理想細胞轉染(rǎn)方法，應該具有轉染(rǎn)效率高，細胞(bāo)毒性小等(děng)優(yōu)點。病(bìng)毒(dú)介(jiè)導的(dí)轉(zhuǎn)染(rǎn)技術，是目前轉(zhuǎn)染(rǎn)效率(shuài)的方(fāng)法(fǎ)，同時具(jù)有細(xì)胞毒性很(hěn)低(dī)的(dí)優勢(shì)。但是，病毒轉染方(fāng)法的準備(bèi)程(chéng)序復雜，常(cháng)常對(duì)細胞類型(xíng)有(yǒu)很(hěn)強(qiáng)的(dí)選(xuǎn)擇(zé)性，在一般實驗(yàn)室中很難普及(jí)。其它物理(lǐ)和化學介導的轉染方法，則各(gè)有其(qí)特點(diǎn)。

    轉(zhuǎn)染 ，是將(jiāng)外(wài)源性基因導(dǎo)入(rù)細胞內(nèi)的一種(zhǒng)專(zhuān)門(mén)技(jì)術。隨(suí)著(zhuó)基因(yīn)與蛋白功(gōng)能(néng)研究的深入(rù)，轉(zhuǎn)染目前(qián)已成(chéng)為實(shí)驗室(shì)工作(zuò)中經常涉及(jí)的(dí)基本方法。轉染大(dà)致可(kě)分為物(wù)理介導，化學(xué)介導和生物介(jiè)導三(sān)類途徑(jìng)。電(diàn)穿孔(kǒng)法(fǎ)，顯微(wēi)注(zhù)射和基因(yīn)槍(qiāng)屬於(yú)通(tōng)過物理方法(fǎ)將基因(yīn)導(dǎo)入(rù)細(xì)胞(bāo)的(dí)範例；化(huà)學介導方(fāng)法很多，如(rú)經(jīng)典(diǎn)的磷(lín)酸鈣共沉(chén)澱法(fǎ)，脂質(zhì)體(tǐ)轉(zhuǎn)染(rǎn)方法(fǎ)，和多種陽離子物質(zhì)介(jiè)導(dǎo)的(dí)技術；生(shēng)物介(jiè)導方(fāng)法(fǎ)，有較為(wéi)原(yuán)始的原生質體轉(zhuǎn)染，和(hé)現在比較(jiào)多見的(dí)各(gè)種病毒介導的轉染(rǎn)技(jì)術(shù)。

    需(xū)要指出的(dí)一點(diǎn)，無(wú)論采用哪(nǎ)種轉染技術，要獲得*優(yōu)的轉染(rǎn)結果，可(kě)能(néng)都需要對(duì)轉染(rǎn)條(tiáo)件進行優(yōu)化(huà)。影響轉(zhuǎn)染(rǎn)效(xiào)率的因素很(hěn)多(duō)，從(cóng)細胞(bāo)類型(xíng)，細(xì)胞培養條(tiáo)件和細(xì)胞(bāo)生(shēng)長狀(zhuàng)態，到轉(zhuǎn)染方(fāng)法(fǎ)的(dí)操作細節(jié)，都(dū)需要(yào)考(kǎo)慮。

一，細胞(bāo)傳(chuán)代(dài)

1. 試驗(yàn)準備：200ul/1mlTip頭各(gè)一(yī)盒（以上(shàng)物品(pǐn)均需(xū)高壓滅菌），酒精棉球(qiú)，廢(fèi)液(yè)缸(gāng)，試(shì)管架，微量(liáng)移液器(qì)，記號筆，培(péi)養(yǎng)皿，離心管(guǎn)。

2. 棄掉培養(yǎng)皿(mǐn)中的培養基，用(yòng)1ml的(dí)PBS溶液洗滌(dí)兩(liǎng)次(cì)。

3. 用(yòng)Tip頭(tóu)加(jiā)入(rù)1ml Trypsin液(yè)，消(xiāo)化(huà)1分鐘（37℃，5%CO2 ）。用手輕(qīng)拍培養(yǎng)瓶(píng)壁，觀察到(dào)細(xì)胞完全從(cóng)壁(bì)上(shàng)脫落下來(lái)為止。

4. 加(jiā)入(rù)1ml的含(hán)血(xiě)清(qīng)培(péi)養(yǎng)基終止反(fǎn)應。

5. 用(yòng)Tip頭多次吹(chuī)吸(xī)，使(shǐ)細胞完(wán)全分(fēn)散(sàn)開。

6. 將培養液裝(zhuāng)入離心管(guǎn)中，1000rpm離心(xīn)5min。

7. 用培養(yǎng)液(yè)重(zhòng)懸(xuán)細胞，細胞(bāo)計(jì)數(shù)後(hòu)選(xuǎn)擇(zé)0.8X106個(gè)細(xì)胞(bāo)加(jiā)入一個(gè)35mm培養(yǎng)皿(mǐn)。

8. 將(jiāng)合適體積完全(quán)培(péi)養液(yè)加入離心(xīn)管中，混匀(yún)細胞後(hòu)輕輕加(jiā)入(rù)培養皿中(zhōng)，使其均匀(yún)分布。

9. 將培養(yǎng)皿轉入CO2培養箱中(zhōng)培養，第二(èr)天轉染(rǎn)。

二，細胞轉(zhuǎn)染(rǎn)

1. 轉(zhuǎn)染試劑的(dí)準備

① 將400ul去核酸酶水(shuǐ)加(jiā)入管中(zhōng)，震(zhèn)蕩10秒鐘(zhōng)，溶(róng)解脂狀(zhuàng)物(wù)。

② 震蕩後將試劑放(fàng)在－20攝(shè)氏(shì)度保存，使用前還需(xū)震蕩。

2. 選(xuǎn)擇(zé)合適的(dí)混合比例（1：1－1：2/脂質體體(tǐ)積：DNA質量）來(lái)轉染細胞(bāo)。在一個轉染管中加入合(hé)適體積(jī)的(dí)無血(xiě)清(qīng)培養(yǎng)基(jī)。加入(rù)合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩後(hòu)在加入合適體積的(dí)轉染試(shì)劑，再(zài)次(cì)震蕩。

3. 將混合液在(zài)室溫(wēn)放置(zhì)10―15分鐘(zhōng)。

4. 吸(xī)去(qù)培(péi)養板中(zhōng)的(dí)培養(yǎng)基，用(yòng)PBS或者(zhě)無血(xiě)清培養基(jī)清(qīng)洗(xǐ)一(yī)次(cì)。

5. 加入(rù)混合(hé)液(yè)，將細胞放回(huí)培(péi)養箱中培(péi)養(yǎng)一個(gè)小(xiǎo)時。

6. 到(dào)時(shí)後，根據細(xì)胞(bāo)種類決定是(shì)否(fǒu)移除混(hùn)合(hé)液，之(zhī)後加入完(wán)全培(péi)養基繼(jì)續培養(yǎng)24－48小(xiǎo)時。

三(sān)，第(dì)二(èr)次細(xì)胞傳(chuán)代(dài)

1. 在轉染後24小時，觀察實驗(yàn)結果(guǒ)並(bìng)記錄綠(lǜ)色熒光(guāng)蛋白(bái)表達(dá)情況(kuàng)。

2. 再(zài)次進(jìn)行細胞(bāo)傳代，按(àn)照免(miǎn)疫染色合(hé)適的密度0.8X105個(gè)細胞/35mm培(péi)養皿(mǐn)將細(xì)胞(bāo)重新轉入(rù)培(péi)養皿中(zhōng)。

3. 在正常(cháng)條件下培(péi)養24小(xiǎo)時(shí)後按照染色(sè)要求(qiú)條件固(gù)定(dìng)。