鸚(yīng)鹉(wǔ)熱衣原體(tǐ)(Chlamydia psittaci, C.psittaci, Cps) 形(xíng)狀呈(chéng)圓(yuán)形或(huò)橢(tuǒ)圓(yuán)
形(xíng)，直徑約 0.3μm 左右，在細(xì)胞(bāo)空泡(pào)中(zhōng)增值，形成疏鬆(sōng)包涵體(tǐ)。鸚鹉熱衣原(yuán)體
是(shì)自然(rán)性疫源(yuán)，可(kě)在(zài)哺乳動物(wù)之間傳播。鸚鹉熱(rè)衣(yī)原體和沙眼衣原體(tǐ)(C.
trachomatis, Ct)
，肺炎衣(yī)原體(C.pneumoniae, Cpn)和反(fǎn)芻(chú)動物衣原體(C.
pecorum, Cpe)是(shì)四種最常(cháng)見的衣(yī)原體。衣原體可以(yǐ)引(yǐn)起(qǐ)哺乳動物(wù)的流產
，肺炎
，
腸(cháng)炎
，腦脊髓炎
，多(duō)漿膜炎(yán)
，多(duō)關節炎(yán)
，角(jiǎo)膜(mó)結(jié)膜炎(yán)
，尿(niào)道(dào)炎及雞的輸卵管(guǎn)炎等
症。早期
，快(kuài)速
，簡(jiǎn)便檢測(cè)衣(yī)原體對(duì)診治
，延(yán)緩該病的傳(chuán)播和預(yù)防(fáng)並發(fā)症(zhèng)顯得尤
為(wéi)重要。本產(chǎn)品即(jí)是基(jī)於(yú)熒光定量(liáng) PCR 法的(dí)鸚鹉(wǔ)熱衣原(yuán)體快(kuài)速(sù)檢(jiǎn)測(cè)試劑(jì)盒。它
具有下(xià)列特點：
1. 即開即用，用戶隻需要(yào)提供樣品 DNA 模(mó)板，操作(zuò)簡(jiǎn)單，定量(liáng)準(zhǔn)確(què)快速。
2. 根(gēn)據 Cps 主要外膜(mó)蛋(dàn)白(bái)(MOMP)基因的保守(shǒu)序列(liè)設(shè)計引(yǐn)物(wù)，引物經過優(yōu)化，
特異(yì)性高(gāo)。預期的 PCR 產物長度為 100 bp。
3. 熒光(guāng)定(dìng)量 PCR 檢測，所(suǒ)含(hán) SYBR Green I 隻與雙(shuāng)鏈(liàn) DNA 結合(hé)，反應特異(yì)
性(xìng)強。
4. 本(běn)產(chǎn)品隻適(shì)用於科(kē)研，不能用(yòng)於(yú)臨床(chuáng)診斷。

運(yùn)輸(shū)及(jí)保存(cún):

使用方(fāng)法:

一
，樣品(pǐn) DNA 的(dí)製(zhì)備
用自選方法(fǎ)提取 Cps DNA。注(zhù)意(yì)：DNA 純化方法(fǎ)是(shì)決(jué)定(dìng)檢測(cè)靈(líng)敏(mǐn)度(dù)的關
鍵因(yīn)素(sù)。如果(guǒ)不(bù)能(néng)很好(hǎo)純化樣(yàng)品(pǐn) DNA，後(hòu)麵的 PCR 再(zài)靈敏也(yě)不(bù)能提高(gāo)整體
檢(jiǎn)測靈(líng)敏度。
二
，製備(bèi) Cps 標準(zhǔn)曲綫（以(yǐ) 10-10E6 這(zhè) 6 個 10 倍(bèi)稀釋(shì)度(dù)為(wéi)例。由於標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)濃
度非常高，因此下列稀釋操作一(yī)定要在(zài)獨立的區域進行(háng)，千萬不能汙(wū)染樣品(pǐn)
或本試(shì)劑(jì)盒(hé)的其他(tā)成分）。為(wéi)增(zēng)加產品(pǐn)穩定(dìng)性(xìng)和避免擴散傳(chuán)染性(xìng)病(bìng)原，本產
品不提供(gōng)活(huó)體病毒(dú)做陽性對(duì)照(zhào)，隻提(tí)供沒有(yǒu)傳染性(xìng)的(dí)
，可(kě)以(yǐ)直接使(shǐ)用(yòng)的 DNA
片(piàn)段作為陽性(xìng)對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管(guǎn)，分別為(wéi) 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶(dài)芯槍(qiāng)頭分別加(jiā)入 45 μL 超純水（最好(hǎo)用帶芯槍頭，下同(tóng)）。
3. 先將本試(shì)劑(jì)盒(hé)提供的陽性(xìng)對(duì)照(zhào)用 TE 緩衝液或超(chāo)純(chún)水(shuǐ) 10 倍(bèi)梯(tī)度稀釋到(dào)
10E7 拷貝/μL（注(zhù)：請(qǐng)不(bù)要將(jiāng)本試(shì)劑盒提供的(dí)標(biāo)準品一次性稀釋(shì)至(zhì) 10E7
拷貝(bèi)/μL，建(jiàn)議每(měi)次稀釋(shì) 10 倍(bèi)，梯(tī)度(dù)稀(xī)釋至 10E7 拷(kǎo)貝(bèi)/μL）。
4. 在(zài) 6 號管(guǎn)中(zhōng)加入(rù) 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(zhào)(上步稀(xī)釋所得)，充(chōng)
分震(zhèn)蕩 1 分鐘，得 10E6 拷(kǎo)貝(bèi)/μL 的(dí)陽性對照。
5. 換(huàn)槍頭，從(cóng) 6 號管中(zhōng)取(qǔ) 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分(fēn)震(zhèn)蕩 1 分(fēn)鐘，得 10E5
拷貝/μL 的(dí)陽性(xìng)對(duì)照。
6. 換槍(qiāng)頭，從 5 號管(guǎn)中(zhōng)取 5 μL 溶液到(dào) 4 號管(guǎn)中，重復上麵的操(cāo)作直(zhí)到(dào)得(dé)到(dào) 6
個稀(xī)釋度的陽(yáng)性(xìng)對(duì)照。
7. NC 管(guǎn)中不加任(rèn)何(hé)陽性對(duì)照。
8. 從(cóng) 1-6 號管(guǎn)中分別取 5 μL 和待(dài)測樣品一(yī)起進行(háng)定量 PCR（見下步(bù)），每個
樣品做(zuò) 3 次重復(fù)。PCR 後(hòu)得(dé)到每個陽性對照(zhào)稀釋樣(yàng)品的熒(yíng)光 PCR Ct 值，
並以之為(wéi)縱(zòng)軸，以(yǐ)濃度的(dí)對數值(zhí)為橫(héng)軸(zhóu)，繪製標(biāo)準曲(qū)綫。
三(sān)
，PCR 檢(jiǎn)測（20 μL 體係）
1. 在(zài) PCR 管中加入下(xià)列(liè)成分（待測樣(yàng)品(pǐn)需(xū)要做三次重(zhòng)復(fù)，下(xià)表(biǎo)隻(zhī)列(liè)出一(yī)次(cì)）：
成分(fēn) 樣(yàng)品 陰(yīn)性對照
2×qPCR Mix 10 μL 10 μL
Cps DNA 模板 1-5 μL 無(wú)
陽性(xìng)對照 無(wú) 無(wú)
自(zì)備 1×ROX (見注(zhù)) 2 μL 2 μL
Cps 專(zhuān)一(yī)性(xìng)引物一（正向(xiàng)引物） 1 μL 1 μL
Cps 專(zhuān)一性(xìng)引物二(èr)（反(fǎn)向(xiàng)引(yǐn)物(wù)） 1 μL 1 μL
補水(shuǐ)到 20 μL
注: 僅 ABI7500
，7700 和(hé) 7900 儀器需要使(shǐ)用(yòng) ROX 作(zuò)為對照，其他熒光(guāng)
PCR 儀器（如(rú) iCycler IQ
，MJ Option
，MJ Chromo4
，MX3000
，
MX4000
，RotorGene 3000
，RotorGene 6000 和(hé) LightCycler480）
不需要使(shǐ)用 ROX。
2. 建議 PCR 反應參(cān)數（具(jù)體(tǐ) PCR 參數(shù)可以(yǐ)根(gēn)據(jù)儀器(qì)不(bù)同而(ér)自行優化(huà)）
過(guò)程 溫度 時間
活化 95℃ 20 s
PCR 反(fǎn)應(yīng)
（40 個循環(huán)）
95℃ 5 s
60℃ 25 s
熔解(jiě)曲綫分析(xī)
95℃ 15 s
60℃ 1 min
95℃ 15 s
60℃ 15 s
3. 數(shù)據采集
具體(tǐ)操作按所用儀(yí)器(qì)推(tuī)薦的流(liú)程進行。本產品(pǐn)中(zhōng)所含的熒光染(rǎn)料在不結合(hé)
DNA 時(shí)，最大吸收光譜在(zài) 471nm，結合(hé) DNA 時(shí)的(dí)最大吸收(shōu)光(guāng)譜(pǔ)在 500nm，
最(zuì)大發射光(guāng)譜在(zài) 530nm。
四(sì)
，數(shù)據(jù)處(chǔ)理
以 Cps 陽性(xìng)對照濃度的 log 值為(wéi)橫軸(zhóu)，以 Ct 值(zhí)為縱(zòng)軸，繪製(zhì)標(biāo)準曲(qū)綫。再
以(yǐ)待測(cè)樣(yàng)品濃(nóng)度的 log 為橫(héng)軸，以(yǐ) Ct 值為縱(zòng)軸，通(tōng)過待測(cè)樣品(pǐn)的(dí) Ct 值計算(suàn)
出(chū)樣品(pǐn) DNA 的(dí)濃度(dù)。