技(jì)術(shù)文(wén)獻
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在小鼠(shǔ)BrdU ELISA實驗(yàn)中(zhōng)，正(zhèng)確設置陽(yáng)性對照，陰(yīn)性對照和(hé)溶劑對(duì)照(zhào)是(shì)確保實驗係統可(kě)靠(kào)，結果(guǒ)可信的核心環(huán)節。這(zhè)些對照(zhào)共同構(gòu)成實(shí)驗有效(xiào)性評價體係(xì)，能夠驗(yàn)證試(shì)劑活性(xìng)，操(cāo)作規(guī)範性(xìng)，並(bìng)排除非(fēi)特(tè)異性信號幹擾(rǎo)。
一，陽(yáng)性對照（Positive Control）
作用：驗證(zhèng)整個檢測(cè)體係是(shì)否(fǒu)正(zhèng)常(cháng)工作(zuò)，確認(rèn)抗體識(shí)別能(néng)力，酶(méi)標反應(yīng)及顯(xiǎn)色(sè)係統(tǒng)有效。
推(tuī)薦設置：
常用物質：25% 己基(jī)肉桂醛（Hexyl Cinnamal） 或 25% 丁子香酚（Eugenol），溶(róng)劑為(wéi)丙(bǐng)酮(tóng):橄欖油(yóu) = 4:1（AOO）。
使(shǐ)用方(fāng)式：選用已知可(kě)誘導淋巴(bā)細(xì)胞增殖的(dí)致敏物(wù)，連(lián)續3天塗抹小鼠(shǔ)雙耳(ěr)，第6天腹(fù)腔注射BrdU，通過BrdU-ELISA檢測(cè)淋巴(bā)結(jié)增殖(zhí)情況。
有(yǒu)效性(xìng)判斷標準：
刺激指數（SI）≥ 1.6；
且呈(chéng)現劑(jì)量(liáng)-反應趨勢(shì)；
若未達(dá)此(cǐ)標(biāo)準(zhǔn)，表(biǎo)明實驗係統失效，需(xū)重(zhòng)做。
提示：每(měi)次(cì)實驗均(jūn)需設(shè)置陽(yáng)性(xìng)對照(zhào)組，以確(què)保模型(xíng)響(xiǎng)應穩(wěn)定(dìng)。
二(èr)，陰性(xìng)對照（Negative Control）
作(zuò)用：提(tí)供(gōng)背景(jǐng)OD值(zhí)基(jī)準(zhǔn)，用於計算(suàn)P/N值（陽(yáng)性(xìng)/陰(yīn)性(xìng)OD比值），幫(bāng)助判(pàn)定樣本是否為(wéi)陽性(xìng)，同時(shí)評估(gū)非(fēi)特異(yì)性結(jié)合(hé)。
設置(zhì)要(yào)點：
樣(yàng)本選(xuǎn)擇：應(yīng)使用(yòng)已知不(bù)含(hán)BrdU的(dí)目標物樣本，且(qiě)基質與待(dài)測樣(yàng)本一(yī)致(zhì)：
檢測血清時，使用健(jiàn)康小鼠的正(zhèng)常血清；
檢測(cè)免(miǎn)疫(yì)後(hòu)抗(kàng)體(tǐ)時(shí)，使(shǐ)用(yòng)同一動物免疫(yì)前的血清(qīng)。
孔數(shù)要求(qiú)：建議至(zhì)少設置兩個復(fù)孔(kǒng)，取(qǔ)平(píng)均值以提高(gāo)數據穩定(dìng)性(xìng)。
判讀標準(zhǔn)：P/N值(zhí) ≥ 2.1 可(kě)作為陽(yáng)性(xìng)判斷(duàn)參考之(zhī)一。
注意(yì)：避免使(shǐ)用動物(wù)源性(xìng)血(xiě)清(qīng)（如牛(niú)血(xiě)清白(bái)蛋(dàn)白）作為陰(yīn)性(xìng)對(duì)照，因其(qí)可(kě)能(néng)引入(rù)交叉(chā)反(fǎn)應。
三(sān)，溶(róng)劑(jì)對照（Vehicle Control / Solvent Control）
作用(yòng)：排(pái)除(chú)溶劑(jì)本(běn)身對皮膚或免疫係(xì)統的(dí)潛(qián)在(zài)刺激(jī)性，作(zuò)為實驗組的直(zhí)接參照。
設置(zhì)方法：
使(shǐ)用與受試物相同的溶劑(jì)，常(cháng)見為 丙(bǐng)酮:橄欖(lǎn)油（4:1, v/v），即AOO；
在小(xiǎo)鼠雙耳塗(tú)抹等量溶劑（如25 μL），連(lián)續(xù)3天，其(qí)餘操(cāo)作同(tóng)實(shí)驗組(zǔ)；
用於(yú)計算刺(cì)激指數(shù)（SI）：
SI = 實驗(yàn)組(zǔ)BrdU標(biāo)記(jì)指數(shù) / 溶劑對(duì)照(zhào)組BrdU標記指(zhǐ)數
合格標準：
溶劑對照組(zǔ)的SI < 1.6；
小鼠無明(míng)顯(xiǎn)體(tǐ)重變化(huà)，耳厚度(dù)增加不(bù)超(chāo)過(guò)25%；
表明溶劑無(wú)顯(xiǎn)著刺激(jī)性，實驗(yàn)係(xì)統(tǒng)可(kě)靠(kào)。
一，陽(yáng)性對照（Positive Control）
作用：驗證(zhèng)整個檢測(cè)體係是(shì)否(fǒu)正(zhèng)常(cháng)工作(zuò)，確認(rèn)抗體識(shí)別能(néng)力，酶(méi)標反應(yīng)及顯(xiǎn)色(sè)係統(tǒng)有效。
推(tuī)薦設置：
常用物質：25% 己基(jī)肉桂醛（Hexyl Cinnamal） 或 25% 丁子香酚（Eugenol），溶(róng)劑為(wéi)丙(bǐng)酮(tóng):橄欖油(yóu) = 4:1（AOO）。
使(shǐ)用方(fāng)式：選用已知可(kě)誘導淋巴(bā)細(xì)胞增殖的(dí)致敏物(wù)，連(lián)續3天塗抹小鼠(shǔ)雙耳(ěr)，第6天腹(fù)腔注射BrdU，通過BrdU-ELISA檢測(cè)淋巴(bā)結(jié)增殖(zhí)情況。
有(yǒu)效性(xìng)判斷標準：
刺激指數（SI）≥ 1.6；
且呈(chéng)現劑(jì)量(liáng)-反應趨勢(shì)；
若未達(dá)此(cǐ)標(biāo)準(zhǔn)，表(biǎo)明實驗係統失效，需(xū)重(zhòng)做。
提示：每(měi)次(cì)實驗均(jūn)需設(shè)置陽(yáng)性(xìng)對照(zhào)組，以確(què)保模型(xíng)響(xiǎng)應穩(wěn)定(dìng)。
二(èr)，陰性(xìng)對照（Negative Control）
作(zuò)用：提(tí)供(gōng)背景(jǐng)OD值(zhí)基(jī)準(zhǔn)，用於計算(suàn)P/N值（陽(yáng)性(xìng)/陰(yīn)性(xìng)OD比值），幫(bāng)助判(pàn)定樣本是否為(wéi)陽性(xìng)，同時(shí)評估(gū)非(fēi)特異(yì)性結(jié)合(hé)。
設置(zhì)要(yào)點：
樣(yàng)本選(xuǎn)擇：應(yīng)使用(yòng)已知不(bù)含(hán)BrdU的(dí)目標物樣本，且(qiě)基質與待(dài)測樣(yàng)本一(yī)致(zhì)：
檢測血清時，使用健(jiàn)康小鼠的正(zhèng)常血清；
檢測(cè)免(miǎn)疫(yì)後(hòu)抗(kàng)體(tǐ)時(shí)，使(shǐ)用(yòng)同一動物免疫(yì)前的血清(qīng)。
孔數(shù)要求(qiú)：建議至(zhì)少設置兩個復(fù)孔(kǒng)，取(qǔ)平(píng)均值以提高(gāo)數據穩定(dìng)性(xìng)。
判讀標準(zhǔn)：P/N值(zhí) ≥ 2.1 可(kě)作為陽(yáng)性(xìng)判斷(duàn)參考之(zhī)一。
注意(yì)：避免使(shǐ)用動物(wù)源性(xìng)血(xiě)清(qīng)（如牛(niú)血(xiě)清白(bái)蛋(dàn)白）作為陰(yīn)性(xìng)對(duì)照，因其(qí)可(kě)能(néng)引入(rù)交叉(chā)反(fǎn)應。
三(sān)，溶(róng)劑(jì)對照（Vehicle Control / Solvent Control）
作用(yòng)：排(pái)除(chú)溶劑(jì)本(běn)身對皮膚或免疫係(xì)統的(dí)潛(qián)在(zài)刺激(jī)性，作(zuò)為實驗組的直(zhí)接參照。
設置(zhì)方法：
使(shǐ)用與受試物相同的溶劑(jì)，常(cháng)見為 丙(bǐng)酮:橄欖(lǎn)油（4:1, v/v），即AOO；
在小(xiǎo)鼠雙耳塗(tú)抹等量溶劑（如25 μL），連(lián)續(xù)3天，其(qí)餘操(cāo)作同(tóng)實(shí)驗組(zǔ)；
用於(yú)計算刺(cì)激指數(shù)（SI）：
SI = 實驗(yàn)組(zǔ)BrdU標(biāo)記(jì)指數(shù) / 溶劑對(duì)照(zhào)組BrdU標記指(zhǐ)數
合格標準：
溶劑對照組(zǔ)的SI < 1.6；
小鼠無明(míng)顯(xiǎn)體(tǐ)重變化(huà)，耳厚度(dù)增加不(bù)超(chāo)過(guò)25%；
表明溶劑無(wú)顯(xiǎn)著刺激(jī)性，實驗(yàn)係(xì)統(tǒng)可(kě)靠(kào)。
