大鼠關節(jié)囊(náng)成(chéng)纖維(wéi)細(xì)胞

大鼠關(guān)節囊(náng)成纖(xiān)維細(xì)胞(bāo)分(fēn)離(lí)自關節囊組織；關節囊（articular capsule）是由(yóu)結締組織(zhī)構成的膜(mó)囊(náng)，附著於(yú)關節的周(zhōu)圍(wéi)，密(mì)封(fēng)關(guān)節(jié)腔。關節(jié)囊(náng)的(dí)壁共有兩層外層為(wéi)纖(xiān)維層；內(nèi)層(céng)為滑膜(mó)層。纖(xiān)維層實(shí)際(jì)上是(shì)一個連結骨的骨(gǔ)膜(mó)向另一(yī)骨骨(gǔ)膜的移(yí)行。纖維(wéi)層厚而堅韌，由(yóu)致密結(jié)締組織構成，含(hán)有豐富的(dí)血(xiě)管和神經(jīng)。其淺層(céng)纖(xiān)維(wéi)多呈(chéng)縱行排(pái)列(liè)；深層(céng)纖維主要為環行(háng)纖維。纖維層(céng)的厚薄(báo)，各(gè)個關節不完(wán)全(quán)相同(tóng)，即是在同一關(guān)節(jié)中，各部也(yě)不(bù)一致(zhì)一(yī)般在運動(dòng)範(fàn)圍(wéi)小的或(huò)是負(fù)重較大(dà)的關節中，都(dū)較厚(hòu)而緊(jǐn)張(zhāng)，相(xiāng)反，於運動(dòng)靈(líng)活(huó)的(dí)關(guān)節，則(zé)較(jiào)薄(báo)而鬆(sōng)弛(chí)。有的關節囊(náng)的(dí)部分纖維(wéi)囊缺如，僅(jǐn)一層滑膜(mó)層；有(yǒu)的部分(fēn)明顯(xiǎn)增(zēng)厚(hòu)，形成(chéng)韌帶(dài)。滑膜層薄(báo)而(ér)柔潤(rùn)，是由疏鬆結(jié)締組織構(gòu)成，襯(chèn)在纖維層內麵，周(zhōu)緣(yuán)附(fù)著(zhuó)在(zài)關節軟骨(gǔ)的邊(biān)緣。它朝(zhāo)向關節腔的內(nèi)麵光而發(fā)亮，此(cǐ)麵上(shàng)蓋(gài)有一層內(nèi)皮(pí)細胞。滑(huá)膜(mó)向關節(jié)腔(qiāng)分(fēn)泌(mì)滑(huá)液(yè)，滑(huá)液是稍粘稠而(ér)透(tòu)明的液(yè)體，可減少關(guān)節(jié)中(zhōng)相連骨的摩擦(cā)，是(shì)一種(zhǒng)滑潤劑。滑(huá)膜表麵可(kě)形(xíng)成絨毛(máo)或(huò)皺(zhòu)襞(bì)突(tū)入關節腔內。有時滑膜層可以(yǐ)穿(chuān)過纖(xiān)維(wéi)層呈(chéng)囊狀向外膨出(chū)，形(xíng)成(chéng)滑(huá)膜囊(náng)，常位於肌(jī)腱與骨(gǔ)麵之(zhī)間(jiān)。有時(shí)滑膜(mó)層突出不明(míng)顯，僅(jǐn)呈(chéng)深(shēn)窩狀，稱為(wéi)囊(náng)狀隱窩。成(chéng)纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏鬆結締(dì)組織的(dí)主要細(xì)胞成分，由(yóu)胚(pēi)胎時期(qī)的(dí)間(jiān)充質細胞(bāo)分(fēn)化而來；成(chéng)纖(xiān)維細(xì)胞較大(dà)，輪(lún)廓(kuò)清楚(chǔ)，多(duō)為(wéi)突起的(dí)紡錘(chuí)形或(huò)星形的扁平狀結構，其細(xì)胞(bāo)核(hé)呈(chéng)規(guī)則(zé)的(dí)卵圓(yuán)形(xíng)，核仁大(dà)而(ér)明顯。成纖維(wéi)細胞(bāo)功能(néng)活(huó)動旺盛(shèng)，細(xì)胞(bāo)質嗜弱鹼(jiǎn)性，具(jù)明(míng)顯的蛋白(bái)質(zhì)合成和(hé)分泌(mì)活動，在一定條件下，它可(kě)以(yǐ)實(shí)現跟纖維細(xì)胞的互(hù)相(xiāng)轉化；成纖維(wéi)細胞對不(bù)同程度(dù)的細(xì)胞(bāo)變(biàn)性(xìng)，壞(huài)死和組織缺損(sǔn)的修復有著十分(fēn)重要的作用。剛分(fēn)離的成纖維(wéi)細胞呈(chéng)圓形(xíng)，折(zhē)光性良(liáng)好(hǎo)，懸浮(fú)於培養(yǎng)基(jī)中。30 min細(xì)胞(bāo)貼(tiē)壁，其中(zhōng)部(bù)分(fēn)開始(shǐ)伸(shēn)出(chū)偽足，表(biǎo)現為小的(dí)突起；6 h後細胞(bāo)基(jī)本貼(tiē)壁完全(quán)，伸展成梭(suō)形，胞核(hé)清晰(xī)，分布較均(jūn)匀(yún)，散(sàn)在生(shēng)長(cháng)，不(bù)聚集(jí)成團；細(xì)胞(bāo)生長(cháng)迅速，5-7天即(jí)呈(chéng)融合(hé)狀態(tài)，細(xì)胞排列(liè)緊密(mì)，有的交叉(chā)重疊生長，平坦，胞(bāo)體(tǐ)較(jiào)大(dà)，細胞(bāo)質透(tòu)明(míng)，細(xì)胞(bāo)核較大(dà)，呈(chéng)橢(tuǒ)圓形，顏(yán)色淡。細(xì)胞融合(hé)，並(bìng)彼(bǐ)此(cǐ)連接(jiē)成網狀；細胞呈(chéng)突起(qǐ)的(dí)紡(fǎng)錘形(xíng)或星形的扁(biǎn)平(píng)分布(bù)。

自(zì)備試(shì)劑(jì)： 0.25%胰蛋白酶  ，PBS  ，完全(quán)培養基

培養基： 大(dà)鼠關節囊成(chéng)纖維細胞完全培(péi)養基(jī)(基(jī)礎培養(yǎng)基，含FBS，bFGF，Insulin，Penicillin，Streptomycin等)

換液頻(pín)率： 每2-3天(tiān)換(huàn)液(yè)一次(cì)

生長(cháng)特性(xìng)： 貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)： 成纖(xiān)維細(xì)胞樣(yàng)

傳(chuán)代(dài)比(bǐ)例： 1:2

傳代特性： 可(kě)傳(chuán)3代左右

消(xiāo)化液(yè)： 0.25%胰蛋白酶(méi)

大鼠關(guān)節囊(náng)成纖維細(xì)胞體(tǐ)外培(péi)養周期(qī)有(yǒu)限(xiàn)；建(jiàn)議使用配(pèi)套的(dí)專用生(shēng)長培養(yǎng)基及(jí)正確的操作方法來培(péi)養，以此保證(zhèng)該(gāi)細胞(bāo)的最(zuì)佳培養狀態。

方法(fǎ)簡介 實(shí)驗(yàn)室(shì)分(fēn)離的大鼠(shǔ)關節(jié)囊成(chéng)纖維(wéi)細胞(bāo)采(cǎi)用(yòng)混合(hé)酶消化(huà)結合差(chà)速貼壁法(fǎ)製備而(ér)來(lái)，細(xì)胞總量(liáng)約(yuē)為(wéi)5×10⁵ cells/瓶(píng)。

質(zhì)量(liáng)檢測 實(shí)驗室分(fēn)離(lí)的(dí)大(dà)鼠(shǔ)關(guān)節囊成纖維(wéi)細胞經(jīng)Vimentin免(miǎn)疫熒(yíng)光(guāng)鑒定(dìng)，純(chún)度可達(dá)90%以上，且(qiě)不(bù)含(hán)有(yǒu)HIV-1，HBV，HCV，支原(yuán)體(tǐ)，細菌，酵母和真菌(jūn)等(děng)。