大(dà)鼠海(hǎi)綿體內皮細胞(bāo)

大鼠(shǔ)海(hǎi)綿體(tǐ)內皮細胞分(fēn)離自(zì)海(hǎi)綿體組織；陰(yīn)莖(jīng)海(hǎi)綿體(tǐ)是由海(hǎi)綿狀(zhuàng)的(dí)小梁(liáng)和腔隙構(gòu)成(chéng)的(dí)血竇結(jié)構，它主要包括(kuò)海(hǎi)綿體內(nèi)皮細胞(bāo)，平(píng)滑(huá)肌(jī)細(xì)胞和成纖(xiān)維細(xì)胞3種細胞(bāo)成分(fēn)。其(qí)中(zhōng)平(píng)滑肌細胞(bāo)和成纖(xiān)維(wéi)細(xì)胞鑲嵌於(yú)海(hǎi)綿(mián)體(tǐ)細(xì)胞(bāo)外(wài)基(jī)質(zhì)的(dí)膠(jiāo)原(yuán)中，而海綿(mián)體內(nèi)皮細(xì)胞則覆(fù)蓋於海綿體血竇的腔麵(miàn)，僅占海綿體(tǐ)組織的(dí)2.8%。在消化海綿(mián)體組織(zhī)時，膠(jiāo)原(yuán)酶(méi)的作用(yòng)主要是(shì)鬆解(jiě)海(hǎi)綿(mián)體(tǐ)內皮細胞與(yǔ)基膜的聯係(xì)，破(pò)壞海(hǎi)綿體(tǐ)內皮(pí)細胞間(jiān)的緊(jǐn)密(mì)連接。如果消(xiāo)化時間延(yán)長(cháng)或(huò)膠(jiāo)原酶(méi)濃度(dù)過(guò)大，平滑(huá)肌(jī)細(xì)胞和成纖(xiān)維細(xì)胞也將被消化下(xià)來(lái)，從而影(yǐng)響(xiǎng)海綿(mián)體內皮細(xì)胞(bāo)的(dí)純度。因此，比較篩選合適的膠原酶濃度和(hé)消化(huà)時間是成功分(fēn)離(lí)海(hǎi)綿體內皮(pí)細胞的關鍵。

自備試劑(jì)： 0.25%胰(yí)蛋白酶(méi)  ，多(duō)聚-L-賴氨(ān)酸溶(róng)液（1×）或(huò)多(duō)聚-L-賴氨(ān)酸(suān)溶液（10×）或明膠包被液(yè)（1 mg/mL）  ，PBS  ，完全(quán)培(péi)養基(jī)

包被(bèi)條件(jiàn)： PLL（0.1 mg/mL）或(huò)明膠(jiāo)（0.1%）

培(péi)養基： 大鼠(shǔ)海綿體內皮(pí)細胞(bāo)完全培(péi)養基(含(hán)FBS，生長(cháng)添加劑，Penicillin，Streptomycin等(děng))

換(huàn)液頻率： 每2-3天(tiān)換液(yè)一次(cì)

生長特(tè)性(xìng)： 貼壁(bì)

細胞形態： 內皮(pí)細胞(bāo)樣(yàng)

傳代比(bǐ)例： 1:2

傳(chuán)代(dài)特性： 可(kě)傳2-3代(dài)

消(xiāo)化(huà)液： 0.25%胰蛋白酶(méi)

大鼠(shǔ)海綿(mián)體(tǐ)內皮細(xì)胞體(tǐ)外培(péi)養周期有限；建(jiàn)議(yì)使(shǐ)用配套的(dí)專(zhuān)用生(shēng)長(cháng)培養(yǎng)基(jī)及(jí)正確的操作(zuò)方法來培養(yǎng)，以此(cǐ)保(bǎo)證(zhèng)該細(xì)胞(bāo)的(dí)最佳培(péi)養(yǎng)狀(zhuàng)態。

方法簡(jiǎn)介 實驗室分離的大(dà)鼠海(hǎi)綿(mián)體內(nèi)皮(pí)細胞(bāo)采用混合酶(méi)消(xiāo)化法結合(hé)機(jī)械分離法(fǎ)，並(bìng)用內皮細(xì)胞(bāo)專(zhuān)用(yòng)培養基培養篩選製備(bèi)而來，細(xì)胞總(zǒng)量約(yuē)為5×10⁵ cells/瓶(píng)。

質量(liáng)檢測 實(shí)驗室分(fēn)離的大(dà)鼠海(hǎi)綿體內(nèi)皮(pí)細胞(bāo)經(jīng)CD31免(miǎn)疫熒(yíng)光鑒定，純(chún)度可達90%以(yǐ)上，且不含有HIV-1，HBV，HCV，支原體(tǐ)，細(xì)菌，酵(jiào)母和(hé)真菌等(děng)。