誌，在混合淋巴細胞(bāo)反應中能激活初(chū)始(shǐ)T細胞(bāo)等特(tè)征(zhēng)進行鑒定
。其中(zhōng)成熟樹(shù)突(tū)狀細胞表(biǎo)麵(miàn)高表達主要組(zǔ)織相容(róng)性(xìng)復合物(wù)（MHC）以及CD80，CD86等(děng)共刺激(jī)分(fēn)子(zǐ)，進(jìn)而激活T淋(lín)巴細胞(bāo)，誘(yòu)導免疫(yì)應答，處於(yú)啟動，調控，並維持免疫(yì)應答(dá)的中心環節(jié)；未(wèi)成熟(shú)樹(shù)突(tū)狀細(xì)胞具有很強的(dí)抗原(yuán)攝取(qǔ)加(jiā)工(gōng)能力，但(dàn)由於缺(quē)乏(fá)多(duō)種共刺(cì)激分子(zǐ)不(bù)能(néng)使初(chū)始T細(xì)胞活化，增殖產(chǎn)生免疫(yì)應(yīng)答(dá)，不(bù)能激(jī)活(huó)T細胞(bāo)的第(dì)二信號，可導(dǎo)致T細胞無能，從而誘導免(miǎn)疫低反應或抗原(yuán)免疫特(tè)異性耐受
。樹(shù)突(tū)狀細胞(bāo)（DC細(xì)胞），imDC/mDC共(gòng)同(tóng)基礎鑒定指(zhǐ)標為CD11c，陽(yáng)性率>80%，其(qí)中未成熟(shú)樹(shù)突狀細胞(bāo)（imDC細胞）表(biǎo)麵CD80，CD86，MHC-Ⅱ類分(fēn)子等(děng)共(gòng)刺(cì)激分(fēn)子(zǐ)表達(dá)較(jiào)低，陽(yáng)性(xìng)率(shuài)<30%以下(xià)
。成熟(shú)樹突(tū)狀(zhuàng)細胞（mDC細胞）表(biǎo)麵(miàn)CD80，CD86，MHC-Ⅱ類(lèi)分子等共刺(cì)激分(fēn)子表達較高(gāo)，陽性率>80%
。依據成(chéng)熟度會有波動變化
。

自備(bèi)試(shì)劑(jì)： 0.25%胰蛋(dàn)白(bái)酶  ，PBS  ，完全(quán)培養基(jī)

培(péi)養基： 大鼠(shǔ)骨(gǔ)髓(suǐ)樹突狀細(xì)胞(bāo)(未(wèi)成熟(shú)DC細(xì)胞(bāo))完全(quán)培養基(含FBS，生(shēng)長添(tiān)加劑，Penicillin，Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天(tiān)換液(yè)一(yī)次(cì)

生長特性： 半貼壁半懸(xuán)浮

細胞(bāo)形(xíng)態： 圓(yuán)形，梭(suō)形(xíng)，多角形(xíng)，形態(tài)多樣(yàng)

傳代比例(lì)： 不(bù)傳代(dài)

傳(chuán)代(dài)特性： 屬(shǔ)於(yú)高度(dù)分(fēn)化細胞；屬(shǔ)於不增(zēng)殖細胞(bāo)群

消化液： 0.25%胰(yí)蛋白酶(méi)

大鼠(shǔ)骨髓(suǐ)樹突狀細(xì)胞(未成(chéng)熟DC細(xì)胞)體(tǐ)外(wài)培(péi)養(yǎng)周(zhōu)期(qī)有(yǒu)限(xiàn)；建議(yì)使(shǐ)用配(pèi)套(tào)的專用生長培(péi)養(yǎng)基(jī)及正(zhèng)確的(dí)操作(zuò)方(fāng)法(fǎ)來(lái)培養(yǎng)，以此保證(zhèng)該細(xì)胞的(dí)最佳(jiā)培(péi)養(yǎng)狀態
。

方法簡(jiǎn)介 實驗(yàn)室分(fēn)離(lí)的(dí)大鼠骨髓未成熟DC細胞采用密度(dù)梯(tī)度離(lí)心法(fǎ)分離(lí)骨髓(suǐ)單個核(hé)細胞(bāo)，培(péi)養過程(chéng)添加細(xì)胞(bāo)因子誘導而來(lái)，細(xì)胞(bāo)總(zǒng)量約為(wéi)5×10⁵ cells/瓶
。

質量檢(jiǎn)測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的大(dà)鼠骨(gǔ)髓樹突狀細胞(bāo)（未成(chéng)熟(shú)DC細(xì)胞）經CD11c免(miǎn)疫熒光鑒定(dìng)，細胞形態(tài)等(děng)綜合鑒定，純(chún)度(dù)可(kě)達80%以(yǐ)上(shàng)，且不(bù)含有HIV-1，HBV，HCV，支原(yuán)體(tǐ)，細(xì)菌，酵(jiào)母和(hé)真菌(jūn)等(děng)
。