小(xiǎo)鼠胰高血(xiě)糖素樣(yàng)肽1(GLP-1)酶聯免疫(yì)分析(xī)試劑盒雙(shuāng)抗體夾心法(檢測(cè)未知抗(kàng)原)
1，用(yòng)緩衝(chōng)液(yè)將抗體(tǐ)稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔(kǒng)中(zhōng)加(jiā)0.1ml，4℃ 過夜(yè)。次日，棄去(qù)孔(kǒng)內(nèi)溶液，用洗(xǐ)滌緩衝液洗(xǐ)3次(cì)。
2，加樣
：加(jiā)一(yī)定稀(xī)釋的(dí)待檢樣品0.05ml於上述(shù)已包被之反應(yīng)孔(kǒng)中(zhōng)，置(zhì)37℃ 孵育(yù)1小時。然(rán)後(hòu)洗(xǐ)滌(同時(shí)做空白(bái)孔，陰(yīn)性對(duì)照(zhào)孔及(jí)陽性對(duì)照(zhào)孔)。
3，加(jiā)酶(méi)標抗體
：於各反應孔中(zhōng)，加(jiā)入新鮮(xiān)稀釋(shì)的酶(méi)標(biāo)抗體(tǐ)(經(jīng)滴定後的稀釋度(dù))0.05ml。37℃ 孵(fū)育(yù)0.5～1小(xiǎo)時(shí)，洗滌。
4，加(jiā)底物(wù)液顯色
：於各反(fǎn)應孔中(zhōng)加(jiā)入臨時(shí)配製的TMB底(dǐ)物(wù)溶(róng)液0.1ml，37℃ 10～30分(fēn)鐘(zhōng)。
5，終(zhōng)止反(fǎn)應
：於各反應(yīng)孔中(zhōng)加入2M硫酸(suān)0.05ml
6，結果判定(dìng)
：可於白色(sè)背景上(shàng)，直接(jiē)用肉眼觀察(chá)結(jié)果
：反應孔內(nèi)顏色越深(shēn)，陽性程度越強(qiáng)，陰(yīn)性(xìng)反應(yīng)為(wéi)無(wú)色(sè)或(huò)極(jí)淺，依(yī)據所(suǒ)呈(chéng)顏色的深(shēn)淺，以(yǐ)“+”，“-”號表示(shì)。也可(kě)測OD值(zhí)
：在(zài)ELISA檢(jiǎn)測(cè)儀(yí)上，於450nm(若以(yǐ)ABTS顯色(sè)，則410nm)處，以空(kōng)白對照孔(kǒng)調(tiáo)零後(hòu)測(cè)各(gè)孔OD值，若大(dà)於(yú)規定的陰性(xìng)對照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性(xìng)。