大鼠冠狀動(dòng)脈成纖維細胞

大(dà)鼠(shǔ)冠(guān)狀動(dòng)脈(mài)成(chéng)纖(xiān)維細(xì)胞(bāo)分離自冠狀(zhuàng)動脈(mài)組(zǔ)織；冠(guān)狀動脈是(shì)供給(gěi)心髒(zàng)血液(yè)的動(dòng)脈
，起於主動(dòng)脈(mài)根(gēn)部
，分左右兩(liǎng)支(zhī)
，行(háng)於(yú)心(xīn)髒表麵(miàn)。采用(yòng)Schlesinger等(děng)的分類原則
，將冠狀(zhuàng)動(dòng)脈(mài)的(dí)分布(bù)分(fēn)為三型(xíng)右(yòu)優勢型，均(jūn)衡(héng)型(xíng)，左優勢(shì)型(xíng)。左(zuǒ)右冠狀動(dòng)脈是(shì)升(shēng)主動(dòng)脈的(dí)第一(yī)對分支(zhī)。左(zuǒ)冠狀動脈(mài)為一短幹(gān)
，發自左(zuǒ)主動脈竇
，經肺(fèi)動脈起始部和左心耳之間
，沿(yán)冠狀溝向(xiàng)左前(qián)方(fāng)行(háng)後
，立即(jí)分(fēn)為(wéi)前室(shì)間(jiān)支和旋支。前室間(jiān)支沿(yán)前室間溝(gōu)下(xià)行(háng)
，旋(xuán)支(zhī)繞過(guò)心(xīn)尖切跡至心的(dí)膈(gé)麵與(yǔ)右(yòu)冠狀動脈的後(hòu)室(shì)間支相吻(wěn)合。它是(shì)構成(chéng)冠狀動(dòng)脈壁的主(zhǔ)要細胞成分(fēn)
，細胞膜上分布(bù)著多種(zhǒng)離(lí)子(zǐ)通道
，如電壓(yā)依賴(lài)性(xìng)Na⁺通道，多種(zhǒng)Ca²⁺通道和(hé)K⁺通道；它(tā)們(mén)參與(yǔ)了靜(jìng)息(xī)電(diàn)位(wèi)的維持與細胞膜(mó)電位(wèi)的(dí)復極化(huà)，超極化(huà)
，調(tiáo)節血管(guǎn)平(píng)滑肌(jī)的收(shōu)縮及舒張功能
，此(cǐ)外動(dòng)脈粥樣硬化的(dí)發展也(yě)涉及冠(guān)狀(zhuàng)動(dòng)脈(mài)平滑(huá)肌細胞增殖，炎症(zhèng)及(jí)凋亡(wáng)等。成纖(xiān)維細胞功(gōng)能活動(dòng)旺盛
，細(xì)胞質嗜(shì)弱鹼性
，具明顯的蛋白質合(hé)成(chéng)和分(fēn)泌(mì)活動(dòng)
，在一(yī)定(dìng)條(tiáo)件下
，它可以實現跟纖(xiān)維(wéi)細胞(bāo)的(dí)互相轉(zhuǎn)化；成(chéng)纖(xiān)維(wéi)細胞(bāo)對不同程(chéng)度(dù)的細(xì)胞(bāo)變(biàn)性(xìng)，壞(huài)死(sǐ)和組(zǔ)織(zhī)缺(quē)損的修復(fù)有(yǒu)著(zhuó)十分重要(yào)的作用。剛分(fēn)離(lí)的(dí)肺(fèi)成(chéng)纖維細胞呈圓(yuán)形，折(zhē)光(guāng)性(xìng)良(liáng)好
，懸(xuán)浮(fú)於培養基(jī)中(zhōng)。30 min細(xì)胞貼(tiē)壁(bì)
，其中部分開始伸出(chū)偽(wěi)足(zú)
，表現為小(xiǎo)的突起(qǐ)；6 h後細胞基本貼壁完(wán)全
，伸(shēn)展(zhǎn)成梭(suō)形(xíng)
，胞核清晰
，分布較(jiào)均匀(yún)
，散在(zài)生(shēng)長(cháng)
，不聚(jù)集成團(tuán)；細(xì)胞生(shēng)長迅(xùn)速(sù)
，5-7天即呈(chéng)融(róng)合(hé)狀態(tài)
，細(xì)胞排(pái)列(liè)緊密
，有(yǒu)的交(jiāo)叉(chā)重(zhòng)疊生長(cháng)
，平坦，胞體(tǐ)較(jiào)大(dà)
，細(xì)胞質透(tòu)明(míng)
，細(xì)胞(bāo)核較大
，呈(chéng)橢圓(yuán)形(xíng)
，顏色淡。細(xì)胞融合
，並彼此連接(jiē)成(chéng)網狀(zhuàng)；細(xì)胞呈突起的紡(fǎng)錘(chuí)形或星(xīng)形的(dí)扁平分布(bù)。

自備試(shì)劑： 0.25%胰蛋白酶(méi)  ，PBS  ，完(wán)全培(péi)養(yǎng)基(jī)

培養基： 大鼠冠狀(zhuàng)動(dòng)脈成纖維細胞(bāo)完(wán)全培養基(含FBS，生長(cháng)添(tiān)加(jiā)劑，Penicillin，Streptomycin等)

換(huàn)液頻(pín)率(shuài)： 每2-3天換液一(yī)次(cì)

生長特性： 貼(tiē)壁(bì)生長

細胞(bāo)形(xíng)態(tài)： 成纖維細胞(bāo)樣(yàng)

傳代(dài)比(bǐ)例： 1:2

傳代特(tè)性： 可(kě)傳2-3代(dài)左(zuǒ)右；2代以內(nèi)狀態最佳

消化液： 0.25%胰(yí)蛋白(bái)酶

大(dà)鼠(shǔ)冠狀(zhuàng)動脈成(chéng)纖(xiān)維(wéi)細胞(bāo)體外培養(yǎng)周(zhōu)期有(yǒu)限(xiàn)；建議使用配(pèi)套(tào)的(dí)專(zhuān)用生長培(péi)養(yǎng)基(jī)及(jí)正確(què)的操作方(fāng)法來培(péi)養
，以此保證該細(xì)胞(bāo)的(dí)最佳培養狀(zhuàng)態。

方(fāng)法簡(jiǎn)介 實(shí)驗室(shì)分離的大(dà)鼠冠(guān)狀(zhuàng)動脈成纖維(wéi)細胞采用(yòng)胰蛋白酶-膠(jiāo)原(yuán)酶聯(lián)合消(xiāo)化(huà)法結合差速(sù)貼(tiē)壁法(fǎ)製(zhì)備而(ér)來
，細胞(bāo)總(zǒng)量約為(wéi)5×10⁵ cells/瓶。

質(zhì)量檢(jiǎn)測 實(shí)驗(yàn)室分(fēn)離的(dí)大鼠(shǔ)冠(guān)狀(zhuàng)動(dòng)脈(mài)成(chéng)纖維(wéi)細胞經Vimentin免疫(yì)熒光(guāng)鑒(jiàn)定
，純(chún)度可(kě)達(dá)90%以上
，且不含(hán)有HIV-1，HBV，HCV，支原體(tǐ)，細菌，酵(jiào)母(mǔ)和真菌(jūn)等。