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PCR檢(jiǎn)測(cè)試劑(jì)盒
商(shāng)品(pǐn)屬性(xìng)
| 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格(gé) | 貨號 |
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豬布(bù)氏杆菌(jūn)PCR檢測試劑盒(hé) |
50T |
YS-P015332 |
儲(chǔ)存(cún)條件(jiàn)：-20℃避光(guāng)保(bǎo)存，避(bì)免反(fǎn)復凍融(róng)。
運(yùn)輸(shū)：低溫，避(bì)光(guāng)。
有效(xiào)期(qī)：一年
貨(huò)期：現貨(huò)PCR試劑(jì)盒(hé)的(dí)有(yǒu)效期一般為1年，這是(shì)指(zhǐ)在(zài)適當的儲(chǔ)存溫度(dù)下(xià)。核酸擴增(zēng)部(bù)分(fēn)的試劑(jì)一(yī)般要貯存(cún)於-20℃下(xià)，產物檢測(cè)部分試劑則(zé)貯(zhù)存(cún)於(yú)2-8℃。盡(jìn)量避(bì)免反(fǎn)復凍融(róng)。
【結(jié)果分(fēn)析條件(jiàn)設定】
u 閾值(Threshold)設(shè)定(dìng)：將(jiāng)閾值(zhí)綫(xiàn)設定在剛(gāng)好(hǎo)超過(guò)正常陰性質控品擴(kuò)增(zēng)曲綫的(dí)最(zuì)高(gāo)點(diǎn)。
【質(zhì)控標(biāo)準】
2. 陽性(xìng)質控(kòng)品(pǐn)的檢測結(jié)果(guǒ)應為陽(yáng)性，有明顯的(dí)指數(shù)擴增期(qī)，Ct值應(yīng)小(xiǎo)於等(děng)於35；
3. 以(yǐ)上要(yào)求需在一(yī)次實(shí)驗中同(tóng)時滿(mǎn)足，否則該(gāi)次實驗(yàn)視(shì)為(wéi)無效(xiào)。
【結果(guǒ)判斷(duàn)】
2.可(kě)疑(yí)：有(yǒu)明顯的(dí)指數擴增(zēng)期(qī)，且38≤Ct<40，此(cǐ)時(shí)樣本為可(kě)疑(yí)樣本；對於(yú)可疑樣本建(jiàn)議(yì)復(fù)核(hé)一次，若(ruò)復核(hé)結果Ct<40且有(yǒu)指數擴(kuò)增期(qī)，則(zé)判定(dìng)為陽(yáng)性(xìng)，否則(zé)判(pàn)定為(wéi)陰性(xìng)；
3. 陰(yīn)性：無(wú)指數擴增期，Ct=40或無(wú)Ct值均判定為(wéi)陰(yīn)性樣本(běn)。
【對檢驗結果的(dí)解釋(shì)】
1. 實(shí)驗室環境汙染(rǎn)，試(shì)劑汙染，樣(yàng)品交叉(chā)汙染(rǎn)會出現假陽(yáng)性(xìng)結果(guǒ)；
2. 試劑(jì)運輸，保(bǎo)存不(bù)當或試劑配製(zhì)不準確引(yǐn)起(qǐ)的(dí)試(shì)劑(jì)檢測(cè)效(xiào)能(néng)下降(jiàng)，可(kě)能(néng)會導致出(chū)現(xiàn)假陰性結果(guǒ)。
PCR反(fǎn)應(yīng)的(dí)特異性(xìng)：
②鹼基(jī)配(pèi)對(duì)原則(zé)；
③Taq DNA聚合酶合(hé)成反應(yīng)的(dí)忠(zhōng)實性；
④靶(bǎ)基(jī)因的特異(yì)性與保(bǎo)守性。
豬(zhū)布氏杆菌(jūn)PCR檢(jiǎn)測試劑盒(hé)其中引(yǐn)物與模板的(dí)正確(què)結合是關鍵(jiàn)。引物與模(mó)板(bǎn)的(dí)結(jié)合(hé)及引物鏈的(dí)延(yán)伸(shēn)是(shì)遵循鹼(jiǎn)基配對(duì)原(yuán)則的(dí)。聚(jù)合酶合(hé)成反應(yīng)的(dí)忠(zhōng)實性及(jí)Taq DNA聚合酶(méi)耐高(gāo)溫性，使(shǐ)反(fǎn)應中(zhōng)模(mó)板(bǎn)與(yǔ)引(yǐn)物的(dí)結(jié)合(復性)可以在較高的(dí)溫度下進行(háng)，結(jié)合的特異性大(dà)大(dà)增加(jiā)，被擴增的(dí)靶(bǎ)基因片段也(yě)就能保(bǎo)持(chí)很高的正確度。再通過(guò)選擇(zé)特異性和保守(shǒu)性高的(dí)靶(bǎ)基(jī)因(yīn)區，其特異性程(chéng)度就更高。
(2) 靈敏度(dù)高(gāo)
PCR產物的生成量是以指數(shù)方式(shì)增(zēng)加(jiā)的(dí)，能(néng)將皮(pí)克(kè)(pg=10-12g)量級(jí)的(dí)起始(shǐ)待(dài)測模板擴增到微(wēi)克(ug=10-6g)水(shuǐ)平。能(néng)從(cóng)100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞(bāo)中檢(jiǎn)出(chū)一個靶(bǎ)細胞(bāo)；在病毒(dú)的檢測(cè)中(zhōng)，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑(bān)形成單(dān)位)；在(zài)細菌(jūn)學中(zhōng)zui小檢出率為3個(gè)細菌。
(3) 簡(jiǎn)便，快速(sù)
PCR反應用耐高(gāo)溫的Taq DNA聚(jù)合酶(méi)，一(yī)次(cì)性地(dì)將反應(yīng)液加(jiā)好後，即在(zài)DNA擴增(zēng)液和水浴鍋上(shàng)進行(háng)變(biàn)性(xìng)-退(tuì)火(huǒ)-延(yán)伸(shēn)反(fǎn)應，一般在2～4 小(xiǎo)時(shí)完成擴增(zēng)反應。擴增產物(wù)一般(bān)用電泳分(fēn)析(xī)，不一定要(yào)用同(tóng)位(wèi)素，無(wú)放射性(xìng)汙(wū)染，易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度(dù)要(yào)求低
不(bù)需要(yào)分離(lí)病毒(dú)或細菌(jūn)及培(péi)養細胞，DNA 粗(cū)製品及總RNA均(jūn)可(kě)作(zuò)為(wéi)擴增模板。可(kě)直接用(yòng)臨床(chuáng)標本(běn)如(rú)血液(yè)，體腔液，洗嗽液，毛(máo)發，細胞(bāo)，活PCR技術概(gài)論(lùn)。
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