狐狸(lí)源(yuán)性(xìng)成(chéng)分(fēn)探(tàn)針(zhēn)法(fǎ)熒(yíng)光定量PCR試劑盒(hé)實驗(yàn)方(fāng)法(fǎ)步驟:

方法(fǎ)

1:在(zài)冰浴(yù)中,按以(yǐ)下次(cì)序將(jiāng)各成(chéng)分加入一(yī)無菌0.5ml離(lí)心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物(wù)2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至(zhì) 50 μl  

視(shì)PCR儀(yí)有無熱蓋,不(bù)加(jiā)或添(tiān)加(jiā)石蠟油(yóu)。

2調整好(hǎo)反(fǎn)應程(chéng)序(xù)。將上述混(hùn)合液稍(shāo)加(jiā)離心(xīn),立即置PCR儀(yí)上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般(bān):在93℃預變性(xìng)3-5min,進(jìn)入(rù)循(xún)環(huán)擴(kuò)增階段(duàn):93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保溫7min。
人角膜(mó)上(shàng)皮細胞完(wán)全培養(yǎng)基
人(rén)視(shì)網膜色(sè)素上皮細胞完全培養(yǎng)基
人視網膜微血管內皮(pí)細(xì)胞(bāo)完(wán)全(quán)培養基(jī)
人角膜成(chéng)纖維(wéi)細(xì)胞完全培(péi)養(yǎng)基(jī)
人(rén)小梁(liáng)網細(xì)胞完(wán)全培養(yǎng)基
人視(shì)網膜muller細(xì)胞完全培(péi)養基(jī)
人角(jiǎo)膜(mó)內(nèi)皮(pí)細胞(bāo)完全(quán)培養(yǎng)基
人脈(mài)絡膜微血管細胞(bāo)完全(quán)培養基(jī)
人(rén)牙(yá)周膜成纖維(wéi)細(xì)胞完(wán)全培(péi)養(yǎng)基
大(dà)鼠肺微(wēi)血管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基
大(dà)鼠肺(fèi)血(xiě)管平滑肌(jī)細(xì)胞完(wán)全(quán)培養(yǎng)基
大(dà)鼠Ⅱ型肺泡(pào)上皮細胞(bāo)完全培(péi)養(yǎng)基(jī)
大鼠(shǔ)氣(qì)管上(shàng)皮(pí)細胞完全(quán)培養(yǎng)基
大鼠氣管(guǎn)平(píng)滑(huá)肌細(xì)胞完全(quán)培養(yǎng)基(jī)
大(dà)鼠(shǔ)肺成纖維細(xì)胞(bāo)完(wán)全培養(yǎng)基
大鼠支氣管(guǎn)上皮細(xì)胞完(wán)全培(péi)養基(jī)
大(dà)鼠支氣(qì)管成纖維(wéi)細胞完全培養基
大鼠(shǔ)肺(fèi)大(dà)靜脈(mài)平滑(huá)肌(jī)細胞(bāo)完(wán)全培養基
大(dà)鼠肺大(dà)動脈平滑肌細胞(bāo)完全培養基(jī)
大(dà)鼠(shǔ)肺大動脈內皮(pí)細(xì)胞完(wán)全培養基
大鼠(shǔ)肺動(dòng)脈成(chéng)纖維(wéi)細胞完全(quán)培養基(jī)
大鼠(shǔ)肺大靜脈內皮細胞完全培養基(jī)
大(dà)鼠氣(qì)管和支氣(qì)管(guǎn)上(shàng)皮(pí)細(xì)胞完(wán)全(quán)培養基
大鼠(shǔ)胰島細(xì)胞完(wán)全(quán)培養(yǎng)基
大鼠(shǔ)胰腺(xiàn)星狀(zhuàng)細胞完全(quán)培(péi)養基(jī)
大(dà)鼠胰腺導管(guǎn)上皮細胞完(wán)全(quán)培養基
大(dà)鼠(shǔ)頜下(xià)腺(xiàn)上皮(pí)細(xì)胞(bāo)完(wán)全培養基(jī)
大(dà)鼠腮(sāi)腺細(xì)胞完(wán)全(quán)培(péi)養基(jī)
大鼠乳(rǔ)腺(xiàn)上皮(pí)細胞完全培養基(jī)

3結(jié)束反(fǎn)應,PCR產物放(fàng)置(zhì)於4℃待(dài)電泳檢測(cè)或-20℃長(cháng)期保(bǎo)存。

4PCR的(dí)電泳(yǒng)檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油(yóu),需用100μl氯(lǜ)仿進行(háng)抽(chōu)提反應(yīng)混合(hé)液(yè),以(yǐ)除去(qù)石蠟油(yóu);否則,直接(jiē)取(qǔ)5-10μl電(diàn)泳(yǒng)檢測(cè)。