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PCR檢測試劑盒
商(shāng)品屬性
| 產品名稱 | 英文(wén)名稱 | 貨(huò)號(hào) |
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米德(dé)爾(ěr)堡(bǎo)病毒PCR檢測(cè)試劑(jì)盒(hé) |
Middelburg VirusRTPCR |
YS-P014420 |
分類(lèi)：PCR檢測(cè)試劑(jì)盒
儲存條件：-20℃避光(guāng)保(bǎo)存，避免(miǎn)反(fǎn)復凍融(róng)。
運輸(shū)：低(dī)溫(wēn)，避(bì)光(guāng)。
有效(xiào)期(qī)：一年
貨(huò)期(qī)：現貨PCR試(shì)劑盒的有(yǒu)效(xiào)期(qī)一般(bān)為1年，這(zhè)是(shì)指(zhǐ)在適(shì)當的(dí)儲(chǔ)存溫(wēn)度(dù)下(xià)。核(hé)酸(suān)擴增部(bù)分(fēn)的試(shì)劑一(yī)般要(yào)貯存(cún)於-20℃下，產物(wù)檢測(cè)部(bù)分試(shì)劑則貯存於(yú)2-8℃。盡(jìn)量避免(miǎn)反復(fù)凍(dòng)融(róng)。
【結(jié)果(guǒ)分析條件(jiàn)設(shè)定】
u 閾值(zhí)(Threshold)設(shè)定(dìng)：將閾值(zhí)綫設(shè)定(dìng)在(zài)剛好超過正(zhèng)常(cháng)陰(yīn)性質控品(pǐn)擴增曲(qū)綫的(dí)最(zuì)高點(diǎn)。
【質控標準】
2. 陽(yáng)性質控(kòng)品的檢測結果(guǒ)應為(wéi)陽(yáng)性，有明(míng)顯的指數擴增期，Ct值應(yīng)小(xiǎo)於等於35；
3. 以上要(yào)求需在一次實驗(yàn)中(zhōng)同(tóng)時(shí)滿(mǎn)足(zú)，否(fǒu)則(zé)該(gāi)次(cì)實驗視為(wéi)無效。
【結(jié)果(guǒ)判斷】
2.可(kě)疑(yí)：有明(míng)顯的指數擴增期，且38≤Ct<40，此(cǐ)時(shí)樣本為可(kě)疑樣本(běn)；對於(yú)可(kě)疑(yí)樣本建議復(fù)核一次，若(ruò)復核(hé)結(jié)果Ct<40且(qiě)有指(zhǐ)數(shù)擴增期(qī)，則(zé)判定(dìng)為(wéi)陽性(xìng)，否(fǒu)則(zé)判定為(wéi)陰性；
3. 陰(yīn)性：無指數擴增期，Ct=40或無(wú)Ct值均(jūn)判定(dìng)為陰性(xìng)樣本(běn)。
【對(duì)檢(jiǎn)驗(yàn)結(jié)果(guǒ)的(dí)解釋】
1. 實(shí)驗室環(huán)境汙染，試劑(jì)汙(wū)染(rǎn)，樣品交叉汙染(rǎn)會出(chū)現(xiàn)假陽性(xìng)結果；
2. 試劑運輸，保存不當(dāng)或(huò)試劑(jì)配製(zhì)不準確(què)引起的試劑(jì)檢(jiǎn)測效(xiào)能下降，可(kě)能會(huì)導(dǎo)致出(chū)現假陰(yīn)性(xìng)結(jié)果。
PCR反應的(dí)特(tè)異(yì)性(xìng)：
②鹼(jiǎn)基(jī)配對原則；
③Taq DNA聚(jù)合酶合成(chéng)反(fǎn)應的忠實(shí)性；
④靶基(jī)因(yīn)的(dí)特異性與保(bǎo)守性。
米德(dé)爾堡病毒PCR檢(jiǎn)測(cè)試劑盒其(qí)中(zhōng)引物與模(mó)板(bǎn)的正(zhèng)確結合是關鍵(jiàn)。引(yǐn)物與(yǔ)模板的結合及引物鏈的延伸(shēn)是遵(zūn)循(xún)鹼(jiǎn)基(jī)配對原(yuán)則(zé)的。聚(jù)合酶合(hé)成(chéng)反(fǎn)應的(dí)忠(zhōng)實性及Taq DNA聚合酶(méi)耐高溫性(xìng)，使反(fǎn)應中模板與引(yǐn)物的結合(復性(xìng))可以在較高(gāo)的溫度下進行(háng)，結合的特異(yì)性大(dà)大(dà)增(zēng)加，被(bèi)擴增的(dí)靶基因片段(duàn)也就能(néng)保(bǎo)持很(hěn)高(gāo)的正確度。再通過選擇特異(yì)性(xìng)和保守(shǒu)性高的靶基因區(qū)，其(qí)特異(yì)性程(chéng)度就更(gēng)高。
(2) 靈敏(mǐn)度(dù)高(gāo)
PCR產(chǎn)物的生成(chéng)量(liáng)是(shì)以指數方式增加的(dí)，能將(jiāng)皮克(kè)(pg=10-12g)量級(jí)的(dí)起(qǐ)始(shǐ)待測(cè)模板(bǎn)擴(kuò)增到微(wēi)克(kè)(ug=10-6g)水平(píng)。能從(cóng)100萬個細胞中檢(jiǎn)出一個(gè)靶(bǎ)細胞；在(zài)病(bìng)毒(dú)的檢(jiǎn)測中，PCR的(dí)靈敏度可達3個RFU(空斑形(xíng)成(chéng)單(dān)位(wèi))；在細菌(jūn)學(xué)中zui小(xiǎo)檢出率(shuài)為3個細菌(jūn)。
(3) 簡便，快(kuài)速
PCR反應(yīng)用耐高(gāo)溫(wēn)的(dí)Taq DNA聚(jù)合酶(méi)，一(yī)次性地(dì)將反(fǎn)應(yīng)液加好後(hòu)，即在DNA擴增(zēng)液和(hé)水(shuǐ)浴鍋上(shàng)進行變(biàn)性(xìng)-退火-延(yán)伸反應(yīng)，一般在2～4 小(xiǎo)時完(wán)成擴(kuò)增反應(yīng)。擴增(zēng)產物一般(bān)用電(diàn)泳分析(xī)，不一定要(yào)用(yòng)同(tóng)位素，無(wú)放(fàng)射性汙(wū)染(rǎn)，易(yì)推廣(guǎng)。
(4) 對(duì)標本(běn)的純度要求低
不需要分離(lí)病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細胞(bāo)，DNA 粗(cū)製(zhì)品及(jí)總(zǒng)RNA均可(kě)作(zuò)為(wéi)擴增(zēng)模板(bǎn)。可直(zhí)接用臨床標本如血(xiě)液(yè)，體(tǐ)腔(qiāng)液，洗嗽液，毛發(fā)，細胞(bāo)，活(huó)PCR技術概論。
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